Griess法检测NO含量

Griess法检测NO含量【实验目的】掌握Griess法测量NO含量的方法。【实验原理】NO在体内或水溶液中极易氧化成NO22-和NO33-，NO33-可通过镉被还原为NO22-。NO22-在碱性条件下和磺胺作用生成重氮化合物(重氮盐)，再与N-1-萘基乙二胺盐酸进行偶联反应(保留氮反应)，生成有颜色的化合物，通过分光光度法比色,在波长546nm下测定吸光度,并制作标准曲线，通过曲线可求得样品中NO含量。【实验材料】1.试剂：NaNO2标准液、1%磺胺、0.1%N-1-萘基乙二胺盐酸、双蒸水。2.仪器：试管7支、滴定管4支、洗耳球、分光光度计。【实验步骤】1.NaNO2标准液的稀释：取试管7支，依次标号1-7。用滴定管1号依次向2-7号试管加入双蒸水1ml，用滴定管2号向1号试管加入NaNO2标准液2ml，再用滴定管2号从1号试管吸出1ml液体加入2号试管，混匀，再吸出1ml液体加入3号试管，混匀。重复此步骤。当从6号试管吸出1ml液体时弃去。稀释步骤见图1。图1NaNO2标准液的稀释步骤2.用滴定管3号依次向1-7号试管加入1%磺胺0.5ml。3.用滴定管4号依次向1-7号试管加入0.1%N-1-萘基乙二胺盐酸0.5ml。4.依次混匀1-7号试管内液体，于常温下孵育20分钟。5.用7号试管内液体作为对照组，用分光光度计分别测定1-6号试管内液体的吸光度值并记录。用滴定管滴加液体时应注意每一只滴定管只能用于每一种试剂，切忌混用。【实验结果】1.1-6号试管内液体的吸光度值见表1。表11-6号试管内液体的吸光度值浓度（μmol/L）8040201052.5吸光度值0.90.750.430.230.120.0552.以浓度为横轴，吸光度值为纵轴，利用Excel绘制标准曲线，如图2。【讨论】在测定吸光度值时，1号试管内液体的吸光度值读数位于分光光度计数值刻盘的较大区域，其一精确度较低，其二机器已有故障，因此舍去了浓度为80μmol/L对应的吸光度值0.9，采用余下5个值绘制标准曲线，所得曲线几乎符合线形关系，R值也几乎为1，故可以利用此标准曲线求样品的NO含量。