食品理化检验 化学性食物中毒的快速检测

LOGO食品理化检验食品科学学院龚玉石LOGO化学性食物中毒的快速检测【掌握】食物中毒的定义毒物快速鉴定的程序水溶性毒物的提取方法，格氏法快速检验亚硝酸盐的原理和方法挥发性毒物的分离方法，氰化物的毒性和采样要点，普鲁士蓝法快速鉴定氰化物的原理和操作要点斯-奥氏法的原理和操作要点雷因许氏法快速鉴定有机磷农药的原理和方法河豚毒素的毒性及其快速鉴定的方法【熟悉】化学性毒物的分类不挥发性毒物的分类和提取分离方法，简易提取法，巴比妥类及生物碱类毒物的特点及检验方法确证汞、砷的试验方法，钡的快速检验法常见灭鼠药的性质及快速鉴定方法快速鉴定毒蕈的方法【了解】亚硝酸盐中毒的特点常见挥发性毒物的种类，苦味酸试纸法和对硝基甲醛法金属毒物引起食物中毒的概况农药中毒的概况，鼠药中毒的概况河豚毒素的毒性快速检验食物中毒的方法，有毒动植物中毒的概况LOGO主要内容水溶性毒物1挥发性毒物2灭鼠药6不挥发性有机毒物3金属毒物4农药5有毒动植物7LOGO化学性食物中毒的概念是指摄入了含有化学性有毒有害物质的食品或者把有毒有害物质当作食品摄入后出现的非传染性的，以急性或亚急性中毒症状为主的疾病。LOGO1、发病快。潜伏期较短，多以急性胃肠炎症状为主；2、中毒程度严重，病程长，发病率和死亡率较高。3、季节性和地区性均不明显，中毒食品无特异性，多为误食或食入被化学物质污染的食品而引起，其偶然性较大。化学性食物中毒的特征LOGO例：保管不当，误食LOGO化学性食物中毒快速检验定义：是指当发生化学性食物中毒时，采用一系列快速检测方法进行的毒物定性或半定量分析。目的：是尽快查明中毒原因，为中毒应急处理和救治提供科学依据。LOGO毒物的分类按毒理学、毒物化学分按毒物化学分：挥发性：氰化物、甲醇、苯酚等水溶性：强酸、强碱、亚硝酸盐等金属：砷、汞、钡、硒、镉、铬等不挥发性有机毒物：催眠药、兴奋剂、致幻剂、生物碱、强心甙等；LOGO毒物的分类按毒物化学分：农药和灭鼠药：有机磷、氨基甲酸酯类，拟除虫菊酯类农药；毒鼠强、氟乙酰胺等灭鼠药；动植物毒性成分：河豚毒素、毒蕈毒素、桐油酸等。LOGO化学性食物中毒快速检验的程序1、了解中毒情况询问：时间、原因、人数、临床症状和体征、用过何种食物、同食者症状、采取的措施和效果初步确定可疑食物、可疑毒物、采样点和方法LOGO2、样品采集采集原则：部位—取样—样品种类采样量：3倍原则保存和运输：尽快；低温采样者的自身防护：服装、器具化学性食物中毒快速检验的程序样品的分类样品样品≥0.5Kg≥500ml≥0.5Kg≥500ml≥0.5Kg≥500ml检样原始样品平均样品试验样品复检样品保留样品2-4kg2-4LLOGO3、检验和结论：定性或半定量检验应同时做空白对照和阳性对照用两种以上方法确认形态分析结论为阴性/阳性化学性食物中毒快速检验的程序LOGO试纸法固体试剂法试管法溶液法仪器测定法利用被测毒物的物理化学性质制成速测卡、速测箱等小型仪器。待测物与试剂反应生成有色化合物比色定性半定量化学性食物中毒快速检验方法LOGO水溶性毒物的快速检验分离提取1、水浸法：捣碎/匀质→水浸加热→过滤/离心→滤液/上清液2、透析法：无机化合物或小分子有机物可以自由通过半透膜LOGO亚硝酸盐的快速检验主要指亚硝酸钠和亚硝酸钾外观和滋味似食盐（且比食盐淡），在食品企业，易误食引起中毒中毒机理：亚硝酸盐能使血液中正常携氧的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，因而失去携氧能力而引起组织缺氧LOGO亚硝酸盐食物中毒快速检验方法格氏法原理：样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。格氏试剂将所用试剂按比例混合配成的粉状试剂LOGO联苯胺-冰乙酸法原理：利用亚硝酸盐在酸性溶液中将联苯胺重氮化，然后水解并氧化成红色的联苯醌，在白色点滴板上进行颜色反应，观察有无紫红色产生，以检验亚硝酸盐的存在。