铝佐剂类型及吸附率对吸附无细胞百白破联合疫苗免疫原性的影响_韩露

20157317IMMUNOLOGICALJOURNALVol.31No.7Jul.2015：863(2012AA02A401)：300457，（，）；300457，（，，，）*：，Tel：[phone]，E-mail：[e-mail]··[]1000-8861（2015）07-0580-05；[DOI]10.13431/j.cnki.immunol.j.20150124，，，*[]，。（AP）、（PTAH）（AH），。，NIH，ELISA。（FHA）≥95%，（PT）、（PRN）、（DT）（TT）。PT：AP/AHPTAH/；FHA：AP/PTAH-3/AHPTAH-2/PTAH-3＞；PRN：PTAH/AP/AH＞；DT：AP＞PTAH＞AH＞；TT：PTAHAH/AP/。（DT），。[]；；；[]R392.11[]AEffectsofthetypeandadsorptionstrengthofaluminumadjuvantontheimmunogenicityoftheadsorbeddiphtheria,tetanusandacellularpertussiscombinedvaccineHANLu1,2,SHAOZhongqi2,SIWeixue2,ZHUTao1,2,*1.CollegeofBiologicalEngineering,TianjinUniversityofScienceandTechnology,Tianjin300457,China;2.TianjinCansinoBiotechIncorporation,Tianjin300457,China*CorrespondingAuthor:ZHUTao,E-mail:[e-mail][Abstract]Toinvestigatetheeffectofthetypeandadsorptionstrengthofaluminumadjuvantontheimmunogenicityoftheadsorbeddiphtheria,tetanusandacellularpertussiscombinedvaccine(DTaP)andchoosethebestaluminumadjuvant,all5antigenswereseparatelyadsorbedontoaluminum-hydroxideadjuvant(AH),phosphate-treatedaluminum-hydroxideadjuvant(PTAH)andaluminumphosphate(AP).ThedegreesofabsorptionoftheantigensinvariousstocksolutionsweretestedbeforetheexperimentalDTaPvaccineswereprepared.NIHmicewereimmunizedintraperitoneallywiththepreparedDTcPvaccineandtheimmuneserawerecollectedforantibodytiteranalysisbyELISA.ForPT,PRN,DTandTT,thedegreeofadsorptionwasfoundtodecreasewiththeincreaseofphosphateinaluminum.TheadsorptionofFHA,however,wasmaintainedabove95%regardlessofthephosphateconcentration.Theimmunogenicitystudyshowedthattheperformanceoftheadjuvantswas:AP/AHPTAH/non-adjuvantforPT,AP/PTAH-3/AHPTAH-2/PTAH-3＞non-adjuvantforFHA,PTAH/AP/AH＞non-adjuvantforPRN,AP＞PTAH＞AH＞non-adjuvantforDT,PTAHAH/AP/non-adjuvantforTT.Inconclusion,theresultsdemonstratesthatthedegreeofadsorptiondonotcorrelatetoimmunogenicityoftheantigensexceptDT,andAPprovidesthebestoverallperformanceoverotheradjuvantstestedinthestudyfortheDTaPvaccine.[Keywords]Aluminumadjuvant;DTaP;Adsorptionpercentage;Immunogenicity（PT）、（FHA）、（PRN）、（DT）（TT），、、3。、、、、，。，，，，，，580··20157317IMMUNOLOGICALJOURNALVol.31No.7Jul.2015，，TB，[1]。WHO，，《》（2010）。。Hansen，，，，Balb/c[2]。Denoel，Balb/cPT、FHA、PRN3，PT、FHA、PRNFIM（）4[3]。Jiang，，，[4]，，，[5]。，，、，，。11.1PT、，；95%（SDS-PAGE）；5%PBS（10mmol/LPB、150mmol/LNaCl，pH7.4）。FHAPRN、，（）；FHA200KDa75%，98KDa95%（SDS-PAGE）；PRN95%（SDS-PAGE）；FHA500mmol/LNaClPBS（10mmol/LPB，pH7.4），PRN150mmol/LNaClPBS（10mmol/LPB，pH7.4），DT、（），；1500Lf/mgPN；150mmol/LNaClPBS（10mmol/LPB，pH7.0）。