搜索
我国乙肝疫苗现状及存在的问题梁争论中国药品生物制品检定所内容一、国内乙肝疫苗生产和质量管理概况二、不同种类乙肝疫苗免疫原性和效果比较三、影响乙肝疫苗免疫原性和效果的主要因素四、影响乙肝疫苗实际免疫效果的主要因素五、乙肝疫苗与不良反应六、目前乙肝疫苗存在的问题一、国内乙肝疫苗生产和质量管理概况1预防性疫苗种类和剂量酿酒酵母5μg/剂/0.5ml、10μg/剂/1.0ml汉逊酵母10μg/剂/1.0ml,CHO疫苗10μg/剂/1.0ml、20μg/剂/1.0ml进口疫苗:GSK10μg/剂/0.5ml、20μg/剂/1.0ml联合疫苗：GSK、北京科兴问题：种类多；但缺乏应用于特殊人群的剂型和加免程序（如肾透析病人的剂量等）2、国内上市前疫苗预防性疫苗：1.含前-S1CHO乙肝疫苗临床前2.汉逊酵母改变工艺疫苗完成临床3.进口注册疫苗:韩国绿十字公司汉逊酵母疫苗临床前治疗性疫苗：免疫复合物疫苗60μg/剂/1.0mlII期多肽疫苗II期高剂量疫苗60μg/剂/1.0mlII期表我国乙肝疫苗生产厂家一览表名称地址种类北京天坛生物制品股份有限公司酿酒酵母疫苗北京市朝阳区3间房深圳康泰生物制品股份有限公司酿酒酵母疫苗深圳市南头科技工业园区大连高新生物制药有限公司汉逊酵母疫苗大连经济技术开发区铁山西路17号长春生物制品研究所CHO疫苗长春市人民大街1485号兰州生物制品研究所CHO疫苗兰州市盐场路118号武汉生物制品研究所CHO疫苗武汉市临江路11号成都生物制品研究所CHO疫苗成都外东包江桥华尔盾生物技术有限公司CHO疫苗北京市海淀区上地开拓路5号华北制药金坦生物技术股份有限公司CHO疫苗石家庄国家高新技术开发区天山大街106号问题：厂家多、规模小、竞争降价、不利于质量保证3、生产厂家和品种4、乙肝疫苗生产和质量管理生产:2004年度共生产乙肝疫苗186批，其中酵母疫苗147批，1亿568万支；CHO疫苗39批1344万支。该年度我国生产的疫苗88.72%为酵母乙肝疫苗。质量管理：国家一级管理疫苗批签发：起始时间:2002年1月范围:国内及进口注册的每一批乙肝疫苗(用于上市销售)内容:资料审核+部分检验监督检验：成品全检二、不同种类乙肝疫苗免疫原性和效果比较疫苗种类抗体反应母婴阻断动物人体酵母+++++CHO++++++血源+++++++???表.不同乙肝抗原免疫动物抗体反应抗原ED50µg稀释度酵母1.0-1.56.7-10.0血源0.2-0.333.3-50.0CHO0.2-0.333.3-50.0动物抗体应答图.儿童免后抗体阳转率随访比较020406080100120T3T7T12T24T36T48T60T72T84MYDVAYDV931262393126451379203921101921102血源疫苗抗体阳转率显著优于5µg酵母疫苗050100150200250300350400450500T3T7T12T24T36T48T60T72T84MYDVAYDV931262393126451379203921101921102血源疫苗抗体滴度显著优于5µg酵母疫苗图.儿童免后抗体GMT随访比较人体抗体应答不同种类疫苗母婴传播效果比较87.29%74.64%90.40%54.41%0.00%20.00%40.00%60.00%80.00%100.00%国产酵母国产CHO国产血源进口酵母母婴阻断效果三、影响乙肝疫苗免疫原性和效果的主要因素1抗原特性单克隆抗体表位不同糖基化程度不同2诱导细胞免疫反应不同作为第一及唯一成功的基因工程疫苗,对乙肝疫苗结构与免疫原性进行比较,对其他种类疫苗的研制具有一定意义(一).抗原表位单抗表位分析方法的建立1.自行制备5株单克隆抗体：A1，B6，B9，B12及B13，其中A1，B13与P24和GP27均结合B6，B9，B12仅与P24单体结合，其中B6与酵母结合亲和力最强。2.应用二抗标记法放免检测乙肝抗原表位3.