XXXX0629梅毒实验室诊断

检验科梅毒感染现状与实验室诊断检验科梅毒流行与防治介绍梅毒的实验室检测检验科全国梅毒流行现状检验科中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）年病例年发病率年均增长1999804066.50/10万200932743324.66/10万14.3%年病例年发病率年均增长19971090.53/10万20091075764.41/10万49.2%先天梅毒梅毒检验科MSM人群梅毒和HIV感染率梅毒螺旋体抗体与非梅毒螺旋体抗体检测阳性率0%2%4%6%8%10%12%14%2009201020112012时间（年）阳性率TRUSTTPAb宜昌地区梅毒螺旋体感染情况TPAbTRUST20094.24%(359/9315)5.09%(90/1767)20104.16%(497/12083)7.14%(153/2144)20113.65%(635/17416)6.45%(145/2262)20123.49%(388/10827)9.67%(122/1261)梅毒螺旋体抗体阳性患者性别分布0%10%20%30%40%50%60%2009201020112012时间（年）阳性率malefemale非梅毒螺旋体抗体阳性患者性别分布0%10%20%30%40%50%60%70%80%2009201020112012时间（年）阳性率malefemale梅毒螺旋体抗体阳性患者年龄分布图0%5%10%15%20%25%30%0-1415-3031-4041-5051-6060年龄段分布比例2009201020112012非梅毒螺旋体抗体阳性患者年龄分布图0%10%20%30%40%50%60%0-1415-3031-4041-5051-6060年龄段分布比例2009201020112012梅毒螺旋体抗体阳性患者来源分布0%10%20%30%40%50%60%70%2009201020112012时间（年）分布比例outpatientinpatient非梅毒螺旋体抗体阳性患者来源分布0%20%40%60%80%100%120%2009201020112012时间（年）分布比例outpatientinpatient检验科宜昌地区梅毒感染情况总结1.梅毒感染呈现逐年增多趋势2.女性多于男性3.年龄分布主要集中在20-40岁之间4.梅毒患者多来自门诊，但不自觉的现症感染者逐渐增加。梅毒预防与控制措施•广泛开展宣传教育，普及梅毒防治知识•开展综合防治，阻断梅毒传播•提高监测检测质量，开展主动检测，促进梅毒早期发现•提供规范化梅毒医疗服务•预防和控制先天梅毒•加强国际合作和应用性研究检验科中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）到2015年底实现以下目标梅毒预防和诊疗服务专业人员相关知识和技术标准掌握合格率达到85%；孕产期保健人员预防梅毒母婴传播相关知识和技术标准掌握合格率达到80%。到2020年底实现以下目标梅毒预防和诊疗服务专业人员相关知识和技术标准掌握合格率达到100%；孕产期保健人员预防梅毒母婴传播相关知识和技术标准掌握合格率达到90%。检验科筛查与检测制定和下发《梅毒实验室检测规范》梅毒检测三级实验室网络建立性病门诊的梅毒主动筛查HIV咨询检测服务中纳入梅毒筛查医疗机构主动提供的HIV检测咨询中的梅毒检测社区药物维持治疗门诊中的梅毒检测孕产妇梅毒筛查高危人群外展服务中的梅毒检测检验科梅毒流行与防治介绍梅毒的实验室检测检验科梅毒病原体小而纤细的螺旋状微生物长5～20μm，粗细0.2μm，有6～12个规则的螺旋基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕行动缓慢而有规律围绕其长轴旋转中前后移动伸缩其圈间之距离而移动全身弯曲如蛇行检验科传播途径性接触是主要的传染途径未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性随着病期的延长，传染性越来越小到感染后2年，通过性接触一般无传染性母婴传播在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染给胎儿病期越长，传染性越小;输血传染检验科梅毒的诊断梅毒的诊断早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隐性梅毒）必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义检验科常用梅毒实验室检测方法病原学检测血清学检测检验科病原学检查取材方法一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液暗视野显微镜、镀银染色法和直接荧光法在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。检验科病原学检查的临床意义病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。检验科梅毒血清学检测方法检验科问题Q1：实验室诊断梅毒的两类血清学检测方法是什么？Q2：为什么需要这两类血清学检测方法？检验科梅毒血清学检测分类1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）2.梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）检验科非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理（抗心磷脂抗体）：人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。主要是IgM和IgG混合抗体。检验科非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体产生时间感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周一般在感染后5～7周（或硬下疳出现后2～3周）产生。（郭红亮，《中外健康文摘》2010年第20期）抗体作用无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。Q3：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法检验科原理和方法反应原理抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见抗原基本成分心磷脂、卵磷脂和胆固醇方法包括：快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)不加热血清反应素(USR)甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）性病研究实验室试验(VDRL)等。