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畜禽血常规检验（一）临床兽医学教研室内诊组2012年4月西南大学荣昌校区内容实验目的与要求1血样的采取与抗凝2血细胞计数检查3西南大学荣昌校区目的与要求掌握动物血样的采取与抗凝方法。掌握血红蛋白测定、红细胞及白细胞计数的操作方法与注意事项。西南大学荣昌校区一、血样的采取与抗凝1、血样的采取①采血前的准备：采血用应事先消毒灭菌、干燥处理。采血部位应剪毛按常规消毒。②少量用血，一般可在耳尖、冠顶及静脉末梢等处进行采取。③多量用血，大动物可在颈静脉处进行采取；猪可在前腔静脉处采取；禽类在翅内静脉处采取，必要时可进行心脏穿刺采取。小动物一般采用心脏采血。西南大学荣昌校区各种动物的采血部位采血部位畜种采血部位畜种颈静脉马、牛、羊耳静脉猪、羊、犬、猫、实验动物前腔静脉猪翼下肱静脉家禽隐静脉犬、猫、羊蹼间静脉鸭、鹅前肢头静脉犬、猫、猪冠或肉髯鸡心脏兔、家禽、豚鼠断尾猪、实验动物西南大学荣昌校区西南大学荣昌校区2、血样的抗凝兽医临床常用的抗凝剂、使用方法及用图，见下表。抗凝剂抗凝机制常用浓度使用方法用途肝素阻止凝血酶元转化为凝血酶而阻止血凝0.5～1%溶液配制后应及时使用，每10ml血液加入0.1～0.2ml。适用于多数血液实验诊断检验，不宜用于血涂片检查。柠檬酸钠（枸橼酸钠）与钙离子形成非离子的可溶性化合物而阻止血凝3.8%溶液每10ml血液加入1ml。适用于红细胞沉降率、输血用抗凝，但不宜用于血液生化指标测定。EDTA-Na2螯合血中钙离子而阻止血凝10%溶液每10ml血液加入0.1～0.2ml。适用与一般血液学检查，不宜用于钠、钙的测定。草酸盐合剂（草酸铵＋草酸钾）与钙离子结合，形成不溶解的草酸钙而阻止血凝1～2%的草酸盐溶液取此液先作抗凝瓶。1ml此液可抗凝10ml血样（制作抗凝瓶应小于80℃）。有毒不能用于输血的抗凝，不宜用于白细胞分类计数与血小板计数。肝素西南大学荣昌校区血液学检查项目与采血后可保存的时间检查项目保存时间（h）检查项目保存时间（h）白细胞计数2～3血红蛋白含量48红细胞计数24红细胞压积容量24血小板计数1红细胞沉降速率2～3网织红细胞计数2～3白细胞分类计数1～2西南大学荣昌校区二、红细胞计数（RBC）：显微镜计数法1、原理血液经200倍稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每升血液中的红细胞数。2、器材与试剂改良纽巴氏计数板、盖玻片、沙利氏吸管、5ml吸管、试管、小玻棒、显微镜、计数器、0.85%氯化钠稀释液。西南大学荣昌校区3、方法①用5毫升吸管准确吸稀释液2毫升于试管中，用沙利氏吸管吸取血样10微升，用脱脂棉擦去沙利氏吸管外壁多余的血液后插入试管底部，轻轻压出血液于稀释液中，再用上清液吸、吹数次，以洗出沙利氏管内黏附的血细胞，充分混匀后备用。②将稀释后的血样用小玻棒取一滴，置于计数板与盖玻片交界的边缘，让其自然浸入，使稀释血样扩散入计数室内，静置2～3分钟，镜检。③计数时用低倍镜，依次计数中央大方格内的四角和正中5个中方格，共80个小方格的红细胞数。为避免重复和遗漏，计数时应按一定顺序进行。注意压在双线上的红细胞，遵守“数左不数右，数上不数下”计数法则。西南大学荣昌校区4、计算方法每mm3血液内红细胞总数=5个中方格内红细胞数×5×10×200×106=5个中方格内红细胞数×1010单位：个/升式中×5—5个中方格换算成1个大方格×10—1个大方格容积为0.1微升，换算成1.0微升×200—血液的稀释倍数×106—由微升换算成升注意防凝、防溶、取样正确。西南大学荣昌校区5、正常参考值健康动物除山羊的红细胞数较多外，其他动物的红细胞数约为6.0×1012～8.0×1012/L。6、临床意义①相对增多：脱水、急性胃肠炎、肠便秘、渗出性胸膜炎、渗出性腹膜炎、某些传染病；②绝对增多：红细胞增多症，见于代偿性机能不全的心脏病及慢性肺部疾病；③减少：各种贫血、出血性、溶血性、骨髓造血功能不全性贫血、营养不良性贫血、继发性贫血。