食品中亚硝酸钠的测定

食品中亚硝酸钠的测定2ZhejiangWanliUniversity1原理试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。3ZhejiangWanliUniversity2试剂与材料2.1亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6•3H2O）；2.2乙酸锌（Zn(CH3COO)2•2H2O）；2.3冰醋酸（CH3COOH）；2.4硼酸钠（Na2B4O7•10H2O）2.5盐酸（ρ＝1.19g/mL）2.6氨水（25%）。2.7对氨基苯磺酸(C6H7NO3S）2.8盐酸萘乙二胺(C12H14N2•2HCl）2.9亚硝酸钠（NaNO2）4ZhejiangWanliUniversity2试剂与材料2.10亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取106.0g亚铁氰化钾（2.1），用水溶解，并稀释至1000mL。2.11乙酸锌溶液(220g/L)：称取220.0g乙酸锌（2.2），先加30mL冰醋酸（2.3）溶解，用水稀释至1000mL。2.12饱和硼砂溶液(50g/L)：称取5.0g硼酸钠（2.4），溶于100mL热水中，冷却后备用。5ZhejiangWanliUniversity2试剂与材料2.13对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸（2.7），溶于100mL20%（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。2.14盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺（2.8），溶于100mL水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。2.15亚硝酸钠标准溶液（200μg/mL）：准确称取0.1000g亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。2.16亚硝酸钠标准使用液（5.0μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度。6ZhejiangWanliUniversity3试验步骤3.1试样的预处理肉类及其制品：用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆备用。3.2提取称取5g（精确至0.01g）制成匀浆的试样（如制备过程中加水，应按加水量折算），置于50mL烧杯中，加12.5mL饱和硼砂溶液（2.12），搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。7ZhejiangWanliUniversity3.3提取液净化在振荡上述提取液时加入5mL亚铁氰化钾溶液（2.10），摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液（2.11），以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。8ZhejiangWanliUniversity3.4亚硝酸盐的测定吸取40.0mL上述滤液于50mL带塞比色管中，另吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、7.5μg、10.0μg、12.5μg亚硝酸钠），分别置于50mL带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液（2.16），混匀，静置3min～5min后各加入1mL盐酸萘乙二胺溶液（2.17），加水至刻度，混匀，静置15min，以零管调零，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。9ZhejiangWanliUniversity4分析结果的表述亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量按下式进行计算。式中：X1——试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A1——测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克（μg）；m——试样质量，单位为克（g）；V1——测定用样液体积，单位为毫升（mL）；V0——试样处理液总体积，单位为毫升（mL）。100010000111VVmAX