血液病分子病理诊断XXXX06

北京海思特临床检验所分子病理室2013.06细胞遗传学形态学分子生物学流式细胞学染色体核型分析荧光原位杂交RT-PCR测序多重荧光巢式PCR定量PCR直接测序GeneScan血液病诊断分型定量监测MRD白血病预后靶向治疗耐药及疾病进展监测范可尼贫血嗜血细胞综合症等融合基因检测基因突变检测血液遗传病检测大多数情况下，某一患者只有一种融合基因阳性46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21)BMmorphology:APLFCM:M3QPCR:PML/RARA+BCR/ABL(190)+多重巢式RT-PCR筛查定性检测用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因。荧光定量RT-PCR定量检测内参基因c-abl结果以比值表示，全程动态监测融合基因的拷贝数/内参基因c-ablPCR-测序筛查每月定量监测3-6月定量监测每月定量监测CML慢性粒细胞白血病Ph染色体t(9;22)(q34;q11)ET原发性血小板增多症JAK2V617F*PV真性红细胞增多症JAK2V617F*CIMF慢性特发性骨髓纤维化JAK2V617F*HES特发性高嗜酸性粒细胞白血病FIP1L1-PDGFRα4q12缺失CMML慢性粒单核细胞白血病TEL/PDGFRβ:t(5;12)(q33;p13)*WilliamV,StefanN.AuniqueactivatingmutationinJAK2(V617F)isattheoriginofpolycythemiaveraandallowsanewclassificationofmyeloproliferativediseases.Hematology.2005,10-13:195-200约95%的CML5%的儿童ALL15%-30%的成人ALLBCR/ABLJAK2V617FPV(-)65%-97%(+)纯合子多见少数JAK2V617F(-)12Exon突变ET(-)50%(+)CIMF(-)50%(+)JAK2V617F(-)5%MPLW515L/K(+)MolecularPathology：themolecularbasisofhumandiseasebyWillamB.Coleman,GregoryJ.Tsongalis激活JAK2基因使细胞对生长因子敏感性增高PV、ET、CIMF不是独立的诊断指标MDS、3%CMMLFISH内参缺失预后5q-5p15.25q31差7q-7p11.1-q11.17q31差20q-20q12好+88p11-q11MDS转AML的几率为50%-Yq11好分子方面的理论有限，但发现有5q31,7q31，20q12的反复缺失，提示可能这些区域存在肿瘤抑制基因。1.MLL/AFX2.MLL/AF43.MLL/AF64.MLL/AF95.MLL/ELL6.MLL/ENL7.CBFB/MYH118.BCR/ABL9.MLL/AF1P10.TEL/PDGFR11.MLL/AF1012.DEK/CAN13.MLL/AF1714.SET/CAN15.dupMLL16.PML/RARa17.E2A/PBX118.PLZF/RARa19.E2A/HLF20.NPM/ALK21.SIL/TAL122.NPM/MLF123.TEL/AML124.NPM/RARa25.AML1/ETO26.TEL/ABL27.AML1/MDS128.HOX1129.TLS/ERG30.EVI131.MLL/AF1Q55%L型5%V型体外对ATRA的敏感度低40%S型低分化M3其他融合基因t(5;17)(q32;q21)t(11;17)(q13;q21)t(11;17)(q23;q21)t(15;17)(q22;q21)PML-RARaPLZF-RARaNPM-RARaNuMA-RARa95%5%dup(17)(q21.3;q23)STAT5b-RARaAML1/ETO80-90%M2少数M1/M4/M5CBFβ-MYH11M4Eo化疗敏感预后较好TEL/AML1前B细胞ALLE2A/PBX15-6%的儿童ALL3%的成人ALL大部分前B细胞ALL同一患者可能同时存在多种基因突变可与融合基因或其它基因突变同时存在；预后判断；个体化用药基因突变在疾病发展过程中可能会变化基因位置发生率预后C-KIT4q1220-30%差NPM15q3525-35%好FLT3-ITD13q1220-30%差CEBPA19q13.112.80%好IG重排Ig受体基因重排MRDTCR重排T细胞受体基因重排BCL-1/JHt(11;14)(q13;q32)套细胞淋巴瘤（MCL）少数B细胞增殖性疾病如多发性骨髓瘤BCL-2/JHt(14;18)70-80%的滤泡性淋巴瘤(FL)，大部分为t(14;18)，30%DLBCLIG和TCR基因重排不一定是谱系的标志某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉探针名称位点异常率意义中位生存期（月）P53缺失17p1310-34%预后差24.7IGH重排(4;14)(14;16)50-70%预后差1q21扩增1q2135-45%预后差21.9RB1缺失13q1450%预后中等42.3D13S319缺失13q1445%预后中等IGH重排(11;14)50-70%预后尚可50.5各细胞遗传学亚组MM患者生存期(n=351)24.742.350.5FonsecaR.Blood2003;101:4569-4575.各细胞遗传学亚组MM患者生存期（n=159）FonsecaR.Leukemia2006;20,2034-2040.探针名称位点及读取异常率意义中位生存期(月)p5317p13缺失7-8%预后很差32ATM11q22.3缺失11-18%预后差7912cen12p11.1-q11三体16-25%预后中等114RB113q14缺失36-64%预后好133D13S2513q14缺失36-64%预后好133各细胞遗传学亚组CLL患者生存期（n=325）3279114111133DöhnerH,EnglJMed.2000;43:1910-1916.酪氨酸激酶抑制剂TKIBCR/ABL融合基因FIP1L1/PDGFRa融合基因ABL激酶区突变c.763GA(p.E255K)和c.944CT(p.T315I)。WT1表达量检测*约75%AML患者可检测到WT1高水平表达，WT1是AML患者常用的MRD检测标志融合基因定量检测*CurrentOpinioninOncology2010,22:656–663WT1(Wilm’stumorgene)1.WT1基因在各类型白血病中均能表达(ALL，AML，CML，MDS).2.表达水平与白血病的进程相关，可作为化疗和骨髓移植后MRD检测敏感指标。3.鉴别白血病与反应性白细胞增高。初诊B-ALL;MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)WT1(Wilm’stumorgene)08.80%0.068%90%00.20.40.60.811.21.41.6+59d+96d+106dWT1MLL-AF4血液学复发FCMMRD+弟供姐异基因造血干细胞移植+14d白细胞植活+27d血小板植活嗜血细胞综合征相关基因突变PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAPLYST、AP3B1、RAB27A范可尼贫血基因突变FANCA60%、FANCC15%、FANCG10%WASP综合征纯红再障RPS19先天性角化不良DKC1、NHP2、TERC、TERT、NOP10、TINF2PRF110q21-10q22细胞杀伤功能缺陷FANCA16q24.3FANCC9q22.3Exon1Itron4Exon5Exon6Exon14Q13XIVS4+4ATc.637_643delTACCGCCR185XR548XL554PRPS1919q13.2hotspotofmissensemutations-codons52and62常染色体1岁女Exon4发现点突变：c.184CT(p.R62W)，其他外显子未发现突变DKC1Xq28X-连锁隐性7岁男DKC1基因Exon11发现错义突变：c.1058CT(p.A353V)PCRSecquence标本要求EDTA抗凝、快速送达实验室EDTA抗凝、DNAorcDNA灵敏度最高大于15-20%分辨率bpbp报告时间3-5天5-7天Molecularplatform谢谢！17P13-11q22-1213q14-SimplegeneticdiagnosisofhairycellleukemiabysensitivedetectionoftheBRAFV600Emutation2012119:192-195