食品中亚硝酸盐的测定

食品中亚硝酸盐的测定（分光光度法）一、实验目的1.明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准。2.掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，最大吸收波长538nm下测吸光度值A,与标准系列比较定量。三、仪器1.722分光光度计若干，提前20min打开预热2.组织绞碎机，菜刀，砧板1-2套3.50mL烧杯500mL烧杯3L大烧杯2个/组1个/组2个4.电炉2个5.托盘天平1个/组6.200mL容量瓶500mL容量瓶1个1个/组7.恒温水浴锅1-2个8.25mL具塞比色管11个/组9.滴管，漏斗，滤纸，吸小球，1个/组10.玻璃棒，温度计，标记笔，标签纸若干四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。）1.亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾[K4Fe6(CN)·3H2O]，用水溶解后，稀释至1000mL。分装，1瓶/大组2．乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3C00)2·2H20]，加3mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。分装，1瓶/大组3、饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100mL热水中，冷却后备用。分装，1瓶/大组4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。分装，1瓶/大组5、盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中，避光保存。有致癌作用分装，1瓶/大组6、亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每ml相当于200µg亚硝酸钠。分装，1瓶/大组7、亚硝酸钠标准使用液（0.2µg/mL）：临用前，吸取5.00mL0.2g/L亚硝酸钠标准溶液，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每mL相当于5µg亚硝酸钠。分装，1瓶/大组8.蒸馏水1瓶/组五、实验步骤1、样品的处理：（1）取样：准确称取5.0g经绞碎、混匀的样品，置于50mL烧杯中。（2）沉淀蛋白质：①加12.5mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将样品洗入500mL容量瓶中，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。②一面转动一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质（3）过滤：加水定容，放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。2标准曲线的绘制和样品的测定取10个25ml具塞比色管，标号，按下列步骤操作：管号012345678样标准溶液（ml）0.000.100.200.300.400.500.751.001.2520.00相当亚硝酸钠（µg）0.000.501.001.502.002.503.755.006.25对氨基苯磺酸（ml）各管均加1ml（混匀，静置3-5min）盐酸萘乙二胺（ml）各管均加0.5ml加水至刻度（25ml)，混匀，静置15min，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度A，绘制标准曲线。同时做试剂空白。上层脂肪用滴管吸除。六、数据记录管号012345678样液试剂空白A538七、数据处理按下式计算：AX=———————×1000v2m×——×1000V1式中:X—试样中亚硝酸盐的含量，mg/kg；V1—试样处理液总体积，mL；V2—测定用样液体积，mL；m—试样质量，g；A—试样测定液中亚硝酸盐的质量，µg；部分食品中亚硝酸盐的限量标准（以NaNO2计）品名限量标准mg/kg食盐（精盐）、牛乳粉≤2香肠（腊肠）香肚、酱腌菜、广式腊肉≤20鲜肉类、鲜鱼类、粮食≤3肉制品、火腿肠、灌肠类≤30蔬菜≤4其他肉类罐头、其他腌制罐头≤50婴儿配方乳粉、鲜蛋类≤5西式蒸煮、烟熏火腿及罐头、西式火腿罐头≤70八、注意事项1、盐酸萘乙二胺有致癌作用2、显色后稳定性与室温有关，一般显色温度为15~30℃时，在20~30min内比结果保留2位有效数字。色为好。3、硼砂饱和液的作用：①吸收亚硝酸盐的NO2，使亚硝酸盐的总量不会因加热而减少；②蛋白质沉淀剂。4、亚铁氰化钾溶液和乙酸锌（可用硫酸锌代替）作用：蛋白质沉淀剂。原因：亚铁氰化钾溶液和乙酸锌反应，生成亚铁氰化锌沉淀，从而与蛋白共沉淀。5、清液用滤纸过滤后，要弃去初滤液30ml。原因：滤纸中含有少量铵盐，弃去初滤液是为了除去滤纸中铵盐的干扰。九、讨论