结核病分子诊断整体方案

“晶芯”结核感染、耐药结核病分子诊断整体解决方案博奥生物有限公司医学技术事业部田文标1汇报提纲背景概述结核病分子诊断系统简介临床应用总结2临床背景结核（TB）感染肆虐全球（30%）非结核分枝杆菌（NTM）异军突起合并感染日益增多（HIV、免疫低下人群）氨基糖苷类药物致聋问题日益突出（68万，3.4%）3临床面临的一些问题涂阳结核疑似患者的鉴别诊断：TB/NTM?菌阴结核的早期诊断：灵敏度、检出率TB/NTM的治疗延误：诊断延误抗结核治疗中的药毒性问题（一针致聋）鉴别诊断+灵敏度+时效性+药毒性监测4实验室诊断现状抗酸涂片：灵敏度低，易漏诊不能区分TB/NTM菌种鉴定、药敏试验：再加4-8周细菌培养：耗时4-8周灵敏度、时效性、快速鉴别诊断均无法实现！晶芯®分枝杆菌核酸检测试剂盒晶芯®分枝杆菌菌种鉴定试剂盒晶芯®结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒晶芯®九项遗传性耳聋基因检测试剂盒MDR早期诊断药毒性监测”晶芯”结核病分子诊断系统菌种鉴定筛查、鉴别诊断实时荧光PCR基因芯片快速检测平台3-6小时高效：一个样本可同时检测结核分枝杆菌和NTM快速：4周（菌培）3小时灵敏：10个菌/反应（TB）；102个菌/反应（NTM）6产品之一：分枝杆菌核酸检测试剂盒功能：TB快速筛查；TB/NTM鉴别诊断目前市场上唯一可以快速区分TB和NTM感染的PCR产品7非结核分枝杆菌（NTM）：4.3%-11.1%-22.9%（83/363）——全国第五次结核病流行病学抽样调查资料汇编，2011.12第一版p26，王宇NTM病与结核病在病理表现、影像学表现及临床症状方面极为相似，不易鉴别，但对抗结核药耐药率高达80%以上。为何要区分TB和NTM？NTM病、TB及常见细菌感染治疗方案各不相同。需区别对待，进行针对性治疗。TB感染无TB感染•NTM•其他常见菌TB感染NTM感染无分枝杆菌感染区分TB和NTM的优势何在？普通PCR产品博奥PCR产品提高治疗针对性只能区分（单指标）同时区分（双指标）9初治涂阴、培阴结核疑似患者：确诊；灵敏度涂阳或菌阳，抗结核治疗效果不佳、复治、病情易反复患者：鉴别诊断（TB/NTM）疑似分枝杆菌合并感染患者：免疫力低下人群（HIV）；手术伤口长期不愈合；抗菌治疗无效等适用患者类型性能评测：临床试验结果医院名称临床灵敏度（%）临床特异性（%）菌阳灵敏度（%）菌阴灵敏度（%）北京老年医院48.199.395.914.5309医院50.910098.731.9北京结核病控制研究所51.996.996.723.8平均值（1017例）50.398.99724.410菌阴肺结核（40%~60%）：近一半的病人将发展为涂阳,成为新的传染源。以影像学诊断为基础的菌阴肺结核患病率/新报告病例涂阳肺结核涂阴肺结核中国（2000流调）中国（2006新）印度（2006新）美国（2006新）德国（2006新）367/10万71/10万107/10万5/10万6/10万122/10万35/10万48/10万2/10万2/10万245/10万（67%）36/10万（51%）59/10万(55%)3/10万（60%）4/10万（67%）菌阴肺结核的诊断是临床诊断难点；菌阴肺结核会延误治疗，严重妨碍结核疫情的控制。11小结快速确诊：避免延误治疗及时鉴别：避免NTM误诊为结核提高检出灵敏度：及早控制潜伏感染12高效：同时检测17种分枝杆菌（包括TB）快速：＞4周（菌种鉴定）6小时灵敏：103个菌/反应准确：Nature全球推荐国际主流平台检测范围：结核、胞内、鸟、戈登、堪萨斯、偶然、瘰疬、浅黄、土、龟-脓肿、草、不产色、海-溃疡、金色、苏尔加、蟾蜍、耻垢。13产品之二：晶芯®分枝杆菌菌种鉴定试剂盒（DNA微阵列芯片法）院内感染：消毒剂、重金属耐受性（蟾、偶然、龟分枝杆菌；手术注射引起感染。入侵途径：呼吸道、胃肠道、皮肤黏膜；1亿人感染。