细胞生物学实验-细胞爬片

细胞传代（II）-------细胞爬片2018.10.19一、实验原理1.细胞爬片细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长，主要用于组织学，免疫组织化学，切片，细胞涂片，原位杂交等。细胞爬片采用的玻片可以是普通的盖玻片也可以用细胞爬片专用玻片。使用普通盖玻片时，要按照玻璃器皿的清洗方法进行清洗，并进行高压灭菌。专用玻片通常已经过处理可直接使用。二、实验目的1．巩固细胞传代技术。2．掌握细胞爬片的方法。3.为细胞骨架的观察提供实验材料三、实验材料及设备1.细胞CHO细胞、鸡胚成纤维细胞、HeLa2.试剂DMEM培养基、血清、抗生素、胰酶3.仪器超净工作台、CO2培养箱、倒置相差显微镜4.其它用品：盖玻片（无菌）、35mm细胞培养皿（六孔板）、试管、移液管，滴管，酒精灯、75％酒精棉球、废液缸。四、实验步骤：1.将超净台内物品，按照无菌操作要求摆放。2.用灭菌小镊子将处理好盖玻片轻轻放入35mm培养皿中。3.打开细胞瓶盖并在酒精灯上轻轻烧口消毒，倒掉或吸出培养基。4.加一滴管胰酶轻轻漂洗一下细胞，使其湿润整个细胞层，弃胰酶，再加入一滴管胰酶，盖好瓶盖。5.显微镜下观察细胞的消化状态，待细胞大部分收缩、突起、变圆，细胞边界清晰时，即可竖立或翻转培养瓶停止消化，在超净台内靠近火焰处弃胰酶。6.加两滴管含10%FCS的DMEM培养基反复冲瓶壁上的细胞层，至全部冲下，滴管轻轻吹打，混匀，成细胞悬液，细胞计数，将细胞稀释成1105/mL）7.在35mm培养皿中加入1mL细胞悬液+1ml完全培养基，镜下观察细胞密度和状态，标记细胞名称及操作者。8.将细胞放入5%CO2、37℃培养箱培养，至下次课期间换液即可。9.整理实验用品。下次课内容：细胞骨架及细胞核染色11月2日：期中考试（已学操作，无菌规范）