西南大学荣昌校区三、白细胞计数（WBC）：显微镜计数法1、原理：用白细胞稀释液破坏红细胞后，混匀充入计数池中，在显微镜下计数一定容积中的白细胞数，经换算求得每升血液中的白细胞总数。2、试剂与设备：改良纽巴氏计数板、盖玻片、沙利氏吸管、1ml吸管、试管、小玻棒、显微镜、计数器、白细胞稀释液（2%冰醋酸溶液或1%盐酸溶液）。西南大学荣昌校区3、方法：用1毫升移液管吸取白细胞稀释液0.4毫升于小试管中，再用沙利氏吸管吸取血样至20微升处，用脱脂棉擦去吸管周围多余血液，然后将吸管插入小试管底部，缓慢放出血液后用上清液反复吹洗数次，以洗净管内所粘附的血液，充分混匀振荡，备用。取样与计数方法与红细胞计数方法相同，计数在计数室四角的四个大方格内的白细胞数。西南大学荣昌校区4、计算方法：每升血液内白细胞总数=四个大方格白细胞数÷4×10×20×106单位：个/升5、注意事项：初学者容易把尘埃异物与白细胞混淆，可用高倍镜观察，白细胞有细胞核的结构，而尘埃异物的形状不规则，无细胞结构。西南大学荣昌校区5、正常参考值（附后表）6、临床意义①增多：细菌性感染、炎症、白血病、恶性肿瘤、中毒性疾病。②减少：病毒性传染病、犬瘟热、猫泛白血病减少症、各种疾病晚期;再生障碍性贫血;药物性降低：磺胺类、氯霉素、青霉素、链霉素、氨基比林、水杨酸钠等;血液原虫病、血液孢子病。西南大学荣昌校区各种健康动物血红蛋白数、红细胞数及白细胞数参考值动物Hb/(g·L-1)RBC/(1012·L-1)WBC/(109·L-1)水牛123.0±16.65.91±0.988.04±0.30黄牛95.5±10.07.24±1.578.43±2.08乳牛83.7±7.05.97±0.869.41±2.13绵羊92.6±5.18.42±1.208.45±1.90山羊118.0±10.315.23±1.0312.47±0.90猪112.3±13.75.51±0.3114.02±0.93犬133.6±13.56.57±0.3410.93±1.29鸡84.9±30.43.04±0.28/资料见：安丽英编著.兽医实验诊断.中国农业大学出版社.2000年:25.西南大学荣昌校区西南大学荣昌校区西南大学荣昌校区全自动血液细胞分析仪检验动物种类多有12种动物检测模式，如狗、猫、马、牛、羊、猴、鼠，并有四种用户自定义模式。适用范围宠物医院动物检疫部门畜牧兽医院动物园科研院校实验中心西南大学荣昌校区操作方便嵌入式标本处理和测量单元全新高精度血液处理技术，抗凝全血9.6μl试剂自动加入，能直接感应试剂余量排堵方便20项检测结果及WBC、RBC、PLT直方图同屏显示9.6μl抗凝血只需按“计数“健即被吸取分析结果可靠界面鼠标操作，参数支持人工调整提供配套的动物血检测专用试剂有报告打印功能西南大学荣昌校区主要技术参数工作原理：电阻抗法，氰化高铁血红蛋白法及无氰化物的SFT法检测参数：白细胞三分群，23项参数（含WBC、RBC、PLT彩色直方图）标准用量：9.6μl（全血模式）20μl（预稀释模式）检测速度：≥40样本/小时，可24小时开机有自动休眠及唤醒功能结果存储：主机自动存储12000份样本的全部参数包括直方图、历史数据的管理查询更便捷操作语言：全中文动物种类：狗、猫、马、牛、羊、猴、鼠等八种和四种用户自定义模式质控方式：X-B、L-J、、SD、CV标准方式：自动校准和人工校准显示屏：大屏幕彩色液晶显示，640480分辨率信息：支持多种快速中文输入接口：一个并行打印机接口，两个USB接口，两个PS/2接口，两个RS232接口（支持联网）电源：AC220V50HZ西南大学荣昌校区血常规化验单“血常规”检查主要有四项指标：白细胞数（WBC计数）、红细胞数（RBC计数）、血红蛋白（HB）和血小板数（PLT计数）。白细胞数（WBC），它的多少反映身体抵御、杀灭致病微生物能力的强弱。如果减少通常是由于病毒感染、再生障碍性贫血、伤寒或疟疾、营养不良、极度衰竭，以及脾功能亢进和自身免疫性疾病等。