小麦萌发前后淀粉酶活力比较

生命科学学院生物化学实验主讲：刘连芬聊城生命科学学院E-Mail：[e-mail]小麦萌发前后淀粉酶活力比较生物化学实验生命科学学院相关知识背景1、淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。按照其水解淀粉的作用方式，可以分成α—淀粉酶、β—淀粉酶等。生物化学实验Exit2、在小麦、大麦、黑麦的休眠种子中只含有β—淀粉酶，α—淀粉酶是在发芽过程中形成的，所以在禾谷类萌发的种子和幼苗中，这两类淀粉酶都存在。其活性随萌发时间的延长而增高。3、酶的活力：是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力的大小可以用在一定条件下所催化的某一化学反应的速度来表示，两者呈线性关系。4、酶的活力单位：酶活力的大小即酶含量的多少，用酶活力单位表示，即单位（U），是指在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量。小麦萌发前后淀粉酶活力比较生命科学学院实验原理1、淀粉酶的活力:设定在最适条件下(在最适温度、最适pH、最适缓冲液离子强度等),单位时间(如3min)内催化淀粉水解产生1mg的还原糖所需酶量为一个活力单位。生物化学实验2、还原糖的测定----3,5—二硝基水杨酸法:在碱性条件下,3,5—二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成红色氨基化合物(3-氨基,5-硝基水杨酸),在一定浓度范围内,还原糖的量与反应液所呈颜色深浅程度成正比,用分光光度法测定酶促反应生成还原糖的量,从而测出淀粉水解的速度和酶活力。2(C6H10O5)n+nH2→nC12H22O11Exit小麦萌发前后淀粉酶活力比较生命科学学院实验步骤小麦萌发前后淀粉酶活力比较一、粗酶液的制备二、酶活力测定三、计算酶的总活力单位生物化学实验生命科学学院一、酶液的制备生物化学实验酶的提取应尽量避免高温或强酸碱或其他激烈条件，全部过程宜在低温下进行。种子酶与苗酶的提取时间必须相同。小麦萌发前后淀粉酶活力比较3000r/min5min，测定酶液体积V，取1ml酶液加6.9的缓冲液至5ml----稀释5倍,取其中1ml进行测定各加5mlNaCI研磨取3粒种子或3粒幼苗加少许石英砂生命科学学院二、酶活力测定生物化学实验酶促反应时间要准确小麦萌发前后淀粉酶活力比较恒温水浴3分钟温浴同时加淀粉取四支试管各加水、还原糖、稀释的种酶、稀释的苗酶各1ml分别同时加1ml淀粉反应3min各管同时加2ml水杨酸终止反应生命科学学院生物化学实验呈色反应时间要准确（沸水浴5分钟）小麦萌发前后淀粉酶活力比较同时沸水浴5min、立即降温停止水杨酸反应生命科学学院生物化学实验小麦萌发前后淀粉酶活力比较在刻度试管中用蒸馏水稀释至25ml,摇匀后取3ml比色生命科学学院三、计算酶的总活力单位：A1/C1=A2/C22粒种子或2株幼苗的总活力单位=c×n×Vc为种子酶或幼苗酶分解淀粉产生的麦芽糖的浓度（mg/ml)n为酶液稀释的倍数V为提取酶液的总体积生物化学实验小麦萌发前后淀粉酶活力比较生命科学学院主要实验仪器生物化学实验752分光光度计移液器冷冻离心机恒温水浴沸水浴小麦萌发前后淀粉酶活力比较生命科学学院生物化学实验Exit蛋白质的提取、分离纯化及定量⑴将离心机置于平坦结实的地面或实验台上。离心机⑷电源接好，插头插牢，使用接地，盖上盖上锁⑸打开开关，顺时针缓慢转动调速杆，达到所需转速。⑹离心完毕，将调速杆置于0位，关闭电源，待惯性转停后，按动开锁钮，开盖取样。⑵检查离心机调速旋钮是否处在0置⑶装入待离心液体后，把离心机转头对称位置上的离心管（包括外套管）放在天平上平衡，装入液体量以距管口1--2cm为宜生命科学学院生物化学实验Exit蛋白质的提取、分离纯化及定量生命科学学院生物化学实验Exit蛋白质的提取、分离纯化及定量生命科学学院作业小麦萌发过程中淀粉酶活性升高的原因和意义是什么？生物化学实验小麦萌发前后淀粉酶活力比较