磁珠法病毒DNA提取试剂盒(常规版)

磁珠法病毒DNA提取试剂盒（常规版）MagBeadsVirusDNAExtractionKit(RegularVersion)【目录号】VDE-5005、VDE-5010、VDE-5030、VDE-5100【运输条件】2~25℃；【保存条件】磁珠悬浮液4℃；蛋白酶K-20℃；其它组分室温；【试剂盒组成】KitComponent试剂盒组成VDE-5005（50T）VDE-5010（100T）VDE-5030（300T）VDE-5100（1000T）①VDEBufferML裂解液10mL20mL60mL200mL②ProteinaseKSolution蛋白酶K溶液1mL2mL6mL20mL③VDEMagneticBeads磁珠悬浮液5mL10mL30mL100mL④WashBuffer清洗液30mL60mL180mL600mL⑥EluteBuffer洗脱液10mL20mL60mL200mL【注意事项】1.蛋白酶K溶液长期不使用，请置于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用；2.磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害。使用前务必充分混匀；3.样本应避免反复冻融，否则DNA易发生降解；4.本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南建议操作。1磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【产品简介】本试剂盒适用于从血清、血浆或者其它体液样本中提取病毒DNA。在裂解液（VDEMLBuffer）环境中，病毒经裂解后释放的DNA特异性的结合于磁珠表面，经清洗和洗脱等步骤后，可得到高纯度的基因组DNA产物，完整性好，可直接应用于PCR、杂交等各种下游分子生物学实验。整个操作过程简单、快速且高效。本试剂盒可在EP管中手动法操作，亦可配合自动化核酸提取仪实现高通量操作。【试剂盒说明】样品类型样本量典型核酸得量提取时间血清、血浆等体液200μL1~100ng＜30min注：冷冻的样本需提前在4℃或室温下解冻。【自备仪器和试剂】仪器自动版涡旋混合仪、水浴锅（或金属浴）、英芮诚ETP-300型核酸提取仪、磁棒套、96孔方孔圆底板、EP管（2.0mL）、80%乙醇、异丙醇。手动版金属浴、涡旋混合仪、EP管（2.0mL）、EP管用磁力架、80%乙醇、异丙醇。【仪器自动版操作步骤】以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32份样本的提取工作。1．96孔板加液参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：样品位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液100μL异丙醇300uL清洗液600μL80%乙醇600μL80%乙醇600μL洗脱液50~100μL注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪进行加液操作;3）试剂加板完毕请尽快使用，防止醇挥发导致结果波动。2．样本裂解向2.0mLEP管中顺序加入200μL样本、20μL蛋白酶K溶液和200μL裂解液，盖好EP管盖，高速涡旋振荡30s，置于58℃环境中裂解10min。注：每增加100μL样品，需相应增加10μL蛋白酶K溶液用量。3．96孔板上样将裂解完毕EP管瞬离，然后将裂解液全部转移至96孔板2号（或8号）孔位中。2磁珠法病毒DNA提取试剂盒（常规版）4．上机提取将准备好的96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中、插入磁棒套、打开仪器操作软件，运行“病毒DNA提取：外部裂解”程序。“病毒DNA提取：外部裂解”程序各参数设置如下，如果原程序不慎丢失，可自行设定：步骤编号孔位运行类型振荡时间(秒)分离时间(秒)挥发时间(秒)振荡幅度振荡强度一组温度(℃)二组温度(℃)三组温度(℃)四组温度(℃)11磁珠转移1502弱000022DNA结合300504中000033清洗1120505中000044清洗2120505中000055清洗26052905中000066洗脱3602002中6060606073弃磁珠15005强00005．核酸转移程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净EP管中，提取过程完毕，此时可弃去96孔板。【手动版操作步骤】1．样本裂解向2.0mLEP管中顺序加入200μL样本、20μL蛋白酶K溶液和200μL裂解液，盖好EP管盖，高速涡旋振荡30s，置于58℃环境中裂解10min。注：每增加100μL样品，需相应增加10μL蛋白酶K溶液用量。2．核酸结合裂解完毕，向EP管中顺序加入100μL磁珠悬浮液（提前充分摇匀）和300μL异丙醇，涡旋混匀5min。3．磁性分离将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，如果EP管内盖有液体，可保持EP管在磁力架上，整体上下颠倒2~3次，使磁珠完全被磁力架吸附。保持EP管固定于磁力架上，用移液枪完全弃去上清液，期间避免接触磁珠。4．清洗1向EP管中加入600μL清洗液，将EP管从磁力架上取下，剧烈摇动使磁珠充分分散，涡旋震荡1min，然后参照步骤3进行磁性分离。5．清洗2使用600μL80%乙醇，参照步骤4操作2次。3磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案6．除醇将弃尽上清液后的EP管从磁力架上取下，放入事先准备好的50~55℃金属浴中，打开EP管盖，准确烘干3min，烘干结束应无确明显乙醇味。注：切勿烘干时间过长，否则磁珠容易结板，影响后续洗脱效果。7．核酸洗脱取出EP管，加入50~200μL洗脱液，移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将EP管置于56~60℃金属浴中静置5min，期间涡旋振荡30s混匀一次。8．核酸转移将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP管中，提取过程完毕，此时可以弃去磁珠。版权声明：©英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南的所有权利。版本：V201811.291英芮诚生化科技（上海）有限公司地址：上海市杨浦区国权北路1688号湾谷科技园A8座303室电话：[phone]网址：电子邮件：[e-mail]4