增多主要是急性化脓感染、炎症存在、严重的组织损伤及大量的血细胞破坏、急性大出血和溶血、白血病及某些肿瘤等。RBC、HB分别是红细胞和血红蛋白，是反映贫血的两个指标。当发生贫血、白血病、失血等时，会减少；当发生呕吐、腹泻、缺氧和心肺疾病时增多。红细胞（RBC）计数，增多的病理性原因有严重的肺气肿、肺原性心脏病、真性红细胞增多症、慢性一氧化碳（CO）中毒等。减少的病理性原因有缺铁性贫血、溶血性贫血、营养不良性贫血、再生障碍性贫血、失血性贫血等。血红蛋白（HB），其病理性原因与“红细胞数”相同，但在各种贫血时，由于红细胞与血红蛋白含量不同，二者的减少程度可以不一致。因此，同时测定红细胞和血红蛋白，对贫血类型的鉴别有重要意义。血小板数（PLT），它在止血、凝血过程中起着十分重要的作用。正常畜禽每天血小板数有一定的波动，午后较早晨高，高原地区较平原地区高，妊娠中晚期升高，分娩后1－2天降低；剧烈活动和饲喂后升高，休息后又恢复到原来水平。如果低于正常值，就要引起重视，因减少常见于急性白血病、难治性贫血、脾功能亢进、弥漫性血管内凝血等；如果大于正常值，也不能马虎，因在慢性粒细胞白血病、溶血性贫血及急性化脓性感染时，是增多的。西南大学荣昌校区当血常规化验检查的这些指标偏离（指标或高、或低）正常值范围时，说明受检者的身体存在某一方面的病变。如果HGB值低于正常值，就说明有贫血存在，应该进一步检查是什么性质的贫血。如果HGB值高于正常值，可能是因为患有血红蛋白增高症或者血液被浓缩的缘故。白细胞代表的机体的防御系统功能，其总数增高时，多表明有炎症、感染存在。此时患病动物多有发热症状，如果WBC值过高，并伴有严重的贫血，需进一步做骨髓穿刺检查，排除白血病的可能。WBC值低于正常值，可由接受放射线、病毒感染药物及化学物质中毒等引起。PLT减少时，可能会有出血，如血小板减少性紫癜等；增高时，说明血液呈高凝状态，易发生血栓。其他检查项目发生异常时，同样提示机体出现了某一病变。西南大学荣昌校区血细胞直方图一、WBC直方图：是反映WBC体积大小的频率分布图。正常人WBC直方图可见两个明显分离的峰，左峰为小细胞群（以淋巴细胞为主），右峰为大细胞群（以中性粒细胞为主），两峰之间为中间细胞群（包括嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞）。小细胞群峰又高又陡，大细胞群较高较宽，中间细胞群一般为有一定宽度的平坦区。小细胞群峰越高，淋巴细胞比率越大；大细胞群峰越高，中性粒细胞比率越大；而嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞增多或出现病理性细胞时，中间细胞群峰值增高。例如白血病时外周血中出现大量幼稚细胞，多分布于中间细胞群及其附近，使峰尖增高，不同白血病类型出现特异性直方图。二、RBC直方图：是反映RBC体积大小或任何相当于RBC体积大小范围内粒子的分布图。正常RBC直方图为偏态分布曲线图，峰值表示一定数量的RBC体积的平均值，与RBC平均体积基本一致，正常人峰值一般在82-94fl之间。直方图峰值变低，基底部增宽，说明RBC体积大小不一，与红细胞分布增大一致。直方图左移，提示RBC体积较小，如缺铁性贫血病人的RBC直方图明显左移，基底部显著增宽。直方图右移，提示RBC体积较大，见于巨幼红细胞性贫血和新生儿。RBC直方图有时出现双峰，是贫血治疗有效的证据，多见于缺铁性贫血、巨幼红细胞性贫血病人治疗后。三、PLT直方图:是反映PLT体积大小分布频率的分布图，正常PLT直方图呈左偏态分布，峰值一般在6-10fl之间，直方图左移，提示PLT体积偏小，直方图右移，提示PLT体积偏大。直方图尾部抬高或在20-30fl处出现另一个波峰，提示血液中可能存在较多的小红细胞、红细胞碎片、巨大血小板、血小板凝集及纤维蛋白等。缺铁性贫血病人的PLT直方图尾部明显抬高、PLT减少及其治疗过程中的直方图多呈波浪状。西南大学荣昌校区Diagr