14为何要进行NTM菌种鉴定？菌种不同化疗方案不同：无一致标准；18-24个月。肺内、肺外NTM病均需进行菌种鉴定—NTM病诊断与处理指南2000版致病菌种敏感药物耐药药物鸟-胞内分枝杆菌复合群•CIP(orLEV)•AZM(orCLA)•Imipenem•INH•AMK•Rifabutin(orRifapentine)•Clofazimine•EMB•PZA堪萨斯分枝杆菌•RFP•INH•EMB•PZA偶然分枝杆菌•AZM(orCLA)•Minocycline•Imipenem•DOX•Cephalosporins•SM•SMZ•TMP•CIP瘰疬分枝杆菌•Rifabutin(orRifapentine)•AZM(orCLA)•Clofazimine•INH•PZA•RFP•EMB•AMK•CIP(orLEV)海分枝杆菌•RFP•DOX•SMZ•EMB溃疡分枝杆菌•Clofazimine•RFP•SM•SMZ•EMB龟分枝杆菌•AZM(orCLA)•AMK•FQs•Cephalosporins脓肿分枝杆菌•CIP(orLEV)•AZM(orCLA)•RFP玛尔摩分枝杆菌•EMB•RFP•CIP(orLEV)•SM•INH•AZM(orCLA)•PZA蟾蜍分枝杆菌•CIP(orLEV)•SM•RFP•PZA•INH•AZM(orCLA)•EMBAZM：阿奇霉素CLA：克拉霉素Rifabutin：利福布汀Rifapentine：利福喷汀AMK：阿米卡星（丁胺卡那霉素）CIP：环丙沙星LEV：左氧氟沙星Imipenem:亚胺培南clofazimine：氯法齐明EMB：乙胺丁醇PZA：吡嗪酰胺INH：异烟肼DOX:多西环素Minocycline:米诺环素SM:链霉素Cephalosporins:头孢西汀SMZ:磺胺甲噁唑TMP:甲氧苄啶98：福建南平市延平区樟湖镇的一个诊所因玻璃注射器灭菌失效，先后有59人感染分枝病菌（烂屁股病）。09：广东省汕头市潮阳区谷饶中心卫生院的38名剖宫产患者中，共有18名发生手术切口分支杆菌感染。10：河北省保定市新市区某个体诊所90例患者因肌肉注射导致注射部位偶发分支杆菌感染。16NTM爆发案例12：多人疑因针灸感染分枝杆菌温州永嘉“怪病”调查。17每天清洗要花1小时，已持续了1个月。“伤口就像嘴，清洗就像刷牙。”汕头市潮阳区卫生局发布，9名相关责任人已受行政处分。2012/11/618妇儿医院手术切口分枝杆菌感染暴发（广东深圳，1998）表现：1998年4月1日～5月31日共手术292例，4月22日～7月14日发生切口感染166例，潜伏期为20～30天。切口部位开始为小结节，继而化脓成窦道，清创换药后创面清洁但不愈合，或愈合后又复发。调查：20份切口分泌物标本培养出龟分支杆菌（脓肿亚型）。结论：戊二醛浓度错配导致手术器械分支杆菌污染，从而引起切口感染。46人索赔2000多万元！19涂阳但临床表现与肺结核不相符者初治结核病患者对抗结核药物耐药接受正规抗结核治疗无效而反复排菌的患者。有免疫缺陷但已除外肺结核的肺病患者。医源性或非医源性软组织损伤或外科术后伤口长期不愈找不到原因者。适用患者类型专家呼吁：需重视NTM检测外伤、创伤引起的NTM感染免疫缺陷（HIV）：综合医院感染科或性病门诊糖尿病诱发/易感TB、NTM：综合医院内分泌科及糖尿病专科医院20性能评测：临床试验总结医院样本组成合计（例）结核样本（例）NTM样本（例）实验室评估样本（例）北京胸科医院57720153831上海市肺科医院38311753553广州市胸科医院13814953340合计109846715917241565各家医院临床样本验证符合率100%（测序、双盲）21性能评测：临床研究报告博奥分枝杆菌菌种鉴定阵列的性能评估结果：24株标准菌株、486株结核分枝杆菌临床分离株及40例临床样本MTC和NTM的测序符合率分别为100%和98.4%。TB分离株鉴定灵敏度和特异性分别为99.6%和100%。