免疫诊断

第二十四章免疫诊断抗原抗体反应的原理和特点抗原抗体发生结合反应的物质基础——抗原决定基与抗体的抗原结合部位之间的结构互补性。抗原抗体反应的特点1.高度特异2.可逆性3.可见性：适当浓度和比例、盐离子Ag/AbReactionsSource:Li,Y.,Li,H.,Smith-Gill,S.J.,Mariuzza,R.A.,Biochemistry39,6296,2000亲和力（Affinity）AbexcessAgexcessEquivalence–Latticeformation凝集反应沉淀反应补体参加反应免疫标记技术第一节抗原或抗体的检测Agglutination颗粒性抗原（如细菌、细胞）与相应抗体,在适当电解质存在的条件下,经过一定时间后出现肉眼可见凝集块称为凝集反应+•定性实验–Ag/Ab间接凝集实验可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的载体上,使之成为致敏载体颗粒,然后与相应抗体或抗原作用,在电解质参与下出现的凝集反应+应用–检测可溶性抗原或抗体Coombs(Antiglobulin)Tests检测血清中抗-Rh抗体Patient’sSerumTargetRBCs+Step1+CoombsReagent(Antiglobulin)Step2凝集抑制实验将可溶性抗原与相应抗体预先作用,然后再加入致敏颗粒（吸附相同可溶性抗原的乳胶颗粒）,由于抗体已被可溶性抗原结合,因而致敏颗粒不发生凝集现象。如免疫妊娠实验+PriortoTest++TestPatient’ssample单向免疫扩散AgConcentrationDiameter2AgAgAgAgAbingel双向免疫扩散补体结合实验已知抗原加入血清（检测抗体）–加入标准量补体–加入包被抗体的红细胞–检测红细胞溶解量AgPatient’sserumAgNoAgAg免疫酶技术免疫荧光法（immunofluorescence)免疫印迹法（westernblotting)放射免疫测定法(RIA)直接荧光法AgFluorochromeLabeledAbTissueSection间接荧光法AgFluorochromeLabeledAnti-IgTissueSectionUnlabeledAbFlowCytometryFlowTipLaserFLDetectorLightScatterDetectorFlowCytometryFlowCytometryRedFluorescenceIntensityGreenFluorescenceIntensityTwoParameterHistogramGreenFluorescenceIntensityNumberofCellsUnstainedcellsFITC-labeledcellsOneParameterHistogramELISA双抗体夹心法双抗原夹心法生物素－亲和素系统酶联免疫斑点试验（ELISPOT）免疫组化技术ELISA双抗体夹心法（HBsAg、HBeAg等）示意图固相载体抗体抗原酶抗体酶标记抗体1.将抗体包被在固相载体上。2.如样品中含有抗原，则结合为抗原抗体复合物。3.再加入酶标记抗体，则结合为抗体-抗原-酶标记抗体复合物。4.酶催化底物并显色。双抗原夹心法（抗-HBs等）示意图1.将抗原包被在固相载体上。2.如样品中含有抗体，则结合为抗原抗体复合物。3.再加入酶标记抗原，则结合为抗原-抗体-酶标记抗原复合物。4.酶催化底物并显色。酶抗原酶标记抗原抗体抗原固相载体中间蓝色为癌巢，周围棕褐色为转基因的淋巴细胞第二节免疫细胞的测定一、淋巴细胞的分离与类型鉴定T细胞总数及亚类外周血T细胞总数:CD3+T细胞60%-80%CD4+T细胞55%-60%CD8+T细胞20%-30%CD4+/CD8+比值大约为2/1免疫荧光法磁珠分离法淘选法流式细胞术抗原肽－MHC分子四聚体tetramer免疫磁性微球的分离原理直接法对细胞进行分类抗CD3磁球磁球结合T细胞加入B和T细胞中负向选择正向选择磁架进行分离间接法对T细胞进行分离单克隆抗体CD3羊抗鼠修饰磁球BiomagT细胞T细胞二、白细胞功能测定T细胞功能测定B细胞功能测定吞噬细胞功能测定T细胞功能测定T细胞增殖试验：MTT法细胞毒试验细胞因子检测细胞免疫功能检测的皮肤试验结核菌素试验51Cr释放法乳酸脱氢酶释放法凋亡细胞检查法琼脂糖电泳TUNEL法流式细胞术增殖试验抗体形成细胞检测溶血空斑试验