移液管和加样枪的使用

生物化学课程网站•访问路径:“三峡大学”-“求索学堂”-“课程总揽”-“医学院”-“生物化学与分子生物学”-“医用生物化学”•网站内有理论课和实验课的教学大纲、教案ppt、习题和考试样卷等，根据需要下载学习生化实验室规章制度和实验要求1.准时到实验室，不迟到，不早退。进入实验室须穿实验服。2.保持环境的肃静，不高声说话，严禁用器械及动物开玩笑。3.严格按操作规程使用仪器，仪器发生故障、损坏、丢失时，应立即报告老师，凡违反操作规程而损坏仪器者，要追究责任。4.认真观察实验现象并记录好原始数据；节约试剂，节约水电。5.实验完毕，洗净所用器材，合理处理固体舍弃物和废液。经指导教师同意，方能离开实验室。6.值日生负责实验室卫生，关好水、电、门窗，经教师检查后方可离开。试剂使用1.仔细辨认标签，确定所需试剂及浓度。2.吸量管与所需试剂号码务必对准。3.用后盖好瓶盖，归还原处，以免影响他人使用。本学期实验内容1刻度吸管、可调式移液器的校正与误差分析-教师讲解2分光光度法测定物质的浓度-教师讲解3血清碱性磷酸酶活性测定：1、2、3组讲演4血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离：4、5、6组讲演5血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳：1、2、36酶的竞争性抑制：4、5、67血糖测定：1、2、38血清谷丙转氨酶(GPT)活性测定：4、5、69质粒DNA的提取：1、2、310DNA的琼脂糖凝胶电泳分析：4、5、6,实验总结：1-6组实验课教学改革•改革方案：前2次实验由老师讲解，从第3次实验开始，同学们参与实验教学，担任“小老师”，具体安排如下：–本实验室共分为6个小组，每组4~5人，各组推选1名组长；–第3个实验，由1、2、3组各自准备与本次实验内容相关的ppt，并各选派1位同学讲演，每位同学讲演时间10~12分钟，讲演结束后为自由提问、讨论和老师点评时间（30分钟）；–第4个实验，由4、5、6组进行ppt准备和发言，方法同上；–第5-10个实验依次类推；–注意：每次的ppt准备需全小组同学共同参与，但由小组内的不同同学发言，做到每个同学都有发言机会；–ppt制作（包括材料的收集准备、内容的条理性和演示效果等）、每个同学的讲演（内容的熟悉程度、讲解的条例性、对同学问题的回答情况）、回答问题、团队合作都将计入实验成绩。实验成绩计算方法•实验成绩占生化总成绩的35%•实验成绩–考勤：10%–实验报告：20%–操作：30%–ppt制作、讲演、回答问题情况：40%•自评：每次讲演完后，各组评出自己组内的前两名•互评：非讲演组（如4、5、6组）给讲演组（如1、2、3组）分别从ppt制作、讲演、回答问题、团队合作方面进行排序•教师评价：教师从ppt制作、讲演、回答问题、团队合作等方面对讲演组进行评价，提出表扬和改进意见等实验评分标准–考勤：•迟到扣10分；旷课为0分–操作：•不穿白大褂，-10分•不带实验教材，-10分•没有预先预习实验，-10分•实验操作不规范，-5分•过失造成玻璃器皿损坏，-5分•过失造成仪器损坏，-10分•没有清洗玻璃器皿和还原仪器，-10分•没做清洁，-10分•实验报告:–没有实验目的，-5分–没有实验原理，-5分–没有实验过程，-10分–涂改实验数据，-20分–没有分析与实验讨论，-15分–没有报告临床意义，-5分刻度吸管&微量可调式移液器的使用、校正与数据处理彭帆E-mail:[e-mail]:13972604407Officetel:0717-6396818生物化学基本实验技能训练（一）实验目的•清楚生物化学实验室规章制度和实验要求•掌握刻度吸管的分类和使用方法•掌握微量可调式移液器的原理和使用方法，了解可调式移液器的校正方法•建立实验误差、准确度和精确度的概念，掌握误差分析计算方法问题：将溶液从一容器转移到另一个容器。用什么量具？如何确定容量？是否精准？一、刻度吸管(pipette)的分类和操作•分类：10mL,5mL,2mL,1mL,0.5mL,0.2mL,0.1mL(吹?)刻度吸管的操作方法1．使用前：检查刻度吸管是否配套。2．吸液：排→插→吸→按3．调节液面：放→靠4．放出溶液：靠→放→停；*若吸管上标有“吹”，则需将管内残余液体吹出。工欲善其事，必先利其器微量可调式移液器(俗称“加样枪”)的构造和操作•5mL移液器(1-5mL)•1mL移液器(200-1000uL)•200uL移液器(20-200uL)•100uL移液器(20-100uL)•10uL移液器(0.5-10uL)•2uL移液器(0.1-2uL)微量可调式移液器的构造扭动转轴，可调整移液器容量手指把手吸头的排出器容量指示窗口吸头排出器套筒吸头圆锥体加样枪的操作方法1.容量调节：选定加样枪，调定所需容量读数。*请勿将按钮旋出量程以外！！！2.枪头装配:将加样枪垂直插入枪头中，稍用力左右转动使其紧密结合。*请勿使劲敲击枪头盒！！！4．放出溶液：按1st→按2nd→松3.吸液：按1st→插→松→靠(a)StartDispensing(b)1stStop=Dispense(c)2ndStop=Expel5．