——LiuJ,YueJ,YanZ,etal.PerformanceAssessmentofCapitalBioMycobacteriaIdentificationArrayforIdentificationofMycobacteria.JClinMicrobiol,2011.22•[1]张晓,刘晓清,张丽帆,朱朝晖,赵智贤.多种诊断技术在全身播散性结核病诊治中的联合应用.中国医学科学院学报.2009.31(4):453-458,后插3.•[2]崔鲂,夏云,张莉萍,陈宏础.生物芯片法在结核分支杆菌检测中的应用价值探讨.重庆医学.2009.38(19):2411-2412,2415.•[3]张立群,王云霞,周敏,黄君富,府伟灵.4种不同结核分枝杆菌检测方法对结核病的诊断价值比较.中华医院感染学杂志.2010.(11):1633-1635.•[4]张立群,王云霞,姚春艳,周敏,黄君富,府伟灵.高特异性基因芯片法检测结核分枝杆菌的临床应用评价.中华医院感染学杂志.2010.(11):1505-1508.•[5]ZhuL,JiangG,WangS,etal.Biochipsystemforrapidandaccurateidentificationofmycobacterialspeciesfromisolatesandsputum.JClinMicrobiol.2010.48(10):3654-60.临床研究报告23性能评测：临床研究报告•[6]石玉玲,陈建芸,李林海等.应用基因芯片快速检测分枝杆菌.生物技术通讯.2011.22(3):419-423.•[7]LiuJ,YueJ,YanZ,etal.PerformanceAssessmentofCapitalBioMycobacteriaIdentificationArrayforIdentificationofMycobacteria.JClinMicrobiol,2011.•[8]PangY,ZhouY,WangS,etal.Rapidmolecularidentificationofmycobacterialspeciesinpositivecultureisolatesusingthebiochiptest.IntJTubercLungDis,2011,15(12):1680-5.•[9]王峰,朱玉梅,桂静,等.PCR测序和基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种的应用研究.中国防痨杂志,2011,(11):713-717.病人情况病史2004年春，三姐妹因不明原因发热入院第二天较小的两姐妹呼吸衰竭入ICU怀疑SARS，两姐妹治疗无效死亡。分枝杆菌菌种鉴定鸟分枝杆菌卫生部派专家会诊调整治疗针对性抗菌素治疗大姐治愈出院案例回顾——宁夏医科大学附属医院(NTM菌种鉴定的必要性)大姐依然发热24病史抓虾刺伤中指，抗感染无效中指清创引流手术后化脓多种抗生素20天治疗无效分枝杆菌菌种鉴定：芯片诊断伤口深部脓液6小时海分枝杆菌调整治疗改用丁胺卡那霉素注射液治愈出院临床应用案例——广州军区总医院（菌种鉴定确诊外伤感染病例）25通量：两个一线抗结核药（MDR）速度：8周（药敏）6小时灵敏度：103个菌/反应特异性：对照设计严谨；软件自动判读获国家医疗器械证书和欧盟CE认证；基于rpoB（利福平）和katG/inhA（异烟肼）的基因突变，对耐药结核病做出快速诊断。26产品之三：晶芯®结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒27疗程复发率治愈率普通结核6个月2-3%＞90%MDR18-24个月30-40%低、病死率高传染期延长,一旦传染就是原发性耐药医药费用比普通结核高100倍以上治愈率低、病死率高已成为全球结核病防控战役的重中之重！结核病防控最大威胁：耐多药结核28MDR防控的根源是诊断问题！但是，全球结核病高负担国家中，只有不到5%的耐多药结核得到了合适的诊断。—