检验科试验特点原理和成分与试验相同血清不需要灭活不需要显微镜观测结果可作定量试验有现成的试剂盒携带方便操作简单价格便宜检验科RPR/TRUST检测流程试验前期准备RPR仪(水平旋转仪器)必须滴！！试剂50μl移液器、吸头记号笔、废物缸工作服一次性手套、口罩、帽子生物安全柜检验科梅毒自动旋转仪检验科检测流程操作步骤：①将检测试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟。②测RPR自动旋转仪转速。③在RPR纸卡上编上相应的待检样本的编号。测速:100转/MIN（±2转）测旋转幅度:19mm检验科检测流程（定性）①加样：吸取50μl血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。②加抗原：将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗原。③反应：将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观察结果。检验科检测流程（定量）①稀释液准备：在圈内加入50μl生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。②加样：吸取50μl血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并涂布满整个圈内。③重复定性试验后两步。检验科检验科临床意义早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。一期梅毒1年后转为阴性二期梅毒2年后转为阴性。晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。检验科临床意义早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。【感染5～7周（或硬下疳出现后2～3周）】经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。检验科假阳性问题假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性①技术性假阳性由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。②生物学假阳性是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性检验科急性生物学假阳性反应的疾病风疹水痘传染性单核细胞增多症传染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹检验科慢性生物学假阳性反应的疾病系统性红斑狼疮自身免疫性溶血性贫血盘状红斑狼疮结节性多动脉炎类风湿性关节炎桥本氏甲状腺炎风湿性心脏病干燥综合征毒品瘾者慢性肾炎肝硬化老年麻风(是唯一产生慢性生物学假阳性的感染性疾病)检验科妊娠的假阳性反应这是一种生理情况下的生物学假阳性假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。检验科假阳性问题梅毒假阳性反应的处理技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。检验科前带现象原理指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果。处理将血清稀释后再进行试验。检验科血清固定耐血清性（血清固定）指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。检验科梅毒螺旋体抗原血清学试验检验科试验原理检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（IgG和IgM）。特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。Q3：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？检验科实验方法梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）化学发光免疫分析法（CLIA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）检验科TPPA/TPHATPPA试验原理与TPHA试验基本相同TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞特点梅毒螺旋体全抗原检验科TPPA原理示意图检验科荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）原理将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。检验科检验科TP-ELISA原理用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。特点本法可用于大规模血清检测。免疫层析检验科临床应用梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性。一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。检验科方法特点特异性强，敏感性高很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，有1%的生物学假阳性发生。①如系统性红斑狼疮患者血清可使FTA-ABS试验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。②传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使TPHA呈假阳性。③麻风患者也可使特异试验呈阳性。检验科临床意义作为RPR初筛阳性标本的确证试验。不能作为疗效观察的指标。阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合RPR结果进行诊断。检验科假阳性问题存在交叉反应的抗体处理方法：用Reiter株吸收血清中交叉反应的抗体。检验科老年人抗体阳性的问题1、真阳性2、假阳性：这些老年患者所患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和/或抗T.pallidum抗体的交叉抗原；检验科梅毒血清学试验结果解释梅毒血清学试验结果的