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葡萄球菌属链球菌属埃希菌属沙门菌属弧菌属气单胞菌属分类以金黄色葡萄球菌为例1.根据抗原结构：属、群（兰氏分类）、型2.按溶血能力：α、β、γ副溶血弧菌鳗弧菌代表种：嗜水气单胞菌形态球状，排列成葡萄串状，无芽孢鞭毛球形或卵圆形，直径0.6-1.0um。呈链状排列，链长短不一。致病性菌链长，液体培养基中菌链长。格兰阴性无芽孢小杆菌，散在或成对，周毛菌，有菌毛与大肠杆菌相似，除鸡白痢和鸡伤寒沙门菌无鞭毛不运动外，其它均以周生鞭毛运动。革兰氏阴性，有鞭毛和菌毛培养及生化特性1.普通培养基生长良好，湿润、光滑、隆起的圆形菌落；2.血平板上生长更加，致病菌株溶血（β溶血）：不在麦康凯生长：3.产生金黄色色素；4.高度耐盐（10%—15%氯化钠）；5.分解葡、乳、麦、蔗，产酸不产气，致病菌株分解甘露醇。1.大多数兼性厌氧，少数厌氧；2.营养要求复杂，需添加血清、血液、葡萄糖等；3.血平板上形成灰白色、表面光滑、边缘整齐的细小菌落；不同菌株溶血不一；4.血清肉汤中形成长链，管底絮状沉淀。1.普通培养基生长良好，形成光滑、湿润、半透明、灰白色菌落；2.在麦康凯培养基上形成红色菌落，伊红美兰培养基上形成黑色带金属光泽的菌落。3.绵阳血平板上呈β溶血；4.生化实验：糖发酵实验（大多发酵乳糖），IMViC（++--），H2S(-),1.在选择培养基（麦康凯）上因不发酵乳糖而成无色菌落；2.糖发酵（2、5不发酵）IMViC(-+-+),多数菌种H2S试验为阳性。1.普通营养琼脂培养基即可生长；2.麦康凯培养基上生长良好；3.致病菌株在绵阳血平板上出现β溶血；4.在弧菌选择培养基TCBS和6%NaCl中不生长；5.对弧菌抑制剂0/129不敏感抗原性1.多糖抗原：磷壁酸中的核糖醇残基；2.蛋白质抗原：细胞壁的一种表层蛋白1.抗原：1）菌体抗原（O抗原）：成分为LPS中侧链多糖，174种，耐热，一个菌株仅含一种；2）荚膜抗原（K抗原）：其成分多为多糖（K88、K99为蛋白质），80种，一个菌株可含1-2甚至无，根据耐热程度分为L、A、B型；3）鞭毛抗原（H抗原）：成分为蛋白质，不耐热，53种，一个菌株含一种。2.血清型：表示方式:O:K:H如O8：K23(L)：H19抵抗力较强，能在干燥浓汁或血液中存活数月，80℃下30min死亡，煮沸迅速死亡，对多种药物产生抗药性。不强，对热敏感致病性和毒力因子1.化脓性疾病；2.毒素性疾病（由葡萄球菌外毒素引起）：A.α毒素（α溶血素）B.肠毒素，耐热抗酸，20多个血清型，引起急性胃肠炎，呕吐。C.凝固酶:游离凝固酶，；结合凝固酶。作用：有助致病菌株抵抗吞噬和杀菌物质。D.耐热核酸酶、纤维蛋白溶酶、透明质酸酶致病性物质：1.脂磷壁酸—重要的黏附素；2.M蛋白—抗吞噬；3.大量繁殖可形成链球菌溶血素、致热外毒素等毒性物质，透明质酸酶、链激酶、DNA酶等。所致疾病（无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、化脓链球菌）——牛乳腺炎；马链球菌兽疫亚种——多种动物炎症及败血症；马链球菌马亚种——马腺疫；猪链球菌——人和猪炎症及败血症；肺炎链球菌——幼畜炎症及败血症。致腹泻大肠杆菌：ETECEHECEPECEIECEAEC其它病原性大肠杆菌：UPECSEPECAPEC(一)ETEC：引起动物和人腹泻主要毒力因子：1.黏附素(定居因子)：菌毛，黏附于小肠上皮细胞，是首要毒力因子；2.肠毒素：分泌至胞外的蛋白质性激素1）不耐热肠毒素（LT），对热敏感，可转变为类毒素，由A、B亚单位组成；2）耐热肠毒素（ST）耐热、分子量小、无免疫原性。（二）STEC常致猪水肿病，有两种毒素：1.黏附性菌毛2.志贺毒素主要毒力因子多数具有致病性，是一种重要的人畜共患病原菌。根据对宿主适应性不同，可分为：1.专嗜性：如鸡白痢、鸡伤寒沙门菌2.偏嗜性：如猪霍乱沙门菌3.