牛人工授精技术

牛人工授精技术广西武宣金泰丰农业科技有限公司人工授精的概念•种畜配种：自然交配、人工授精•人工授精是指利用器械采取公畜的精液，经过适当的检查和处理，再用器械把精液输送到母畜生殖道的适当部位，使之受孕的配种方法。人工授精的发展•试验阶段：1780年意大利生理学专家司拜伦谨尼（Spallanzani）第一次进行狗的人工授精。20世纪初对马试验成功。•实用阶段：在20世纪30年代形成了一套较完整的操作方法。40～60年代，欧洲多数国家，北美、大洋洲国家及日本人工授精已相当普及。•冷冻精液阶段：出现：1949年英国波芝（Polge）对鸡精液冷冻成功。发展：1950年英国的史密斯（Smith）和波芝研究开发了牛精液冷冻保存技术。1960年后冷冻精液的人工授精技术广泛展开。我国的人工授精技术始于50年代（猪），但精液冷冻技术70年代才得以推广。人工授精的意义•充分发挥优秀种公畜的种用价值和配种效能，加快品种改良步伐。•提高母畜的受胎率。•防止疾病特别是传染病的传播。•克服因家畜体形悬殊造成的配种困难。•冷冻精液的应用使种畜的利用不受时间和空间的限制。•是发展繁殖新技术的一项基础措施。人工授精技术程序•采精•精液品质检查•精液稀释•精液保存•输精采精•采精的准备•采精方法•采精频率采精的准备•场地：宽敞、明亮、安静、清结，有消毒设施和保护栏。•台畜：活台畜、假台畜。•假阴道：安装调试后具备适宜的温度、压力、和润滑度。•公畜：具备良好的繁殖体况；经过训练；采精前进行充分的性准备。采精操作•假阴道法：•手握法：•电刺激法：•按摩法：公畜的采精频率•公牛：每周两天，每天两次。•公猪、马：宜隔日一次，如果连续两天采精，要休息2-3天。•公羊：每天数次，连续数周。精液的品质检查•外观检查•精子活力检查•精子密度检查•精子畸形率检查•其他检查•精液量•精液色泽•精液气味•云雾状项目乳牛肉牛水牛猪绵羊每周采精次数2～62～62～62～57～25平均每次射精量（ml）5～104～83～6150～3000.8～1.2精子活率（%）50～7540～7560～8050～8060～80精子活力检查•平板压片法•悬滴法载玻片预温精液稀释取样检查镜检活力估测活力记录将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片在400倍显微镜下观察判断视野中直线前进运动精子所占的百分率按十级一分制评分和记录精子活力检查的程序精子密度检查•估测法•血细胞计计数法•精子密度仪测定估测法•密：在整个视野中，精子间空隙不明显，看不清单个精子运动。10亿／ml。•中：在整个视野中，精子间空隙明显，可容纳1—2个精子，3—10亿／ml•稀：在整个视野中，精子间空隙较大，可容纳数个精子，1—3亿／ml。(二)血细胞计数法：•在显微镜看清血细胞计数板上的方格：•稀释精液：用移液管吸取精液50微升置于小试管中，再吸取3%NaCI溶液450或950微升与精液混匀。•镜检：在400倍的显微镜下找出具有代表性的五个中方格，四角和中间一个或对角线五个，用计数器计数其中的精子数。•计算：1毫升原精液精子数=5*5*10*1000*稀释倍数精子密度仪各种家畜精子密度比较010203040牛羊猪马鸡亿/ml畸形率的检查•畸形精子：头部畸形、颈部畸形、尾部畸形•精子畸形率：精液中畸形精子占总精子数的百分率。•优质精液精子畸形率应小于：牛18%、羊15%、猪18%、马12%畸形率的检查•取一滴原精液，均匀的涂在载玻片上，干燥1～2分钟。•用96%以上酒精固定2～3分钟。•用美蓝或墨水染色1～2分钟。•用蒸馏水轻轻冲洗。•干燥后镜检，其他检查•顶体异常率•精子生存时间和生存指数的测定•PH测定•美蓝褪色试验•果糖分解试验•精子耗氧量测定顶体异常率的检查•取鲜精适量，在37℃下用生理盐水稀释。•涂片，干燥，用5%福尔马林固定10分钟。•姬姆萨液染色1.5～2小时。•干燥后用树脂封闭，制成标本。