TT，，，；1500Lf/mgPN，PBS（10mmol/LPB、150mmol/LNaCl，pH7.0）。PTAH：AH，，；0.2、0.51.0mol/L，pH6.5；，37℃12h；，2，。[6]EDTA[7]P/Al0.14、0.380.74PTAH-1、PTAH-2PTAH-3。1.2PT、FHA、PRN、DTTT（AH、PTAH-1、PTAH-2、PTAH-3AP），，50μg/ml、50μg/ml、16μg/ml、30Lf/ml、10Lf/ml，，0.5mg/ml，，。1.3FHA、PRN、DT、TTLowry，=(1-/)×100%，PTTCA，。1.4NIH，10～12g，18～22d，SPF，。7，10。5，1。9，0.5ml/，。142。28，，ELISA，0.9%OD2.1Cutoff，。1.5JMP10，，P＜0.01、P＜0.05；P＞0.05。22.11、1，PT、PRN、DT、TT4AH80%～93%，AP（9%～40%）。PTAH，PT、PRN、DT、TT4AH，AP，，。FHA≥95%，。2.2DTaP，581··20157317IMMUNOLOGICALJOURNALVol.31No.7Jul.2015，ELISA2，2。2.3PT2，，APAH2PT，；PTAHPT。PTAH。，PT，。2.4FHA3，，FHA。3PTAH，PTAH-3，FHA；，APFHA。2.5PRN4，PRN，PRN。，AH、PTAHAP，；、PTAH-1、PTAH-2、PTAH-31Tab1Adsorptionrateoftheantigensinthestocksolutionswithdifferentadjuvants(%)AntigenAHPTAH-1PTAH-2PTAH-3APP/Al=0P/Al=0.14P/Al=0.38P/Al=0.74P/Al=1PT92.7078.2469.8261.5240.01FHA94.8095.6195.5795.7496.10PRN80.7668.3349.1425.758.99DT86.5081.5671.3262.5117.45TT88.9679.8965.4060.8327.541Fig1Adsorptionpercentagesoftheantigensinthestocksolutionswithdifferentadjuvants25Tab2AntibodytitersinseraofmiceimmunizedbytheDTaPvaccineswithdifferentadjuvants[lg（titer）]AdjuvantsPTFHAPRNDTTTAH6.15±0.375.64±0.705.02±0.625.25±0.425.54±0.43PTAH-15.82±0.305.38±0.565.23±0.545.50±0.295.70±0.42PTAH-25.35±0.375.21±0.435.48±0.675.44±0.435.85±0.42PTAH-35.77±0.315.81±0.345.11±0.375.65±0.276.05±0.30AP6.18±0.466.05±0.564.90±0.495.85±0.355.46±0.24Non-adj.5.59±0.314.72±0.324.01±0.344.66±0.235.48±0.36Thetransverselineinthefigurerevealstheoverallmeanofallsamples,eachdotindicatesthevalueofantibodytiterofeachsample,thetransverselineinthemiddleofrhombicmeandiamondrepresentsthemeanofeachgroupofsamples,thebreadthofdiamondindicatessamplesize(10pergroupinFig2toFig6),theupanddownverticesinthedimondareconfidencelimitsof95%confidenceinterval,andthetwoshorttransverselinesonandunderthedimondshoweachgroup’sstandarddeviation.Thecorrespondingelementsinthefollowingfiguressharethesamemeaning.2PTFig2Statisticalanalysisofanti-PTantibodylevelsinmousesera3FHAFig3Statisticalanalysisofanti-FHAantibodylevelsinmousesera582··20157317IMMUNOLOGICALJOURNALVol.31No.7Jul.2015，PRN。，PRN。2.6DT5，，，DT。，APDT，PTAH，AH。，。2.7TT6，3PTAH，PTAH-2PTAH-3TT，PTAHTT。AHAP2，。3，FHAAP、PTAH、AH。FHA，，。（FHA），，，；，，，[8]；，，，[9]：4。。，。（DT），。“”，，，，，PTAH-3AP。FHAAH、PTAH-3、AP，APPTAH-3AH。PT，，AHAP。PTAH-3PTAH-2TT。，，[10]。，IL-6、IL-4、IL-2，MHC-II，Th2[11-14]；Nalp3，IL-4PRNFig4Statisticalanalysisofanti-PRNantibodylevelsinmousesera5DTFig5Statisticalanalysisofanti-DTantibodylevelsinmousesera6TTFig6Statisticalanalysisofanti-T