亚硝酸盐食物中毒快速检验方法LOGO挥发性毒物的快速检测挥发性毒物的分离沸点低、蒸汽压高的蒸馏法/扩散法/顶空法沸点高、难溶于水的水蒸气蒸馏法LOGO氰化物的快速检验氢氰酸、氰化钾和氰化钠等氰化物的采样：应加碱固定后密封，并尽快测定（氢氰酸易水解和与醛反应P213）苦味酸试纸法普鲁士蓝法对硝基苯甲醛法快速检验法苦味酸试纸法原理：氰化物遇酸产生氢氰酸，氢氰酸与苦味酸在弱碱条件下作用生成红色异氰紫酸钠。干扰物：硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐LOGO原理：氰离子在碱性条件下，与硫酸亚铁作用，生成亚铁氰络盐，酸化后与高铁离子反应生成蓝色的普鲁士蓝。CN-＋H+→HCN↑5HCN+6NaOH+FeSO4→Na4[Fe(CN)6]+6H2O+Na2SO4]3Fe(CN)64-+4Fe3+→Fe4[Fe(CN)6]3↓普鲁士蓝法对硝基苯甲醛法原理：氰根离子催化对-硝基苯甲醛缩合反应，生成4，4-二硝基安息香，该物质在碱性条件下生成4，4-硝基安息香红色醌式化合物。注意：灵敏度高，易产生假阳性，应结合空白试验和其他检验方法来判断结果。LOGO不挥发性有机毒物的快速检验不挥发性有机毒物按其性质可分为酸性有机毒物：巴比妥类安眠药碱性有机毒物：马钱子碱、阿托品等两性有机毒物：吗啡中性有机毒物：难溶于水而溶于有机溶剂，如安眠酮、眠尔通等。LOGO不挥发性有机毒物的分离提取斯-奥氏法：适用于各类不挥发性有机毒物的分离提取。使用条件：当分析目标不够明确，或疑有多种理化性质不同的毒物存在。斯-奥氏法原理样品酸化后用乙醇浸泡，各类不挥发性毒物均能溶于酸性乙醇，而纤维素，脂肪，蛋白质，淀粉，糖类及无机物等杂质基本上不溶于酸性乙醇，将上步提取物再用无水乙醇处理几次，杂质基本被除去。基本除去杂质的提取物残渣加水溶解，由于水溶液为呈弱酸性，碱性、两性、酸性和中性的有机毒物均溶于弱酸性水中，用有机溶剂提取出酸性和中性。水溶液再变为碱性，有机溶剂将碱性有机物提取出，再控制水溶液的pH范围，两性有机物被提取出来。LOGO原理及步骤①酸性乙醇提取使不挥发性毒物溶入乙醇中，而“杂质”不溶。②无水乙醇处理，进一步去除“杂质”，挥干乙醇，残渣加水溶解，得弱酸性水溶液。③用乙醚从弱酸性水溶液中提出酸性和中性有机毒物酸性和中性毒物的乙醚溶液碱性和两性的弱酸水溶液LOGO④提取碱性有机毒物：经乙醚提后的“3”水溶液，用5%NaOH碱化、乙醚或氯仿萃取⑤提两性有机毒物：将“4”提取碱性毒物后的水溶液，用10%盐酸中和后，再调pH至8～8.5，加氯仿-乙醇萃取，两性毒物进入氯仿层原理及步骤碱性和两性的弱酸水溶液LOGO⑥将“3”步提取的有机溶液，用5%NaOH提两次，酸性有机毒物进入碱液，中性毒物在有机相中⑦将碱性水溶液酸化，有机溶剂提出酸性毒物原理及步骤酸性和中性毒物的乙醚溶液LOGO简易提取法（P215）适宜于含杂质少的样品提取食物样品乙酸酸化乙醚提取醚层（酸性和中性有机毒物）水层加氢氧化钠乙醚提取醚层（碱性有机毒物）水层加盐酸中和后加氨水至弱碱性用三氯甲烷-乙醇（9+1）提取三氯甲烷层（两性有机毒物）乙醇-水层（弃去）LOGO包括巴比妥、苯巴比妥等毒性：对中枢神经系统的抑制作用，抑制延脑的呼吸中枢及血管运动中枢中毒症状：尸体皮肤呈青紫色，唇、颜面、指甲呈淡蓝色，尸斑明显，各脏器充血，肺水肿等。巴比妥类安眠药的快速检验硝酸钴法薄层色谱法检验方法LOGO硝酸钴法巴比妥类药物在在碱性溶液中可与钴盐应，生成紫堇色配位化合物，可用于本类药物的鉴别和含量测定．样品在酸性介质中以有机溶剂提取，挥干溶剂，加入硝酸钴的无水乙醇溶液，再挥干，放在氨水瓶口熏，如出现紫堇色为阳性，如为绿色或黄绿色则为阴性。LOGO薄层色谱法由于巴比妥类安眠药互相间存在结构的差异，所以，在薄层色谱中，用硝酸汞（或硫酸汞）和二苯卡巴腙醇溶液作显色剂显色后，与标准比较，以斑点的颜色和Rf值定性。