•400～600倍镜检，数500～1000个精子，计算项体异常率。精子生存时间和生存指数的测定•精子生存时间：指精子在某温度下在体外的总的生存时间。•生存指数：将精液在某温度下，每隔8～12小时检查一次精子活力，直至无活动精子为止，相邻两次检查的平均活力与间隔时间的积之和为生存指数。PH测定•正常精液PH：牛、羊6.5～6.9、猪、马7.4～7.5•同种精液PH偏低的，品质较好，PH偏高的受精率、生活力和保存效果都显著降低。美蓝褪色试验精液稀释•稀释的目的•稀释液的成分及作用•稀释液的配制方法•稀释倍数的确定•稀释方法稀释的目的•大精液容量，增加了一次采精量的可配母畜数。•延长精子存活时间。•有利于精液的保存和运输。稀释液的成分及作用•稀释剂：单纯扩大容量的等渗液。0.9%NaCl、5%葡萄糖。•营养剂：主要提供营养，以补充精子在代谢过程中消耗营养。（1）奶类：奶粉(脱脂、速溶)10—12%；鲜奶经消毒加入10—20ml。（2）卵黄，通常加入20%。（3）糖类，3%葡萄糖，11%蔗糖。•保护剂：主要保护精子免受各种不良外界环境因素的危害。（1）非电解质或弱电解质：降低精液电解质浓度，常用糖类、氨基乙酸。（2）缓冲物质：维持精液的PH，常用柠檬酸盐、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾和三羟甲基氨基甲烷（tris)等。（3）防冷物质：防止精子发生冷休克，常用卵黄、奶类。（4）抗冻物质：甘油、二甲基亚砜(DMSO)。（5）抗菌物质：青霉素、链霉素、氨基苯磺胺。•其他添加剂：激素类、维生素、酶类、染料类、有机酸、精氨酸等。稀释液的配制要求•药物原料应选用化学纯和分析纯制剂。•用具须洗净消毒。•药品用蒸馏水溶解后，要进行过滤和水浴消毒。•蒸馏水要新鲜。•卵黄要取自新鲜鸡蛋。•最好现用现配，卵黄、奶类、抗生素现用现加。稀释倍数的确定•一头公牛一次采得鲜精12毫升，经检查精子活力为0.7，密度为11亿/毫升，如为母牛输精时要求有效精子数不少于0.1亿，输精量为0.25毫升，本次采得的精液可为多少头母牛输精？（1）每毫升原精液中有效精子数：11*0.7＝7.7亿/毫升（2）稀释后每毫升精液中有效精子数：0.1/0.25＝0.4亿/毫升（3）稀释倍数：7.7/0.4＝19.25取19倍（4）可配母牛头数：12*19/0.25＝912头稀释方法•将精液精液与稀释液同处在30℃的环境中。•检查精液品质，确定稀释倍数。•稀释时，将稀释液沿着精液容器的壁慢慢加入精液中，同时慢慢转动精液瓶，使之混匀。•如需高倍稀释，应先做3—5倍的低倍稀释。精液稀释精液保存•常温保存：15—25℃•低温保存：0—5℃•冷冻保存：保存在液氮(-196℃)或干冰(-79℃)中。液氮及其容器•液氮的特性：超低温性、易挥发性、抑菌性。•利用液氮：防冻伤、防窒息、防爆炸•液氮罐：液氮罐的构造液氮罐的使用•购买时要检查合格证，查看各部件是否齐备完好，测定液氮损耗率是否正常。•运输液氮要有专门的车辆，防止剧烈振荡。•贮存液氮要在专门的室内。•当液氮量达容积的1/3时要及时充氮。•每年要清洗保养一次精液的冷冻保存原理•玻璃化假说：稀溶液在冰晶化温区（0～－60℃）易形成冰晶，冰晶为分子有序排列、形态规则、颗粒较大的固体，可对精子产生渗压和机械危害。如溶液快速降温，则形成分子无序排列、颗粒较小的玻璃化固体，对精子危害小，再以同样的方式升温，精子即会恢复活力。细管冻精的生产程序•采精及精液品质检查•精液稀释：二次稀释法•降温平衡：•分装•冻结：液氮熏蒸浸泡法•抽样检查细管冻精的制作人工授精技术•输精前的准备•输精的要求•输精方法输精前的准备•母畜的准备：母畜经发情鉴定后，确定已到输精时间，将其适当保定，尾巴拉向一侧，清洗消毒外阴。•器械准备：输精所用的器械应彻底消毒，用稀释液冲洗后才能使用。•精液准备（1）液态保存的精液：轻轻振荡后升温至35℃，活力不低于0.6（2）冷冻精液：需先解冻，活力在0.3以上。