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《细胞生物学》题库第三章细胞生物学研究方法一、名词解释1．Resolution2.fluorescence3.Fluorescencemicroscope4.Phasecontrastmicroscope5.autoradiography6.scanningelectronmicroscopy，SEM7.scanningtransmissionelectronmicroscopy，STEM8.high-voltageelectronmicroscopy，HVEM9.negativestainning10.shadowcasting11.scanningtunnelingmicroscope，STM12.enzymecytochemistry13.immunofluorescence14.immunoelectronmicroscopy15.chromosomesorting16.microspectrophotometry17.microfluorometry18.nuclearmagneticresonance，NMR19.cellengineering20.primaryculture21.callus，culli22.cellfusion23.monoclonalantibodytechnique24.micromanipulation25.differentialcentrifugation26.isodensitycentrifugation27.chromatography28.gelfiltrationchromatography29.affinitychromatography30.geneengineering31.genecloning32.geneknockout33.karyoplast34.cytoplast35.cellculture36.贴壁生长37.contactinhibition38.massculture39.clonalculture40.primaryculture41.subculture42.单层细胞培养：43.转鼓培养44.primarycell45.subculturecell46.cellstrain47.cellline49.clone50.explant二、填空题1.物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，第一种是，如叶绿素、血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光；第二种是，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光。2.写出一种细胞融合的物理性方法，举出化学融合所需的两种化学物质和。3.染色体DNA的三种功能元件为、和。异染色质可分为和。4.定量的细胞化学分析技术有、等。写出两种特殊显微镜的名称，如荧光显微镜、、。5.自发荧光是指生物体内有些物质受激发光照射后可直接发出的荧光。写出五种自身荧光物质：、、、、。三.选择题1.通过选择性或克隆形式从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志的细胞群体称作。A.CellLineB.CellStrainC.CellLibraryD.Others2.研究DNA在细胞中的代谢,常用的同位素标记物有。A．14C-戊糖B．32P-磷酸C．15N-鸟嘌呤D.3H-胸腺嘧啶3.细胞融合的诱导剂主要有。A.PEG(聚乙二醇)B.TMV(烟草花叶病)病毒C.亚硝酸-诱变剂D.PHV(植物凝集素)-外围培养4.细胞培养技术。A.可用来研究细胞生理和细胞各种功能B.首先用胰蛋白酶将动物或植物组织进行酶解,游离出单细胞再进行培养C.用小牛血清配制的培养基进行培养D.培养过程可用普通光学显微镜进行观察5.在杂交瘤技术中,。A.B淋巴细胞与B淋巴瘤细胞融合,目的是抑制瘤细胞无限生长B.在培养基中加入氨基喋呤可选出杂交细胞C.氨基喋呤可抑制瘤细胞的蛋白质合成D.氨基喋呤能导致B淋巴细胞无限分裂6.光镜同电镜比较,下列各项中,是不正确的。A.电镜用的是电子束,而不是可见光B.电镜样品要在真空中观察,而不是暴露在空气中C.电镜和光镜的样品都需要用化学染料染色D.用于电镜的标本要彻底脱水,光镜则不必7.在动物细胞培养过程中要用来进行观察。A.相差显微镜B.荧光显微镜C.倒置显微镜D.普通光学显微镜8.在递增细胞匀浆液的离心转速过程中最先沉淀下来的是。A.核糖体B.线粒体C.未破碎的D.微粒体细胞核9.单个植物细胞在体外经过诱导并培养成为完整的植物小植株的实验最好地证明了。A.细胞是构成有机体的基本单位培养方式培养目的植物细胞培养动物细胞培养B.一切有机体均来自于细胞C.细胞是有机体生长发育的基础D.细胞具有遗传的全能性10.显微镜的分辨率与下列哪一项无关?A.光源的波长λB.物镜的镜口角αC.介质的折射率nD.放大倍数四、问答题1．动物体细胞克隆有什么意义?2．什么是细胞培养，应注意哪些问题?3．什么是细胞系和细胞株?4．何谓乳腺生物反应器，它的出现有什么意义?1.电子显微镜的基本知识（见表3-1）表3-1电镜与光镜的比较问答：（1）、电镜为何要求一定的真空度？（2）、电镜为何要有记录系统？表3-3动、植物细胞的培养利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差要求真空不要求真空要求真空1.33x10-5～1.33x10-3Pa玻璃透镜玻璃透镜电磁透镜可见光（400-700）紫外光（约200nm)电子束（0.01-0.9）200nm100nmLMFMEM成像原理真空透镜光源分辨本领显微镜《细胞生物学》题库参考答案第三章细胞生物学研究方法一、名词解释1．分辨率(resolution)：分辨率是指能分辨出的相邻两个物点间最小距离的能力，这种距离称为分辨距离。分辨距离越小，分辨率越高。一般规定：显微镜或人眼在25cm明视距离处，能清楚地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力，称为分辨率。人眼的分辨率是100μm;光学显微镜的最大分辨率是0.2μm。