大、小鼠灌注固定的方法准备物品:1、灌注针(灌注用的针可以是临床上的静脉套管针,便于穿刺)2、医用输液器3、500ml输液用玻璃瓶4、血管钳5、剪刀6、生理盐水7、4%多聚甲醛(4℃),0.1M的PB配制大鼠深度麻醉,迅速打开胸腔,暴露心脏,此时注意用血管钳钝性分离心包及周围软组织以便充分暴露心脏。左手持镊子捏住心脏,右手持套管针从心尖部位插入,向上进针到升主动脉。取出套管针内芯,连接生理盐水,打开输液开关,快速灌注,同时用剪刀在右心耳处剪一小口,待流出的液体无色后(约60ml即可)更换为多聚甲醛。多聚甲醛灌注速度为先快后慢,快速灌注50ml后放慢速度,缓慢滴注维持即可,每只大鼠约需100ml。如果多聚甲醛灌注充分,则动物四肢和全身肌肉会不停抽动。如此灌注约需1小时时间。充分暴露升主动脉套管针从心尖部位插入,向上进针到升主动脉1、暴露心脏时要小心,速度要快,但不可损伤心脏及大血管,如果出现血液凝固或大血管损伤,灌流将失败。2、最好是剖开右心室,但是因为暴露的问题,有误剪到左心室的可能。相对来说,剪开右心耳更为方便。我们就是这样做的。3、灌流的效果:PBS或NS灌流时,血流丰富的脏器如肝脾肾等的颜色会迅速转为灰白,此为灌流正常。另外,大鼠耳尖,口唇,四肢掌部也会变苍白。4、PBS或NS灌流需缓慢而持续,防止血液血管内凝固。有条件的话可加点肝素。5、先主动脉插管,再右心耳放血,这样插管容易些。先剪右心耳的话,心脏会瘪下去的。小鼠灌注固定方法:采用水合氯醛麻醉后剪开胸腔,动作要快,经左心室插入头皮针连接的20mL注射器(头皮针磨钝,从与身体纵轴成45°角的方向进针,针尖插入升主动脉内,可以看见,动作要轻柔),同时剪开右心耳,推入20mL生理盐水。推完以后迅速换4℃多聚甲醛20mL,灌完以后取材基本就可以了。