•术者准备：输精人员应穿好工作服，指甲必须剪短磨光，戴上长臂手套。输精要求•输精时间的确定：母牛发情后9－24h输精两次，间隔8-12小时。（第一次输精经产牛在发情后12h左右，初产20h）例：早9点某经产母牛发情，当晚7－8：30时第一次输精，次日早5－9时可第二次输精，第二次输精前检查卵泡。•细管冻精1支，0.5ml或0.25ml，有效精子数不少于1000万。直肠把握子宫颈输精法操作要点1、冻精的适宜解冻温度：38~39℃2、母牛的输精时间：发情开始后8~12小时一次，隔8~12小时一次。3、适宜的输精部位：子宫颈深部和子宫体内。4、精液解冻后要尽快输精。5、精液解冻后要保存在34~36℃下，温度不可波动过大。6、细管装入枪内后，要检查一下精液是否能从套管外流出。7、排出宿粪后，先擦洗牛外阴部，再插入输精器。8、插入输精器时，先斜向上方前进10~15cm，再水平插入。9、向子宫颈插入输精器时，要注意两手协同操作。10、输精器与子宫颈方向要保持一致。11、注入精液困难时，要适当改变输精器方向或稍后拉，但切忌后退过多。12、注入精液要缓慢，一般为10秒。13、注入精液的同时要减缓母牛的努责，防止精液倒流。14、输精同时要注意保护输精器不受粪便污染。15、输精完毕后，先撤出输精器后撤出直肠内的手臂。提高受胎率的措施•发情正常而屡配不孕的母牛：大麦芽120克，当归、红花、生地、地骨皮各60克，黑豆500～1000克，加水熬汤。母牛发情1～3天开始喂药，每日1剂，连服3剂，第3剂药服完后的第2天配种。•按碘片1克、碘化钾3克、蒸馏水6克的比例配成稀释液，同时取4毫升原液，加200毫升蒸馏水冲洗子宫。此方法对慢性子宫内膜炎、化脓性子宫炎、卡他性子宫炎、阴道炎等引起的母牛不孕症有明显疗效。提高受胎率的措施•卵巢机能不全时，肌注0.5%新斯的明2毫升，连注3次，每次间隔48小时。第3次可同时注射孕马血清1000国际单位，82.4%的母牛可恢复机能。•对隐性子宫内膜炎的母牛，在发情配种前2小时，用生理盐水200～500毫升冲洗子宫之后，注入青霉素40～100万单位，链霉素100万单位，再适时输精，受胎率可达60%以上。提高受胎率的措施•肌注维生素。输精后15～20分钟，肌肉注射维生素E500毫克，情期受胎率可提高14.4%。在输精的当天，输精后的第5～6天，各肌注维生素A58万单位，维生素D310万单位，维生素E500毫克一次情期受胎率可提高20%。•50%～70%葡萄糖溶液加入青霉素和链霉素100～200万单位，于人工授精6～8小时后注入子宫体内，对患子宫内膜炎的母牛可提高受胎率26%～50%。提高受胎率的措施•在母牛分娩后的第一、二情期，输精后5～7分钟，各肌肉注射40～50万单位的催产素一次，受胎率提高20%。•肌肉注射促性腺激素10毫克，受胎率可提高12%～19.1%：屡配不孕的牛经注射后受胎率提高26.1%。•在母牛分娩后45～60天肌肉注射前列素F两天，20～25毫升、受胎率可达73%～85%。长期不孕的牛，皮下注射初奶20毫升和0.5%新斯的明2毫升，受胎率提高24%。提高受胎率的措施•益母草250克、红花30克、黑豆500克，煎汤内服。隔日1剂，连服2～3剂为宜。此方适于不发情母牛。•炒香附、云苓各45克，灸半夏、桔皮各40克，炒苍术50克，六曲100克。每日1剂，分两次煎服，连服6日，停药1日，为1个疗程。一般服一个以情周期（即3个疗程左右）为宜。此方适于体壮过肥，不发情或发情屡配不孕的母牛。子宫内膜炎的治疗•扁豆花、鸡冠花、泽兰各30克，益母草、山楂各50克，红花、桃仁各20克。混合加水适量，煎后取其汁，与100克红糖调匀，1次给病牛灌服。•当归200克，红花、炙甘草各30克，益母草500克，鸡冠花150克，枳壳45克，野菊花90克。混合研为细末，平均分成3剂，每天1剂拌料喂服，连用3天。•酒当归50克，川芎15克，酒白芍35克，熟地50克，吴茱萸35克，丹皮30克，元胡20克，陈