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风湿性疾病相关自身抗体浅析Bacteria,Fungi,Parasites,VirusesFUNGUS-Epidermophytonfloccosum(causesathlete’sfoot)VIRUS-PolioBACTERIA-Clostridiumdifficile(causesantibiotic-associatedcolitis&antibiotic-associateddiarrhea)PARASITE-Tapeworm•免疫的原始概念：指机体对病原生物有抵抗能力，即免除传染病或瘟疫•免疫的现代概念：a机体对抗原性异物进行识别与清除b对自身成分免疫耐受c维持机体内环境稳定的能力免除税赋，免除差役immunitas免于疫患，免除瘟疫immunity免疫的概念中文“免疫”最早见于明《免疫类方》“自己成分”与“非己成分”•自身的&外界的？•免疫系统将免疫细胞发育过程中接触过的物质视为自己，未接触过的物质视为非己举例：交感性眼炎（晶状体蛋白）表位扩展•是自身免疫性疾病发生发展的一种机制•机体的免疫系统可不断扩大所识别的自身抗原表位的范围，对自身抗原不断发动新的免疫攻击，使疾病迁延不愈并不断加重•在SLE的发生过程可观察到表位扩展现象，患者体内可先发生对组蛋白H1的免疫应答，继而出现对DNA的免疫应答•在类风湿关节炎、多发性硬化和胰岛素依赖性糖尿病患者也观察到了表位扩展的现象自身免疫•机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫耐受削弱或破坏•免疫系统会对自身成份包括正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原产生免疫应答反应•出现自身抗体或致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫•自身免疫可以是正常生理性的例如：针对衰老或死亡的自体细胞•自身免疫也可以是病理性的，引起自身免疫病自身免疫性疾病（AID)特点：（1）多数是自发或特发性的，感染、药物等外因可能有一定的影响（2）患者血清中存在有高水平的γ－球蛋白（3）患者血清中有高效价的自身抗体或出现与自身抗原反应的致敏淋巴细胞（4）病损部位有变性的Ig沉积，呈现以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症自身免疫性疾病（AID)特点：（5）病程一般较长，发作与缓解交替出现，仅有少数为自限性（6）女性多于男性（7）部分有遗传倾向（8）糖皮质激素等免疫抑制剂有效（9）常有其它自身免疫病同时存在（10）可复制出相似的动物疾病模型临床角度---自身免疫性疾病诊断的复杂性•多脏器、多系统受累不同时出现•同一疾病的疾病谱广泛•不同AID的病理损害之间有交叉、重叠•在同一时间段不同病变对治疗的反应不一•由于疾病本身的免疫紊乱和治疗因素而继发感染•当患者出现感染时表现不典型•随时间的延续可能出现的分化和进展自身抗体【概念】•由各种原因造成的机体B细胞产生针对自身组织成分的抗体，称为自身抗体•自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志•每种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱可变区和恒定区重链与轻链抗体的结构自身抗体与疾病的关系•某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特异性，已经成为该病的血清标记抗体或特异性抗体•某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，少数自身抗体参与了免疫病病理性损伤特异性较强的自身抗体•抗Sm抗体系统性红斑狼疮•抗Scl-70抗体系统性硬化症•抗SSA/SSB抗体干燥综合征•抗CCP抗体类风湿关节炎抗体滴度的高低可判断疾病的活动性•抗双链DNASLE•aCLSLE、磷脂抗体综合征•RF类风湿关节炎预测疾病的预后及临床亚型•抗Jo-1皮肌炎合并肺间质病变•抗Scl-70弥漫性系统性硬化•抗rRNP狼疮脑病自身抗体的意义•自身免疫性疾病的诊断•疾病活动性的判断•疗效的观察及预后•指导临床用药等•进行不同疾病的鉴别诊断自身抗体常用检测方法项目检验方法SLE四项ANA间接免疫荧光抗DS－DNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列抗RNP免疫印迹、ELISA抗SM免疫印迹、ELISA抗SSA免疫印迹、ELISA抗SSB免疫印迹、ELISA抗JO-1免疫印迹、ELISA抗SCL-70免疫印迹、ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、ELISARA三项AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常见的自身抗体及其检测方法(1)(2)自身免疫肝炎七项检验方法ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗β2-糖蛋白1抗体ELISA常见的自身抗体及其检测方法抗核抗体(ANA)均质型与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者抗核抗体(ANA)斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体核仁型多见于系统性硬皮病类风湿因子（RF）的检测及应用•RF是一种抗IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体•是以变性IgG为靶抗原的自身抗体•可与人或动物的变性IgG结合，而不与正常IgG发生凝集•最多见于类风湿关节炎患者•有IgM、IgG、IgA和IgE型•IgM型为主要类型类风湿因子（RF）检测方法：a.