统计方法：A%=Acpm/（Acpm+Bcpm+Ccpm+Dcpm+Ecpm）不同种类抗原表位密度的比较表.血源抗原表位密度分析表面抗原单抗稀释度A1B6B9B12B134119.319.224.016.020.04219.618.925.315.520.74319.819.526.414.919.54419.120.525.415.919.1均值（%）19.519.525.415.620.0不同稀释度结果稳定，证明方法的可靠性表.CHO抗原表位密度分析表面抗原单抗稀释度A1B6B9B12B134120.619.125.215.619.54220.019.025.615.819.24320.020.025.715.618.94419.819.825.715.519.0均值（%）20.119.525.615.619.2不同种类抗原表位密度的比较表.酵母抗原（菲力普公司）表位密度分析表面抗原单抗稀释度A1B6B9B12B134116.430.916.616.619.54216.732.316.915.318.94316.233.016.515.019.34416.533.815.615.119.1均值（%）16.532.516.415.519.2不同种类抗原表位密度的比较表.酵母抗原（阿姆因公司）表位密度分析表面抗原单抗稀释度A1B6B9B12B134116.031.716.815.719.84217.033.015.715.119.24316.433.016.514.919.24416.033.716.314.819.3均值（%）16.032.916.315.119.4不同种类抗原表位密度的比较表.不同种类乙肝抗原表位密度分析表面单抗抗原A1B6B9B12B13血源19.519.525.415.620.0CHO20.119.525.615.619.2酵母（P）16.532.516.415.519.2酵母（A）16.032.916.315.119.4A1、B6、B9单抗结合密度，酵母抗原与CHO、血源抗原显著不同。酵母抗原与B6亲和力强。不同种类抗原表位密度的比较05101520253035表位密度A1B6B9B12B13单抗血源抗原CHO抗原酵母（P）酵母（A）图不同种类乙肝抗原表位密度分析不同来源抗原的表位密度有差异，影响疫苗的免疫原性，来源于相同基因的乙肝抗原，因表达系统和后处理工艺不同，免疫原性和效果有所不同。不同种类抗原表位密度的比较(二).糖基化程度1.不同种类疫苗糖基化程度不同表.不同种类乙肝抗原糖基化程度比较电泳不同电泳带型百分率(%)带型CHO血源酵母GP307.2GP2731.224.9P2461.475.11002.CHO抗原去糖基化研究1).去糖基化通过基因点突变方法，将编码148位苏氨酸的密码子转化为编码甘氨酸的密码，将改造后的基因转染到CHO细胞中，筛选出表达乙肝抗原的细胞株，得到CHO去糖基化疫苗，SDS-PAGE电泳结果为与酵母抗原相同的一条P24带。2).去糖基化前后表位密度的改变表.CHO抗原与5株单克隆抗体结合率比较单抗8004002005012.5（ｎｇ）均值a120.0220.3120.9321.9420.80a518.5219.3518.8215.2317.98a1120.3920.2020.2020.2420.16B921.5220.4020.4022.8521.29B1220.0020.0019.8819.7419.902.CHO抗原去糖基化研究2).去糖基化前后表位密度的改变表.去糖基化CHO抗原与5株单克隆抗体结合率比较单抗8004002005012.5（ｎｇ）均值a125.3527.7628.6129.4827.80a52.562.151.651.001.84a1128.1728.0129.4429.6728.82B929.7129.5330.8135.8431.47B1214.2112.559.494.0510.082.CHO抗原去糖基化研究表.