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铵态氮---靛酚蓝比色法一、方法原理土壤浸出液中的NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定，在NH4+-N浓度为0.05mg/L-0.5mg/L范围内，其深浅与NH4+-N含量成正比。反应体系PH应为10.5-11.7之间。硝普钠{硝基铁氰化钠，或称亚硝酰基五氰合铁（ⅲ）酸钠，Na2Fe(CN)5NO.2H2O}是反应的催化剂，能加速显色，增强蓝色及其稳定性。在20℃左右室温时一般须放置1h后比色，完全显色约需2h-3h。生成的蓝色很稳定，24h内吸收值无显著变化。比色时在625nm处测量吸收值。待测液中如有干扰的金属离子，可用EDTA等螯合剂掩蔽。二、主要仪器分光光度计三、试剂（1）酚溶液：10g苯酚和100mg硝普钠（Na2Fe(CN)5NO.2H2O）溶于1L蒸馏水中。此溶剂不稳定，须贮存于暗色瓶中，存放于4℃冰箱中，同时需温热至室温。注意硝普钠有剧毒！（2）次氯酸钠碱性溶液：10gNaOH，7.06gNa2HPO4.7H2O，31.8gNa3PO4.12H2O和10ml次氯酸钠{w(NaClO)=5.25%（即有效氯5%的漂白剂溶液）溶于1L水中。此试剂应与酚溶液同样保存}。（3）掩蔽剂：酒石酸钾钠{p(KNaC4H4O6.4H2O)=400g/L}与EDTA二钠盐溶液N2Na{p(C10H14O8)=100g/L}等体积混合。每100ml混合液加入0.5mlNaOH（C（NaOH）=10mol/L）溶液，即得清亮的掩蔽剂溶液。（4）NH4+-N标准溶液：0.4717g烘干的(NH4)2SO4（二级）溶于蒸馏水中，定容至1L。此p（NH4+-N）=100mg/L贮存液。测定当天将此溶液用蒸馏水准确稀释20倍（取5ml稀释至100ml），即为5mg/LNH4+-N标准溶液（p(N)=5mg/L）。（5）KCl溶液（2mol/L）：称取149.1g分析纯KCl，加水定容至1L的容量瓶中。四、操作步骤（1）称取三份新鲜土壤5g，置于大口瓶中，加入25ml2mol/L的KCl溶液，（2）在振荡器上充分震荡30min（3）用中速定性滤纸过滤至小口瓶中；制作标曲（4）取滤液5ml至50ml的容量瓶中（5）加水至30ml左右（6）加酚溶液5ml（7）加次氯酸钠5ml（8）定容（9）显色1h（10）625nm处比色五、结果计算W(N)=(p×V×ts×10-3)×1000/mW(N)-土壤中NH4+-N的质量分数，mg/kgp-从工作曲线上查得显色液中氮的浓度，mg/L;V-显色液体积，50mlts-分取倍数,25/510-3—将ml换算成L的系数1000—换算成每kg土含量；m-土样质量，g（鲜土*含水系数）硝态氮实验操作步骤（1）HCl溶液：取买好的HCl溶液84ml定容到1L的容量瓶中。（2）KCl溶液（2mol/L）：称取149.1g分析纯KCl，加水定容至1L的容量瓶中。（3）10ppm硝态氮标准溶液：0.772g干燥的硝酸钾（KNO3，分析纯）溶于水，定容至1L，此为100ppm硝态氮溶液。将此溶液准确稀释10倍，即为10ppm硝态氮标准溶液。（取5ml定容至50ml容量瓶中）。工作曲线的绘制：分别取10ppm硝态氮标准溶液0ml，1ml，2ml，5ml，10ml，15ml，20ml（1）称取三份新鲜土壤5g，置于大口瓶中，加入25ml2mol/L的KCl溶液，（2）在振荡器上充分震荡30min（3）用中速定性滤纸过滤至小口瓶中；制作标曲（4）取滤液10ml至50ml的容量瓶中（5）加1mol/L的HCl溶液1ml（6）定容（7）显色1h（8）现在275nm下比色，然后在220nm下比色结果计算硝态氮（NO3-N,ppm）=（C×V×ts）/mC----从工作曲线上查的显色液的硝态氮ppm数标曲的得来：用220nm处值—275nm处的值，制作成标曲然后将220nm处样品的值—275nm处样品的值然后在在标曲上查找对应的CV---显色液体积；50mlts---分取倍数，ts=浸提液总体积（ml）/吸取浸出液体积（ml）25/10m---土样质量，=鲜土*含水量