泛嗜性：如肠炎沙门菌（一）副溶血弧菌致病性：食物中毒，急性腹泻，在我国沿海地区及海岛常见病原菌致病因子：耐热直接溶血素（TDH）耐热相关溶血素（TRH）神奈川试验：使人或家兔的红细胞发生溶血，在血琼脂培养基上出现溶血带。阳性结果与副溶血性弧菌分离株的致病性显著相关。（二）鳗弧菌主要危害鳗、香鱼、鲑鳟鱼等海水鱼或咸水湖泊的养殖鱼。引起口部及体表的溃疡、肌肉、鳍部的局部坏死病灶及全身症状。引起败血症或皮肤溃疡等局部症状，是水生动物尤其是鱼类的最常见的致病菌；人感染会引起急性胃肠炎，是食品卫生检验的对象。毒力因子：1.黏附素：菌毛、S蛋白、外膜蛋白2.胞外产物:毒素（溶血性、肠毒性和细胞毒性，属穿孔毒素）、蛋白酶（讲解酪蛋白、纤维蛋白等、抗补体、活化毒素前体）3.调控系统微生物学诊断标本采集：化脓性病灶采取浓汁、渗出液；败血症采取血液；脑膜炎采取脑脊液；食物中毒分别采取食物、呕吐物和粪便。直接涂片镜检分离培养：普通、血液、高盐鉴定：纯培养物1.致病性葡菌的鉴定：1）产生凝固酶和耐热核酸酶；2）产生金黄色色素，有溶血性；3）发酵甘露醇。2.葡菌肠毒素的鉴定：分离鉴定是，接种至肉汤培养基，后去滤液注射之6-8周龄的幼猫。标本采集：渗出液、浓汁、乳腺炎乳液、脑脊髓液、尿液及感染组织。检查方法：1.直接检查：涂片、染色、镜检；2.分离培养，接种学血平板，观察菌落形态、溶血情况；3.细菌鉴定：菌落形态、溶血特性、细菌形态、生化特性。如定群、定型，则要作血清学试验。标本采集：根据不同临床症状，采集适当样本检查方法：1.分离培养基：选择培养；2.生化试验：糖发酵试验、H2S阴性（TSI培养基）、IMViC试验。3.血清学试验：玻片凝集试验鉴定血清型同埃希菌属与大肠杆菌的鉴别诊断1.细菌分离培养2.生化试验3.O/129敏感试验及血清学试验1.细菌分离培养；2.生化实验；3.判定致病性，需检测胞外蛋白酶等毒力因子判定标准：革兰阴性，氧化酶阳性；葡萄糖产气，发酵甘露醇、蔗糖；利用阿拉伯糖，分解水杨苷；鸟氨酸脱羧酶阴性。1.金黄色葡萄球菌可产生的毒素、酶及其致病作用。2.链球菌产生的毒素、酶及其致病作用。3.链球菌在血液琼脂培养基上的溶血表现。4.链球菌的兰氏分群。1.大肠杆菌和沙门菌的培养及生化特性。2.大肠杆菌和沙门菌的鉴别诊断要点。3.副溶血弧菌的微生物学诊断要点。4.如何鉴定致病性嗜水气单胞菌？（一）抗原：1.O抗原：LPS的侧链多糖，耐热，以阿拉伯数字表示，至少60种；2.K抗原：荚膜抗原，毒力因子，又称Vi抗原，有的菌种有，有的没有；3.H抗原：鞭毛抗原，蛋白质，不耐热，63种，分为两相：1）第一相（特异相）:小写英文字母表示2）第二相（非特异相：阿拉伯数字表示（二）血清型：O抗原：第1相H抗原：第2相H抗原如：1，4，[5]，12：i:1,2有Vi抗原的，则表示为：O抗原：Vi抗原：第1相H抗原：第2相H抗原革兰阴性弧状杆菌，血平板上生长有溶血性；嗜盐，大多数副溶血弧菌对弧菌抑制剂O/129不敏感，但鳗弧菌极敏感。被检材料分离培养三糖铁琼脂斜普通琼脂斜涂片镜检生化反应血清型鉴定巴氏杆菌属里氏杆菌属嗜血杆菌属放线杆菌属布氏杆菌属（格兰阴性需氧）芽孢杆菌属（G+产芽孢）分类多杀性巴氏杆菌为本属最重要畜禽致病菌鸭役里氏杆菌是本属代表钟胸膜肺炎放线杆菌为代表钟6个种：马耳他布氏杆菌（羊型）流产布氏杆菌（牛型）绵阳布氏杆菌猪布氏杆菌犬布氏杆菌沙林鼠布氏杆菌主要致病菌：炭疽芽孢杆菌，人、畜共患；蜡状芽孢杆菌，产肠毒素，引起食物中毒；其它多为腐生菌，在土壤、水中，如枯草芽孢杆菌。形态两端钝圆，中央微凸的短杆状革兰阴性细菌，单个或成对排列；病料图片用瑞氏染色或美蓝染色，呈典型的两极着色；培养物所做涂片两极着色不明显。椭圆、杆状的革兰阴性菌，多数单个分布，少数成双或成链排列；两极着色，无芽孢无鞭毛，可形成荚膜多为短杆，格兰阴性，有时呈多形性；两极着色，无芽孢无鞭毛，新分离致病菌株有荚膜。G-、小球杆菌，有时呈多形性，新鲜病料呈两极着色。有荚膜和鞭毛。G-,球形或短杆状，多单在；无芽孢，无荚膜，无鞭毛不运动；抗酸染色阳性（红色）；柯兹罗夫染色法染成红色。