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--1中药制剂分析实验实验一中药制剂的显微鉴别一、实验目的熟悉中药制剂的常规分析方法—显微鉴别法。二、实验原理通过用显微镜来观察中药制剂中保留有原药材的组织、细胞或内含物等显微特征，从而鉴别制剂的处方组成。三、仪器与试药1、显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、乳钵、镲镜纸、小镊子、小刀。2、水合氯醛试液、甘油醋酸试液、稀甘油（AR）。3、牛黄解毒片、蛇胆川贝散、银翘解毒片、六味地黄丸（市售品）。四、实验步骤（一）牛黄解毒片显微鉴别操作方法：取本品片心，研成粉末，取少许，置载玻片上，滴加适量水合氯醛试液，透化后加稀甘油1滴，盖上盖玻片，用吸水纸吸干周围透出液，置显微镜下观察。1、草酸钙簇晶大，直径60～140μm；2、不规则碎块金黄色或橙黄色，有光泽。（二）银翘解毒片显微鉴别操作方法：取本品粉末少许，置载玻片上用水合氯醛试液装片，透化后加稀甘油1滴，盖上盖玻片，置显微镜下观察：1、花粉粒黄色，类球形，直径54～68μm，有三孔沟；表面具细密短刺及圆粒状皱纹。2、草酸钙簇晶成片，直径5～17μm，存在于薄壁细胞中。3、联结乳管直径14～25μm，含淡黄色颗粒状物。（三）六味地黄丸显微鉴别操作方法：取本品适量，采取适当方法解离后，取少许，观察淀粉粒和不规则分枝状团块用甘油醋酸试液装片，其他用水合氯醛试液透化后滴加适量稀甘油，置显微镜下观察。1、淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm，脐点短缝状或人字状。2、不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛试液溶化，菌丝无色，直径4～6μm。3、薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。4、草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行。5、果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。--26、薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群。五、实验结果六、思考题1．试述你观察到的显微特征各代表何种中药材？2．通过以上4种中成药的显微鉴别，请你总结出中成药显微鉴别的方法及注意事项。--3实验二更年安片薄层色谱鉴别一、实验目的1掌握薄层荧光法的原理及操作。2掌握薄层色谱法在中药制剂鉴别中的应用。二、实验内容利用薄层色谱法对更年安片中五味子和制何首乌进行鉴别。三、基本原理更年安片由地黄、泽泻、五味子、制何首乌等药味组成，可利用薄层色谱法对五味子和制何首乌进行鉴别。五味子中主要有效成分为木脂素类，五味子甲素为其主要有效成分之一，可吸收UV光，在硅胶GF254薄层板上形成暗斑，用对照药材和对照品进行对照，可鉴别制剂中五味子；制何首乌中主要有效成分为蒽醌类，主要为大黄素和大黄素甲醚等成分，在可见光下呈黄色，在氨蒸气中斑点呈红色，紫外光（254nm或365nm）照射下产生荧光，在硅胶G薄板上可在可见光、紫外光或显色后检视其斑点，用对照药材和对照品进行对照，可鉴别制剂中何首乌。四、仪器设备及材料双槽层析缸、玻璃板、三用紫外线分析仪、分析天平、硅胶G、硅胶GF254、五味子对照药材、何首乌对照药材、对照品、更年安片等。五、操作步骤（一）五味子鉴别1．薄层板制备：含0.3%的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板（实验前自制）。2．供试品溶液制备：取更年安片20片，除去糖衣，研碎，加氯仿30mL，置水浴上加热回流90分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1mL使溶解，作为供试品溶液。3．对照溶液制备：取五味子对照药材0.5g，同上法制成对照药材溶液。取五味子甲素对照品，加氯仿制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。4．薄层层析：将薄层板的边缘修饰整齐，作好标记。用毛细管吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30~60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15﹕5﹕1）的上层溶液为展开剂，预平衡15~30分钟，展距10cm，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（二）何首乌鉴别1．薄层板制备：含0.5%氢氧化钠溶液的硅胶G板（实验前自制）。2．供试品溶液制备：取更年安片，除去糖衣，研碎，加甲醇100mL，置水浴中加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸2mL，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚20mL分2次提取，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加氯仿1mL使溶解，作为供试品溶液。3．对照溶液的制备：取何首乌对照药材1.5g，同上法制成对照药材溶液。取大黄素、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。4．薄层层析：将薄层板边缘修饰整齐，作好标记。用毛细管吸取上述三种--4溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（15﹕2﹕1）为展开剂，预平衡15~30分钟，展距10cm，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，分别在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨气中熏后，可见光下检视，斑点变为红色。六、实验结果七、思考题硅胶GF254、硅胶G、硅胶H有何不同？实验中如何选择和使用？--5实验三Ag-DDC法定冰片中砷盐限量一、目的要求1、掌握砷盐的测定方法（Ag-DDC法）。2、了解中药制剂含砷量的测定步骤及操作。二、基本原理本法为中国药典规定砷盐检查第一法。锌和酸作用所产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢，再与溴化汞试纸作用生成黄色至棕色砷斑。与同条件下一定量标准砷溶液所产生的砷斑比较，以判定供试品的砷盐限量。AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O产生的砷化氢与溴化汞试纸作用。AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2(黄色)AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3(棕色)因为AsO43-在酸性溶液中被Zn还原的速度很慢，为提高反应速度，常在反应液中加入KI及酸性SnC12将AsO43还原为AsO33，KI被氧化生成I2，以SnC12来还原，使反应液中维持有KI的还原剂存在。AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成配合物，使生成砷化氢的反应不断进行。4I-+Zn2+→[ZnI4]2-供试品和锌粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生H2S气体，干扰实验，故需采用醋酸铅棉花吸收除去H2S。H2S+Pb(CH3COO)2→PbS↓+2CH3COOH三、仪器与试药1、分光光度计。2、古蔡法测砷装置（见附图）。3、二乙基二硫代氨基甲酸银（Ag-DDC）试--6液、标准砷试液（1µgAs/ml）、碘化钾试液、酸性氯化亚锡试液、醋酸铅棉花。4、冰片（市售品）。操作步骤测试前，先于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度约80mm）；并于D管中精密加入Ag-DDC试液5ml。1、标准砷对照液的制备精密量取标准砷溶液5ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水2ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C与A瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入D管中，并将A瓶置25～40℃水浴中反应45分钟，取出D管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。2、供试品的制备取冰片1g，加氢氧化钙0.5g与水2ml，混匀，置水浴上加热使冰片挥发后，放冷，加盐酸中和，再加盐酸5ml与水适量使成28ml，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。1、检查法将上述供试品置A瓶中加蒸馏水5ml，照标准砷对照液的制备，自“加盐酸5ml与水2ml”起，依法操作。将标准液和样品液移至1cm比色皿中，用分光光度计在510nm波长处以Ag-DDC试液作空白，测定吸收度，样品液吸收度不能比标准对照液吸收度大。四、注意事项1、标准砷斑的制备应与样品检查法平行操作。2、制备标准砷斑应与供试品检查同时进行。因砷斑不稳定，反应中应保持干燥及避光，并立即比较。3、浸入乙醇制溴化汞试液的滤纸的质量，对生成砷斑的色泽有影响，因此必须选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸，溴化汞试纸一般宜新鲜制备。五、思考题1、导气管中加醋酸铅棉花的目的是什么？2、根据以上测定结果，附子理中丸样品砷盐限量是多少？3.砷盐检查第一法和第二法的异同何在？各自的关键环节是什么？实验四黄连上清丸重金属的检查--7一、目的要求1、掌握中成药炽灼的基本方法和操作。2、熟悉中成药消化后进行重金属检查的方法与原理。二、基本原理中药制剂常含有大量有机化合物，在进行重金属检查前必须先进行有机破坏，进行有机破坏时，炽灼温度对重金属的影响很大，温度越高重金属损失越多，药典规定炽灼温度应控制在500～600℃使完全灰化，炽灼残渣加0.5ml硝酸加热处理，使消化完全，必须蒸干除尽氧化氮，蒸干后加盐酸使成盐酸盐，水浴加热蒸干，赶除残留盐酸，加水溶解，调pH3.5，依法检查，重金属检查的化学反应原理同实验六。三、仪器与试药1、电炉、马福炉、坩埚、恒温水浴锅。2、25ml纳氏比色管及比色管架。3、万分之一分析天平。4、量瓶、刻度吸管、烧杯、量筒、蒸发皿等。5、其他试剂为AR级。6、黄连上清丸（市售品）。四、操作步骤取本品5丸，切碎，过二号筛，取1.0g，精密称定重量，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化(或在电炉上缓缓加热至冒白烟，但不得起明火)，放冷至室温，加硫酸0.5～1ml使湿润，低温加热硫酸蒸气除尽后，再在马福炉中500～600℃炽灼使完全灰化，移置于干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在500～600℃炽灼至恒重，放冷，加硝酸0.5ml蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后，加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，微热溶解后，完全转移至纳氏比色管中，加水稀释成25ml；另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH=3.5）2ml与水15ml，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加标准铅溶液2.5ml，再用水稀释成25ml，再在样品与对照品纳氏比色管中分别加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，样品管中显出颜色与对照品管比较，不得更深。五、注意事项：1、对马福炉的使用要严格按操作规程操作。2、对照品的配制要从加0.5ml硝酸蒸干开始。六、思考题1、根据试验计算对黄连上清丸的重金属含量限度。2、配制对照品时，为什么要取配制供试品溶液的试剂?3、本次实验应注意哪些安全事项?--8实验五中药制剂中乌头碱限量检查一、目的要求1、掌握乌头碱在中药制剂中的限量检查方法。2、熟悉用薄层色谱法进行中药制剂的限量检查。二、仪器与试药1、薄层铺板仪、分析天平（1/10万）、水浴锅、振荡器。2、乙醚、无水乙醇、苯、醋酸乙酯、二乙胺、羧甲基纤维素钠、硅胶G（薄层层析用）、其他试剂均为分析纯。3、氨试液，稀碘化铋钾试液。4、乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所）。5、附子理中丸（市售品）。三、操作步骤取本品水蜜丸25g或大蜜丸36g，切碎，置表面皿中，加氨试液4ml，拌匀，放置2小时，加乙醚60ml，振摇1小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另精密称取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取供试品溶液12μl、对照品溶液5μl，照薄层色谱法试验，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯－醋酸乙酯－二乙胺（14：4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。四、思考题1、除薄层色谱法外，还可用什么方法进行酯型生物碱的限量检查？2、乌头碱在本品中的限量是多少？--9实验六甲苯法测定中药制剂中水分含量一、目的要求掌握甲苯法测定中药制剂中水分的原理和操作方法。二、基本原理中药制剂水分测定的常用方法有烘干法和甲苯法，烘干法适用于不含或少含挥发性成