EB病毒血清抗体检测在鼻咽癌早期诊断中的应用

EB病毒血清抗体检测在鼻咽癌早期诊断中的应用中山市肿瘤研究所程伟民中华医生网收集编目几个基本概念EB病毒抗体及其检测方法鼻咽癌早期诊断与风险评估总结中华医生网收集编目几个基本概念EB病毒抗体及其检测方法鼻咽癌早期诊断与风险评估总结中华医生网收集编目病毒1964年Epstein和Barr首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养建立病毒株，并在该病毒株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，命名为EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)。EB病毒属于人类γ疱疹病毒，是一种人类普遍感染的嗜B淋巴细胞病毒。在急性感染阶段，EB病毒初次感染发生于口咽鳞状上皮细胞，其后可长期存在于B淋巴细胞，呈潜伏感染状态。由于静止状态的EB病毒一旦处于活化状态，即可变为与包括肿瘤在内的许多疾病的相关病因，因此EBV被IARC（1997）列为第一类人类致癌病毒。中华医生网收集编目病毒EBV与多种人类恶性肿瘤有关研究发现EBV除引起Burkitt’s淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤;鼻咽癌;NK/T淋巴细胞瘤;平滑肌肉瘤及胃、乳腺、肺等部位的恶性上皮肿瘤。中华医生网收集编目EBV是一种嗜B细胞的人类疱疹病毒，在B细胞中有两种感染形式：1、增殖性感染EBV感染B细胞后，仅极少一部分病毒基因在细胞中能充分地表达。首先合成EA(早期抗原)等早期基因产物，接着是DNA复制、VCA(荚膜蛋白)和MA(膜抗原)合成，最后组成完整的病毒颗粒而释放，此时细胞亦随之溶解而死亡。EBV感染细胞的形式中华医生网收集编目、非增殖性感染(1)潜伏感染:EBV感染B细胞后，多数细胞中的病毒基因组处于潜伏状态，此时细胞只合成EBNA和LMP。根据EBV在不同肿瘤中的表达情况，分为潜伏Ⅰ～Ⅲ型，潜伏Ⅳ型为健康携带者。中华医生网收集编目鼻咽癌是我国南方的多发肿瘤之一，来源于鼻咽粘膜上皮细胞的低分化或非分化癌。为恶性度较高的肿瘤，NPC有明显的种族倾向，大部分患者是中国人及其后裔，在爱斯基摩人、北非洲人和马来人中也较常见。在我国发病率以广东省为最高，其次为广西、湖南、福建、江西等省。发病率男性达30/10万以上，女性也超过15/10万。鼻咽癌可发生于各种年龄，以30～50岁为发病高峰，年龄最小3岁，最大90岁。中山是鼻咽癌的高发区发病率达１７．０２／１０万。鼻咽癌中华医生网收集编目病毒与鼻咽癌的关系EB病毒与鼻咽癌密切相关；流行病学调查也表明，世界上90％以上的人群都有EB病毒的感染，在发展中国家EB病毒的感染可以发生在幼年时期，据调查，我国南方EB病毒的感染最早可出现在4岁。对于大多数人来说EBV可以长期潜伏于体内而不引起明显、严重的后果，但是，对于部分感染者来说，其体内的EBV却暗示着恶性发展。基于EB病毒感染的普遍性以及鼻咽癌发病的地域性和人种倾向性，因此，是否存在与鼻咽癌高发相关的EB病毒株是个很令人感兴趣的课题。中华医生网收集编目鼻咽癌患者血清学特点：1、高抗体水平2、宽抗体谱----多种抗体水平升高血清EB病毒抗体鼻咽癌患者血清EB病毒抗体：VcAIgA/IgG,EAIgA/IgG,EBNA1IgA/IgG,ZtaIgA/IgG中华医生网收集编目几个基本概念EB病毒抗体及其检测方法鼻咽癌早期诊断与风险评估总结中华医生网收集编目众所周知,人体感染EB病毒并成为携带者之后,一般会引起免疫反应,产生抗体。血液中抗体水平如果持续存在,则反映潜伏的EB病毒经常被再激活。EB病毒在反复再激活的过程中可能容易发生基因变异,从而在鼻咽癌变中起作用中华医生网收集编目病毒抗体水平在正常人群与鼻咽癌病人中的分布情况人群EBNA1/IgAzta/IgGEBNA1/IgG正常人群4680.654±0.4700.763±0.4830.783±0.293NPC病人163.265±1.761.408±0.6721.249±0.317t值1.1093.239.09P值0.0010.0010.001文章发表在《第一军医大学学报》2001中华医生网收集编目病毒抗体水平在正常人群与鼻咽癌病人中的分布情况中华医生网收集编目血清EB病毒的检测方法免疫酶法和免疫荧光法：PCRELISA中华医生网收集编目间接免疫荧光/免疫酶检测VCA-IgA和EA-IgAVCA/IgA与EA/IgA是目前临床应用最为广泛的鼻咽癌血清学检测手段。VCA/IgAEA/IgA灵敏度90%80%特异度70%90%中华医生网收集编目使用涂片的细胞中EBV的载量难以保证批间的质量一致；结果观察在一定程度上欠客观性采用几何级数的滴度指标较粗对EB病毒感染的特征（NPC主要是潜伏感染）针对性不强。间接免疫荧光/免疫酶法的不足之处YYYYB95-8Raji血清抗体标记抗体中华医生网收集编目检测EBV-DNA近年来有研究证实可以在NPC患者血清/血浆中检测到肿瘤细胞的EBVDNAMutirangura等首次报导用巢式RT-PCR方法，在31%NPC患者的血浆中检测到EBVDNALo等用荧光定量PCR方法检测NPC患者的血浆中EBVDNA，检出率达96%,并在随后的研究中证实放疗后肿瘤消退的患者血浆中EBVDNA也迅速下降，可用作预后判断。