Gene-JETTM-plasmid-miniprep-kit-K0502-操作规程(亲笔翻译中文版

ThermoGeneJETTMplasmidminiprepkit#K0502操作规程实验开始前，请确认：1.请确认RNase已添加到ResuspensionSolution中。2.请确认WashSolution中已添加乙醇（96%-100%）。3.若试剂中有沉淀析出，请于37℃水浴中重新回溶。4.以下实验操作中，除第一步，离心条件均为室温，＞12000g（10000~14000rpm，取决于转子型号）。实验操作：1.取1-5ml过夜培养的菌液加入离心管中，8000rpm（6800g）离心2min，室温。尽量除去上清。2.向留有菌体的离心管中加入250ulResuspensionSolution，使用移液器或漩涡振荡器使细胞沉淀彻底悬浮。3.向离心管中加入250ulLysisSolution，立即温和的上下翻转4~6次，使菌体充分裂解，溶液逐渐粘稠澄清。NOTE：（1）震动要温和；（2）作用时间不超过5min。4.向离心管中加入350ulNeutralizationSolution，立即温和的上下翻转4~6次，充分混匀，此时出现白色沉淀。5.离心5min。6.用移液器小心的将上清转移到GeneJETTMspincolumn中，注意不要带入白色沉淀。7.离心1min，弃收集管中液体，将吸附柱重新装到收集管中。8.加入500ulWashsolution（事先用乙醇稀释）。离心30~60s。弃收集管中的液体，再将吸附柱装入收集管中。9.重复“8”操作。加入500ulWashsolution（事先用乙醇稀释）。离心30~60s。弃收集管中的液体，再将吸附柱装入收集管中。10.弃掉收集管中的液体后，再额外离心1min，以充分除去残留的Washsolution。11.将GeneJETTMspincolumn转移到新的1.5ml离心管中（不包括试剂盒内），向GeneJETTMspincolumn中加入50ulElutionSolution，来洗脱质粒DNA。注意不要用枪头碰到膜。室温静置2min，离心2min。12.弃掉柱子，纯化的质粒于-20℃保存。试剂保存：1.20mlWashSolution，加入96%乙醇35ml。总体积55ml。2.试剂盒中试剂可常温（15-25℃）保存12个月。需要更长期的保存，建议保存于4℃。3.加入RNase的ResuspensionSolution，可在4℃下保存6个月。4.若在保存过程中，有溶液析出，请于37℃水浴中回溶。