弃去枪头：按排注意事项•加样枪的正确放置当加样枪的枪头里有液体时，应垂直放置加样枪。•维护保养不使用时，把加样枪的量程调至最大刻度；定期清洗移液枪(肥皂水或60％异丙醇+蒸馏水+自然晾干)；重复称量蒸馏水进行校准，环境温度为20-25℃。问题•获得实验数据后，所得数据是否准确？可靠性如何？如何正确记录与处理实验数据？三、实验结果的数据处理准确度:分析结果与真值的接近程度,用误差表示.误差:测定结果(X)与真实值(XT)之间的差值.–系统误差:–偶然误差:–绝对误差(Absoluteerror):E=X-XT–相对误差(Relativeerror):100%rTEEX准确度与误差(Accuracy&Error)系统误差:由于分析过程中某些固定的原因造成的误差.1.性质：（1）单向性、重复性（2）与测定次数无关（3）可以校正，大小、正负可以测定2.产生原因：（1）方法误差（2）仪器和试剂误差（3）操作误差（4）主观误差3.校正：改变方法，校正仪器，采用高等级试剂等。偶然误差1、性质:（1）大小可变（2）方向不定，有时正、有时负。（3）只能减小，不能消除。2、产生原因：温度、气压、湿度、仪器性能、人为的终点判断的变化等。3、校正：不能消除，只有增加平行实验次数.精密度与偏差(Precision&Deviation)精密度:在相同条件下,各次分析结果间的接近程度，用偏差表示.•偏差:测定结果(X)与平均值()之间的差值.–偏差小,表示数据集中,精密度高;反之,数据分散,精密度低.–偶然误差影响分析结果的精密度.X绝对偏差(Absolutedeviation,di)：di=单个测量值(Xi)-平均值()相对偏差(Relativedeviation,dr)：均值:X=nxxxn21X100%irddX标准偏差(Standarddeviation，SDorS)相对标准偏差(RelativeStandardDeviation,RSD)，又称变异系数(CoefficientofVariation,CV)%100XSCV？？准确度和精确度BothaccurateandprecisePrecisebutnotaccurateNeitheraccuratenorprecise问题•当你把微量可调式移液器容量设定在100ul并把液体从试剂瓶转移到了试管。你是否确定所转移的液体体积就是100ul？•如果所转移的液体体积与标示量不符，如何校正？体积准确度（平均误差）精确度（重现性）ul误差（uL）误差（％）S.D.（uL）R.S.D.（uL）P202±0.1±5.0≤0.03≤1.55±0.1±2.0≤0.04≤0.8010±0.1±1.0≤0.05≤0.5020±0.2±1.0≤0.06≤0.30P10020±0.35±1.8≤0.10≤0.550±0.40±0.8≤0.12≤0.24100±0.80±0.8≤0.15≤0.15P20050±0.5±1.0≤0.20≤0.40100±0.8±0.8≤0.25≤0.25200±1.6±0.8≤0.30≤0.15P1000200±3±1.5≤0.60≤1.30500±4±0.8≤1.0≤0.201000±8±0.8≤1.5≤0.15移液器的准确度与精确度微量可调式移液器系统误差的校正•校准方法？•必须考虑的环境与仪器的影响因素？–温度、湿度、天平的精度、水的纯度等•如何消除偶然误差的影响？实验步骤一、刻度吸管的操作：选择5mL、2mL的刻度吸管，按照教师要求，把相应体积的ddH2O移取到烧杯中，称重。重复该步骤3次。二、微量可调式移液器的操作：选择1000L、200L的微量可调式移液器，按照教师要求，把相应体积的ddH2O移取到烧杯中，称重。重复该步骤3次。实验结果刻度吸管真值(mL)次数123456测量值(g)计算体积(mL)平均值(mL)SD校正值微量可调式移液管真值(uL)次数123456测量值(g)计算体积(uL)平均值(uL)SD校正值DensityofwateratdifferenttemperatureT(0C)Density(g/cm3)T(0C)Density(g/cm3)T(0C)Density(g/cm3)00.999868120.999525240.99732610.999927130.999404250.99707420.999968140.999271260.99681330.999992150.999126270.99654241.000000160.998970280.99626250.999992170.998802290.99597360.999968180.998623300.99567670.999929190.998433310.99536980.999876200.998232320.99505490.999869210.998021330.994731100.999728220.997799340.994399110.999632230.997567350.994059讨论•结合本人和本组的实验结果，分析移液管和微量可调式移液器的准确度和精确度。•为减小误差，在操作中要注意哪些方面？