2.荧光(fluorescence)：分子由激发态回到基态时，由于电子跃迁而由被激发分子发射的光。物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，第一种是自发荧光，如叶绿素、血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光，称为自发荧光;第二种是诱发荧光，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光，称为诱发荧光。3.荧光显微镜(Fluorescencemicroscope)：以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。4.相差显微镜(Phasecontrastmicroscope)：相差显微镜是荷兰科学家Zermike于1935年发明的，用于观察未染色标本的显微镜。活细胞和未染色的生物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位发生变化(振幅差)，这种振幅差人眼无法观察。而相差显微镜通过改变这种相位差，并利用光的衍射和干涉现象，把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。相差显微镜和普通显微镜的区别是:用环状光阑代替可变光阑，用带相板的物镜代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。相差显微镜具有两个其他显微镜所不具有的功能:①将直射的光(视野中背景光)与经物体衍射的光分开;②将大约一半的波长从相位中除去，使之不能发生相互作用，从而引起强度的变化。5.放射自显影(autoradiography)：放射自显影的原理是利用放射性同位素所发射出来的带电离子(α或β粒子)作用于感光材料的卤化银晶体，从而产生潜影，这种潜影可用显影液显示，成为可见的“像”，因此，它是利用卤化银乳胶显像检查和测量放射性的一种方法。放射性核素的原子不断衰变，当衰变掉一半时所需要的时间称为半衰期。各种放射性核素的半衰期长短不同(表)，在自显影实验中多选用半衰期较长者。对于半衰期较短的核素，应选用较快的样品制备方法，所用剂量也应加大。6.扫描电子显微镜(scanningelectronmicroscopy，SEM)：扫描电子显微镜是1965年发明的较现代的细胞生物学研究工具，主要是利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态，即用极狭窄的电子束去扫描样品，通过电子束与样品的相互作用产生各种效应，其中主要是样品的二次电子发射。二次电子能够产生样品表面放大的形貌像，这个像是在样品被扫描时按时序建立起来的，即使用逐点成像的方法获得放大像。7.扫描透射电子显微镜(scanningtransmissionelectronmicroscopy，STEM)：既有透射电子显微镜又有扫描电子显微镜的显微镜。象SEM一样，STEM用电子束在样品的表面扫描，但又象TEM，通过电子穿透样品成像。STEM能够获得TEM所不能获得的一些关于样品的特殊信息。STEM技术要求较高，要非常高的真空度，并且电子学系统比TEM和SEM都要复杂。8.高压电子显微镜(high-voltageelectronmicroscopy，HVEM)：同透射电子显微镜基本相同，只是电压特别高。TEM使用的加速电压是50～100kV，而HVEM使用的电压是200～1000kV。由于电压高，就会大大减少造成染色体畸变的可能，因此，可以用较厚的细胞切片研究细胞的结构，切片的厚度最大可达1μm，相当于普通TEM样品厚度的10倍。9.负染色(negativestainning)：用重金属盐(如磷钨酸钠、醋酸铀等)对铺展在载网上的样品进行染色，使整个载网都铺上一层重金属盐，而有凸出颗粒的地方则没有染料沉积。由于电子密度高的重金属盐包埋了样品中低电子密度的背景，增强了背景散射电子的能力以提高反差，这样，在图像中背景是黑暗的，而未被包埋的样品颗粒则透明光亮，这种染色称为负染技术。负染色是只染背景而不染样品，与光学显微镜样品的染色正好相反。10.铸型技术(shadowcasting)：铸型技术是电子显微镜中一种重要的增强背景和待观察样品反差的方法。基本过程包括:①将样品置于云母的表面，然后干燥;②在真空装置中将样品镀上一层重金属(金或铂金)，喷镀时的加热丝具有一定的角度;③将样品镀上一层碳原子，以增加铸型的强度和稳定性;④将铸型置于酸池中，破坏样品，只留下金属铸型;⑤将铸型漂洗后置于载网上进行电子显微镜观察。11.扫描隧道显微镜(scanningtunnelingmicroscope，STM)：扫描隧道显微镜使用电子学的方法，用一个金属针尖在在样品表面扫描。当针尖和样品表面距离很近时(1nm以下)，针尖和样品表面之间会产生电压。当针尖沿X和Y方向在样品表面扫描时，就会在针尖和样品表面第一层电子之间产生电子隧道。该显微镜设计的沿Z字形扫描，可保持电流的恒定。因此，针尖的移动是隧道电流的作用，并且可以反映在荧光幕上。连续的扫描可以建立起原子级分辨率的表面像。12.酶细胞化学技术(enzymecytochemistry)：将细胞内的酶与底物相互作用，再将酶反应的产物作为反应物质，在酶的作用部位进行捕捉，使其在显微镜下具有可见性。这种在酶作用下产生反应产物，经捕捉反应来间接证明酶定位的反应称为酶的细胞化学反应。酶的细胞化学反应包括两个反应:第一反应是酶作用于底物的反应，称酶反应，形成的产物称为初级反应产物;第二反应是捕捉剂与初级反应产物的作用，称捕捉反应，产生最终反应产物：┌─────────酶的细胞化学反应─────────┐│酶＋条件初级捕捉剂│底物─────────→反应产物───────→最终反应产物（酶反应）（捕捉反应）13.免疫荧光技术(immunofluorescence)：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。14.免疫电镜(immunoelectronmicroscopy)：将抗体进行特殊标记后用电子显微镜观察免疫反应的结果。根据标记方法的不同，分为免疫铁蛋白技术、免疫酶标技术和免疫胶体金技术。如免