LOGO生物碱类的快速检验大多数生物碱均几乎不溶或难溶于水能溶于氯仿、乙醚、酒精、丙酮、苯等有机溶剂能溶于稀酸的的水溶液而成盐类生物碱的盐类大多溶于水常见的生物碱有马钱子碱、阿托品、吗啡等。LOGO与生物碱沉淀剂生成难溶于水的有色沉淀常用生物碱沉淀剂常见生物碱的沉淀反应见书P216，表13-1酸类苦味酸磷钨酸磷钼酸金属与碘的配合物碘化汞钾K2[HgI4]碘化铋钾BiI3·4KI碘-碘化钾I-KI生物碱类的快速检验—沉淀反应LOGO注意：1.反应为阴性时，可以否定生物碱的存在；为阳性则不能完全肯定是生物碱2.各种生物碱沉淀剂对不同生物碱的沉淀反应灵敏度不同，需经3种以上试剂反应均呈阴性才能否定生物碱存在3.碘化汞钾试剂与生物碱生成的沉淀可溶于过量的试剂中，故应逐滴加入试剂。LOGO生物碱矾硫酸钼硫酸甲醛硫酸硝硫酸马钱子碱蓝紫无色无色加热变棕淡黄色吗啡红变蓝紫紫色紫色红色乌头碱淡棕变橙黄棕色无色紫色阿托品红变黄无色微棕色无色生物碱类的快速检验—颜色反应LOGO该法不必将生物碱的盐类转化成游离碱，并可同时检测数种生物碱可用强碱性试剂展开，展开后可先观察有无荧光斑点；显色后，用生物碱的斑点颜色和Rf值定性生物碱类的快速检验—薄层色谱法LOGO砷、汞、钡、铬、锰金属毒物进入人体后，易与体内蛋白质结合，生成难解离的金属蛋白化合物金属毒物的快速检验LOGO雷因许氏预试验适用范围：砷、汞快速检验的定性试验原理：金属铜在盐酸溶液中，能使砷、汞等金属还原成元素状态或生成铜的合金而沉淀于铜的表面，显不同颜色和光泽。方法与步骤灰（黑）砷化物银白汞化物样品+盐酸+氯化亚锡小火加热0.5h，取出用水、乙醇、丙酮洗净，晾干，观察颜色铜丝干燥，紫红色；潮湿，绿色说明：本法最低检出限汞为100µg，砷为10µg盐酸浓度在0.5~2mol/L，注意保持酸度氯化亚锡将5+砷还原为3+砷，加速反应先消化排除蛋白质和脂肪等硫化物、硫酸盐也能使铜丝变黑，样品加盐酸并加热以去除硫化氢和二氧化硫，再放入铜丝LOGO砷的确证试验升华法：加热上述铜丝变红，显微镜下观察有无升华物以及升华物的晶体形状，如有四面体或八面体闪光的结晶则确定砷化物存在，必须结合对照实验进行。LOGO砷的确证试验砷斑法：在酸性溶液中，砷化物可被锌还原为砷化氢气体，遇溴化汞试纸生成黄至褐色的砷斑。锑化物、磷化物、干扰砷测定。将变色溴化汞试纸在盐酸雾气中熏10分钟，锑斑退色，砷斑不变。将变色溴化汞试纸在氨水瓶口熏，砷斑变黑，磷斑不变。LOGO汞的确证试验升华法：取雷因许氏预试验阳性反应的铜丝，按砷的确证实验升华法同样操作，显微镜下观察，如呈现黑色光亮小圆球，表示有汞存在。碘化亚铜法：碘化亚铜与汞作用，生成橙红色Cu2HgI4。LOGO钡的快速检验方法：硫酸钡沉淀和玫瑰红酸钡沉淀法。硫酸钡沉淀法原理：硫酸钡沉淀即不溶于任何酸，也不溶于乙醇，可用于检验钡离子的存在。玫瑰红酸钡沉淀法原理：在中性介质中，钡离子与玫瑰红酸钠才能形成稳定的红色沉淀。LOGO常用农药有机氯农药有机磷农药氨基甲酸酯类拟除虫菊酯类引起食物中毒的农药主要是有机磷农药农药的快速检测LOGO属磷酸酯及硫代磷酸酯类化合物有机磷农药的结构LOGO有机磷农药的快速筛选有机磷农药的特性及测定方法抑制胆碱酯酶活性定性、半定量和快速筛选：根据酶化学法的原理制成试纸或速测卡确证：化学法、薄层色谱法或气相色谱法LOGO胆碱酯酶可使氯化乙酰胆碱水解生成乙酸，溶液酸性增加，pH＜6.0。但是有机磷能抑制血清中胆碱酯酶的活性，使氯化乙酸胆碱不能水解生成乙酸。指示剂：溴百里酚蓝pH＜6.0黄色无有机磷农药pH＞7.6蓝色有有机磷农药试纸法LOGO原理：胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，则没有蓝色产物产生。速测卡法胆碱酯酶靛酚乙酸酯样品两端叠合，37℃，3min：白色端不变色，阳性白色端变为天蓝色，阴性LOGO白色端加