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流式细胞仪（FlowCytometer)基础简介中科院生物物理研究所中国科学院蛋白质科学研究平台2005年3月刘春春主要内容流式细胞仪概要流式细胞仪的工作原理流式细胞仪测量的对象什么是流式细胞仪●流式细胞仪实物BDFACSVantageBD-Calibur流式细胞仪基本结构●FCM的定义流式细胞仪是指，使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号，对信号进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。对比流式细胞仪是一种特殊的显微镜流式细胞仪显微镜流动的细胞静止的细胞样本数量大数量少高速分选样本难以再利用细胞群体特征量分布可以揭示细胞内部结构信息流式细胞仪蛋白胶多参数单参数量化的分布平均值容易检测各个参数间的相关性不容易功能特点（1）多参数定量分析每一个细胞；（2）细胞分选；高纯度：99%以上；可分析小于1/10000比例的稀有细胞群；单细胞克隆等。（3）高通量（分析分选）．分析150，000个/秒分选100，000个/秒应用领域疾病诊断生物学基础研究环境监测海洋微生物研究农业领域应用等等70年代美国为攻克癌症而建造。厂商：Becton-DicksonCoulter-BeckmanDOCytomation已成为一个几十亿美金的产业流式细胞仪工作原理流体动力学聚焦流动室激光聚焦液流与光源探测光路聚焦二色镜123带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光光信号分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号。光信号收集数据处理FSCSSCFL1FL2FL3对数线性线性线性对数脉冲处理，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）流式细胞仪产生的信号非荧光信号颗粒度细胞大小散射光信号区分裂解后的外周血细胞群荧光信号荧光染料被激发而发射的光信号。定量染色荧光信号大小被标记组分含量的定量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量PI＋Annexin－V细胞凋亡检测DNA含量-PIAnnexin-VCD45FITC(log)R1=单核细胞(CD14+ve)R2=淋巴细胞(CD45单核细胞)R3=中性粒细胞(CD45单核细胞)CD14PE(log)前向散射光(linear)侧向散射光(linear)PE＋FITC荧光标记检测外周血裂解后细胞群细胞分选流式细胞仪的测量对象大小悬浮在溶液中的相互离散颗粒。大小范围：0.2uM-300uM。对象类型细胞类型：（1）高等真核细胞；（2）酵母；（3）细菌；（4）多细胞的聚集体，如胰岛等。非生命颗粒：细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等。流式细胞仪能够检测的细胞属性和组分举例1）不需染色：大小，胞浆颗粒度，细胞自发荧光，色素，细胞精确计数。2）需染色或标记：细胞组分：细胞膜：流动性，通透性，膜电位细胞内离子：H+（可检测PH值），Na+，K+，Ca2+（结合的和自由的）。核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色质结构等总蛋白质蛋白质分子间相互作用抗原细胞骨架成分受体功能属性：酶活性细胞凋亡细胞坏死细胞活性氢硫基凝血素结合位点药物动力学……………………..经验之谈：凡细胞内能进行荧光标记的成分或者某种变化，都可用流式细胞仪进行检测。G1SphaseG2MG1121DNA含量DNA含量细胞周期时相G0/1G2/MS细胞数细胞周期分析Hoechst33258（AT）ChromomycinA3（GC）白血病患者2456X89-127recip9-221314151617Y1820192221Ph1/3染色体组型测定13生物物理所现有流式细胞仪型号：BDFACSVantageSE参数：分析10，000个/秒，分选7，000个/秒；激光：488nm，UV；四色荧光通道。地点：1406联系方式：电话64839306或：64862503电子邮件lcc@moon.ibp.ac.cn