革兰阳性大杆菌，菌体平直，两端平截。在血液和组织中，单在或短链，培养后形成长链，呈竹节状。在组织或含血液的培养基中，形成荚膜。在有氧条件下形成芽孢，位于菌体中央，不膨大。无鞭毛。培养及生化特性1.对营养要求严格，在麦康凯培养基上不生长，普通培养基上生长贫瘠，在血液或血清培养基上生长良好，不溶血，形成灰白色珍珠状针头大小的菌落。2.可分解葡、半乳、果、甘、蔗。1.营养要求高，普通培养基和麦康凯培养基不生长，在巧克力培养基或胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）上形成圆形、微凸起、光滑、奶油状的菌落；2.大多生化试验为阴性，糖发酵实验中葡、蔗不发酵。初次分离培养时供给5%-10%CO2可促进生长，本均属生长需供给X因子和V因子（细菌呼吸链中起递氢作用的两种脱氢辅酶），在巧克力平板上生长更加。普通培养基上不生长，需添加V因子，巧克力培养基生长长较佳，在血液琼脂培养基上呈不透明扁平圆菌落；在有金黄色葡萄球菌存在时，呈β溶血（CAMP试验）1.本菌专性需氧，初次分离培养需加入5%—10%CO2，泛酸钙和内消旋赤藓糖醇可促进生长；在培养基中加入血液、血清或肝浸液可促进其生长，不溶血；生长缓慢，通常需5-15d甚至20-30d。2.在液体培养基中生长微浑浊，时间久可形成很厚菌膜；固体培养基上有S、M、R型菌落，大小不一。1.需氧或兼性厌氧，最适温度30-37℃，营养需求不高，在普通培养基生长良好：强毒株菌落R型，灰白色，大而扁平，表面干燥；弱毒菌株为稍小S型。绵阳血平板不溶血；发酵葡萄糖，产酸不产气；2.液体培养基中絮状沉淀；3.穿刺实验，形成倒立雪松状，表面漏斗状；4.在含青霉素0.5U/ml液体培养中，由于细胞壁的肽聚糖合成受抑制，原生质体融合连接成穿，称为“串珠反应”。抗原性血清型1、菌体抗原：16个，阿拉伯数字表示2.荚膜抗原:5个，大写英文字母表示例：我国最多的禽多杀性巴氏杆菌5：A公认21种，阿拉伯数字表示12514最常见，我国13种根据培养时对NAD的依赖性，可分为生物Ⅰ型和生物Ⅱ型：生物Ⅰ型包括1-12和15生物Ⅱ型包括血清型13和1415911型有很强毒力，36型较温和（一）属内抗原：A、M、R抗原1.光滑型布氏杆菌有A和M两种菌体抗原成分（脂多糖的侧链多糖），是细菌的凝集抗原，各菌种含量不同，不与非光滑菌发生交叉凝集；2.R抗原：非S型布氏杆菌共有抗原，不与S型菌发生凝集；3.变异：SR型，失去A、M抗原而暴露出非特异型抗原R。（二）属外抗原可与巴氏杆菌、变形杆菌、大肠杆菌等细菌发生交叉凝集反应。（一）结构抗原1.菌体抗原多糖，与毒力无关，耐热，煮沸甚至高压消毒处理，抗原性不破坏。Ascoli反应：病畜皮毛或腐败脏器煮沸很长时间仍然能与特异性抗体形成环状沉淀，2.荚膜抗原多肽与毒力和抗吞噬有关；3.芽孢抗原有芽孢外膜和皮质组成，有免疫原性。（二）保护性抗原（PA）炭疽毒素（PALF：致死因子EF：水肿因子）组成之一，具有免疫原性。抵抗力1.本菌抵抗力不强，普通消毒水正常浓度可达消毒效果；2.在无菌蒸馏水或生理盐水中很快死亡；3.冻干菌种可在低温中保存26年。不强，分离到的嗜血杆菌需立即移植或冻干保存。本菌繁殖体抵抗力不强，常用消毒剂可短时间内杀死。芽孢抵抗力极强，干燥状态下可存活40年，煮沸经25min、121℃经10min或160℃干热经1h可被杀死。对碘敏感。致病性免疫性毒力因子1.本菌是多种动物的重要病原菌，可引起出血性败血症、肺炎，如猪肺疫、禽霍乱。实验动物中小鼠易感。2.康复动物具有较强的免疫力，且对其他血清型有交叉保护力；该菌的高免多价血清有良好的紧急预防和治疗作用。主要感染雏鸭。2-3周龄，引起急性或慢性败血症和浆膜炎。可引起人和动物多种疾病，毒力因子包括荚膜、菌毛、内毒素，与兽医相关：1.副猪嗜血杆菌：可引起猪心肌炎、胸膜炎、腹膜炎及关节炎，常与猪流感病毒联合引起猪流感；2.副禽嗜血杆菌：常引起鸡传染性鼻炎，导致产蛋量迅速下降。1仅感染猪，引起纤