酵母抗原与5株单克隆抗体结合率比较单抗8004002005012.5（ｎｇ）均值a130.4830.9136.7737.9434.02a56.676.498.826.747.18a1140.0041.8240.2244.3341.59B916.4315.587.747.8011.89B126.435.196.453.205.322.CHO抗原去糖基化研究2).去糖基化前后表位密度的改变图.CHO抗原去糖基化表位密度比较051015202530354045CHO去糖基化酵母a5B12a11表位结合百分率（%）CHO抗原去糖基化后,表位密度发生改变,与a11结合密度增高，与酵母抗原类似。2.CHO抗原去糖基化研究2).去糖基化前后表位密度的改变图.不同糖基化程度抗原免疫小鼠细胞免疫比较00.511.522.5高糖基化低糖基化无糖基化刺激指数去糖基化后细胞免疫增强3).细胞免疫改变2.CHO抗原去糖基化研究图.不同糖基化程度抗原免疫小鼠ED50（稀释度）比较0123456789高糖基化低糖基化无糖基化ED50(稀释度)去糖基化后体液免疫下降4).体液免疫改变2.CHO抗原去糖基化研究02468101214167天14天21天28天024681012147天14天21天28天高糖基化低糖基化无糖基化图.不同糖基化程度HBsAg热加速抗原性比较25℃37℃去糖基化影响抗原表位、细胞免疫和体液免疫，增强细胞免疫活性,但降低疫苗的抗体水平和稳定性。5).稳定性改变2.CHO抗原去糖基化研究图不同来源的乙肝表面抗原免疫小鼠后不同时间脾细胞诱生IL-2比较Merck酵母乙肝抗原诱导IL-2产生早050100150200250300350400510152025DaysIL-2(pg/ml)ControlHAMSSKCHOPlasma(三).不同种类疫苗诱导细胞免疫特点不同图.不同来源的乙肝表面抗原免疫小鼠后不同时间脾细胞诱生IFN-r比较多种抗原、多时间点细胞免疫研究表明:不同来源的乙肝抗原所诱导的细胞免疫类型不同，酵母疫苗诱导细胞免疫尤其Th1类细胞反应的能力强且时间早，可解释该类疫苗母婴传播阻断保护率高的特点。0100200300400500600510152025DaysIFN-γ(pg/ml)ControlHAMSSKCHOPlasma(三).不同种类疫苗诱导细胞免疫特点不同HBsAgX±SD（SI）510152025（天）对照NDND6.26±1.678.93±2.7711.54±1.70血源7.18±3.1125.03±3.026.23±0.8779.53±17.82**78.92±33.81**CHO15.54±3.638.62±4.247.33±1.9766.36±27.75*25.29±11.36Merck12.55±1.489.28±6.2014.99±5.4637.98±18.40*42.99±28.54汉逊27.90±16.01*14.93±8.6211.88±2.83ND68.50±9.19史克29.62±7.4410.61±9.4728.07±2.8030.67±10.9933.06±10.06(三).不同种类疫苗诱导细胞免疫特点不同表.ConA诱导不同来源免疫小鼠脾细胞的HBsAg体外增殖试验结果比较表.不同种类乙肝疫苗应用ConASI比较疫苗免后天数135Yeast0.958.655.44HP1.294.582.97CHO0.821.000.38注:对照为1所得比值(三).不同种类疫苗诱导细胞免疫特点不同特点酵母疫苗（Merck工艺）CHO疫苗血源疫苗汉逊疫苗糖基化程度无高低无动物抗体反应低中高中抗体持久性差中好----细胞免疫以Th1为主晚晚以Th1为主母婴传播阻断90%74%54%95%不同种类乙肝疫苗的特点总结1.酵母疫苗母婴传播阻断率高早期诱导特异性细胞免疫2.CHO疫苗稳定性好糖基化程度高3.血源疫苗母婴传播阻断率低可能与人体的耐受有关四、影响乙肝疫苗实际免疫效果