采用Real-time定量PCR技术，利用一对特异性引物和特异性荧光探针，结合PCR技术和荧光检测技术，实现对EBV病毒的定量检测，可用于预后判断及有希望成为监测NPC治疗后转移、复发的指标。中华医生网收集编目酶联免疫吸附法（ELISA）采用不同EBV基因工程重组抗原的酶联免疫吸附法（ELISA）检测试剂，是近年来的主要研究集中的内容，目前较为成熟的研究主要有：EBNA1IgA/IgG、ZtaIgA/IgG、VcA-P18-IgA/IgG。中华医生网收集编目在诊断鼻咽癌中的价值EBNA是EB病毒的潜伏期的抗原，是病毒潜伏感染状态必需的蛋白，在细胞转化和维持状态中起重要作用；目前在国内外逐渐推广应用检测EBNA1抗原抗体作为鼻咽癌的血清学指标。目前用于作为鼻咽癌诊断的EBNA1抗体有：EBNA1/IgA和EBNA1/IgG,我们的实验结果表明两者在诊断鼻咽癌的灵敏度和特异性分别是。灵敏度（%）特异度（%）EBNA1/IgA91.991.4EBNA1/IgG89.476.6中华医生网收集编目抗ztaIgA/IgG在诊断鼻咽癌中的价值Zta（EB病毒立即反应蛋白）由BZLF1基因编码，是少数鼻咽癌细胞中的EB病毒由潜伏性感染转化为溶解性感染立即早期时相的产物，是调节病毒进入复制状态的关键。zat一开始表达，病毒就开始进入复制的链式反应过程，有报道认为血清zat抗体的检测是NPC治疗及预后观察的一个很好指标。目前用于作为鼻咽癌诊断的zat抗体有：Zta/IgA和Zta/IgG我们实验室的研究结果显示Zta/IgG的灵敏度是81.2％特异性是84.0％。中华医生网收集编目在诊断鼻咽癌中的价值VCA是EB病毒进入溶解期主要表达的抗原之一，与EB病毒的形成是一致的,是出现较晚的抗原。大量的研究证明VCAIgA检测是鼻咽癌的诊断和预后观察的一个很好的指标。目前用于作为鼻咽癌诊断的VCA抗体有：VCA/IgA和VCA/IgG中华医生网收集编目检测血清EB病毒抗体EBV血清抗体灵敏度特异度VCA-p18-IgA0.7060.705VCA-p18-IgG0.5300.530EBNA1-IgA0.8120.811EBNA1-IgG0.8120.796Zta-IgA0.7530.758Zta-IgG0.8820.880胡维维、宗永生《中国肿瘤临床》2006年第33卷第14期中华医生网收集编目检测血清EB病毒抗体灵敏度（%）特异度（%）EBNA1IgA91.991.4EBNA1IgG89.476.6ZtaIgG81.284.03ELISAscombined90.691.4Two-stageELISA91.996.5文章发表在2001年《中国免疫学杂志》中华医生网收集编目过往的研究表明，IgA类抗体比IgG类抗体更能提示鼻咽癌的风险性；而EBNA1是潜伏性感染的EB病毒持续表达的产物，Zta是少数鼻咽癌细胞中的EB病毒由潜伏性感染转化为溶解性感染立即早期时相的产物，VCA与EB病毒的形成是一致的，是出现较晚的抗原；关于哪种抗体能够更好的运用于临床筛查鼻咽癌，已经有很多的研究报道。胡维维等报道首选Zta-IgG或EBNA1-IgA；顾耀亮等的研究表明，单项以选择EBNA1-IgA较好；我们实验室的结果显示EBNA1-IgA的灵敏度和特异度较高。中华医生网收集编目在人群中筛查鼻咽癌正常人群与鼻咽癌人群在各血清学分层中的分布血清学分层rOD正常人鼻咽癌病人阴性rOD1.1075.13%4.81%可疑阳性1.10rOD1.8517.44%17.31%阳性rOD1.857.44%77.88%文章在《中国肿瘤临床》发表中华医生网收集编目多指标联合检测鼻咽癌2001年我们与香港大学联合在“InternationalＪCancer”中首先提出了联合多中抗体评估鼻咽癌风险的观点。2005年ChenJKC等在世界卫生组织肿瘤分类一书中指出，在血清学诊断鼻咽癌时，最好合并采用多种抗体。中华医生网收集编目血清多种抗体联合检测的灵敏度和特异度抗体组合灵敏度特异度ZtaIgG+/EBNA1IgG+0.7060.977ZtaIgG+/EBNA1IgA+0.7290.962EBNA1IgG+/ZtaIgA+0.6230.962EBNA1IgA+/ZtaIgA+0.6350.902ZtaIgG+/EBNA1IgA+/EBNA1IgG+0.6120.992ZtaIgG+/EBNA1IgG+/ZtaIgA+0.60.992ZtaIg+G/EBNA1IgG+/ZtaIgA+0.5530.985ZtaIgG+/EBNA1IgA+/ZtaIgA+0.6230.954中华医生网收集编目几个基本概念EB病毒抗体及其检测方法鼻咽癌早期诊断与风险评估总结中华医生网收集编目年研究的结果开展人群筛查对鼻咽癌的早期发现有重要的作用，早期鼻咽癌的发现，对提高五年生存率有决定意义由于鼻咽癌治疗5年生存率长期徘徊在50％－60％左右，鼻咽癌的早期诊断和治疗是提高患者生存率、改善生存质量的重要手段之一。而且鼻咽癌早期症状不明显、原发部位