胶乳凝集试验：只能定性或定量，灵敏度及特异性不变，只能检测IgM型RFb.速率散射比浊法：定量检测，准确、快速，准确性和敏感性高于胶乳凝集试验，也只能检测IgM型RF。c.ELISA法：可检出不同Ig类型的RF类风湿因子（RF）临床应用•RF在RA中的阳性率为70％左右•是诊断RA的重要标准之一•RF定量与病情的活动性和严重性成正比•持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良类风湿因子（RF）RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性SLE30%SS70%~90%SSc20%~30%MCTD50%~60%5%以下的正常人RF(+)≠一定是RARF(-)≠一定就不是RARA自身抗体谱及临床意义•RF60-70％RA中出现，量与RA活动性及严重性呈正相关。亦在其它CTD出现•抗CCP在50％RA中出现（抗环瓜氨酸肽抗体）特异性较高•AKA（抗角蛋白抗体）在40％RA阳性•APF（抗核周因子）在52％RA阳性•抗RA33RA阳性率为35％•抗Sa在部分RA阳性以上抗体阳性有助于早期RA及不典型RA的诊断和早期开展治疗，改善预后抗ENA抗体谱是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体的总称它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体,抗dsDNA。不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断和鉴别具有重要意义抗ENA抗体谱检测方法免疫印迹法（IBT）、ELISA法、双扩散法、对流免疫电流、金标法等。免疫印迹技术不需要纯化抗原，灵敏度高、特异性强、操作简单，是广泛采用检测抗ENA抗体的技术临床意义•nRNP•Sm•SS-A•SS-B•Scl-70•Jo-1•CENPB•dsDNA•核小体•组蛋白•核糖体P蛋白nRNP•高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD）的标志•阳性率为95-100％•滴度与疾病活动性相关•在30-40％的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体Sm•抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10％•抗Sm抗体的检测对早期,不典型的SLE或治疗后的回顾性诊断具有很大帮助SS-A•抗SS-A抗体与各类自身免疫性疾病相关•最常见于干燥综合征（40-80％）、也见于系统性红斑狼疮（30-40％）和原发性胆汁性肝硬化（20％）中，偶见于慢性活动性肝炎•在100％的新生儿红斑狼疮中可出现抗SS-A抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞SS-B•抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征（40-80％）和SLE（10-20％）的患者中•男女比例约为29:1•在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现Scl-70•见于25-75％的进行性系统性硬化症（弥散型）患者•因实验方法和疾病活动性而异•在局限型硬化症中不出现Jo-1•见于多肌炎、肌炎•阳性率为25-35％•常与合并肺间质纤维化相关dsDNA•诊断疾病-----IFT•判断疾病活动性---ELISA•对系统性红斑狼疮具有很高的特异性•除抗Sm抗体外，抗dsDNA抗体也可作为该病的一个血清学指标•阳性率为40-90%自身抗体检测结果正确解读检测方法局限性：假阳性，假阴性临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期临床表现阳性，实验室检查阴性实验室检查阳性，临床表现阴性自身免疫病自身抗体非常复杂SLE患者中存在100多种自身抗体SeminArthritisRheum.2004Oct;34(2):501-37.自身免疫病自身抗体非常复杂APS患者中存在30种自身抗体JAutoimmun,2008.30(1-2):p.74-83.NEnglJMed2003;349:1526-33.疾病预警自身抗体在SLE发病前9.4年出现疾病预警AMA在PBC发病前10年出现临床复杂性急性肝衰患者出现Ｍ2和PBC特异性抗体临床复杂性抗CCP抗体在丙肝中8.5℅•指标阴性是否意味着疾病的排除？•指标阳性意味着什么？矛和盾？特异性的局限•各指标与对应疾病之间：如SLE抗Sm抗体特异性99%敏感性仅为25%•RARF阳性可出现在SLE,pSS,SSc,慢性肺结核，高球蛋白血症等，5%正常人可出现低滴度的RF“自相矛盾”的结果ANA(间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性ANA(间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性（膜条法），占10%，为客观存在ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）特异性指标阳性，人无相应症状•健康人---一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月后复查可能转阴或者下降•貌似健康人---检测—自身抗体（微观）影像---组织表现---器官（最晚）•患者---但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察滴度变化，一般会下降•自身免疫性疾病---但不是指标对应的疾病自身抗体检测结果的解释疾病标记（志）性自身抗体疾病特异性自身抗体疾病相关性自身抗体疾病非特异性自身抗体生理性自身抗体疾病前期存在检测方法及检测程序局限性检测质量:假阴性﹑假阳性解读困难