章 分子生物学的研究方法-基因定点诱变

西北师范大学第五章分子生物学研究的主要方法---生命科学院分子生物学第四节基因定点诱变2.4.1盒式诱变利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段取代野生型基因中的相应序列.返回目录返回第二章西北师范大学第五章分子生物学研究的主要方法---生命科学院分子生物学2.4.2寡核苷酸引物诱变使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物,启动单链DNA分子进行复制，随后这段寡核苷酸引物便成为了新合成DNA子链的一个组成部分。西北师范大学第五章分子生物学研究的主要方法---生命科学院分子生物学寡核苷酸引物诱变过程正链DNA合成突变引物合成异源双链DNA分子制备闭环异源双链DNA分子富集转化突变体筛选寡核苷酸引物诱变法的局限性异源双链DNA分子并非真正异源突变体子代中突变碱基被错配修复体系修复西北师范大学第五章分子生物学研究的主要方法---生命科学院分子生物学提高寡核苷酸引物诱变突变效率的方法(1)Kunkel定点诱变法:1985年由T.A.Kunkel发明ung:尿嘧啶脱糖苷酶西北师范大学第五章分子生物学研究的主要方法---生命科学院分子生物学(2)硫代磷酸诱变法:已知有些限制酶不能切割硫代磷酸DNA分子．在异源双链DNA分子制备时，加入硫代核苷酸，使之掺入突变链中．然后用前述酶切割，并用外切酶局部消化后，进行聚合反应，从而产生具有定点突变的异源双链DNA西北师范大学第五章分子生物学研究的主要方法---生命科学院分子生物学2.4.３ＰＣＲ诱变(1)重组PCR定点诱变:克服寡核苷酸引物诱变能力仅限于5’端.特点:经3轮PCR反应,一对互补的带有突变碱基的内侧引物和2个外侧引物西北师范大学第五章分子生物学研究的主要方法---生命科学院分子生物学(2)大引物诱变:核心是第一轮PCR产物为第二轮PCR引物西北师范大学第五章分子生物学研究的主要方法---生命科学院分子生物学返回目录返回第二章