血清蛋白电泳的临床应用(ppt文档)

王连升法国赛比亚公司上海代表处蛋白电泳的应用与临床实验结果的解读主要内容•血清蛋白电泳•免疫分型电泳电泳技术的发展历程1809年发现电泳现象1937年建立了界面电泳技术1948年诺贝尔化学奖1950年后区带电泳从发展到成熟1980年毛细管电泳技术2001年sebia首次推出全自动毛细管电泳仪19世纪21世纪sebia4蛋白电泳技术的变迁•滤纸电泳•醋酸纤维素薄膜电泳•凝胶电泳–琼脂糖凝胶电泳—临床–聚丙烯酰胺凝胶电泳—科研•毛细管电泳–电泳技术的革命CapillarysElectrophoresisPrinciple正极负极检测器氘光源200nm约1万伏高压毛细管(内径25微米）样本进入-+温控装置电泳方向毛细管电泳工作原理++++++++++++++++++++++++++++++++++++毛细管的内表面是带负电荷当毛细管内部充满缓冲液被活化后，在毛细管内表面的负电荷层上形成了一正电荷层毛细管电泳工作原理++++++++++++++++++++++++++++++++++++阳极阴极+电渗流作用方向内部充满电泳缓冲液的毛细管带电后，-毛细管内的正电荷层整体向阴极移动，这种现象称之为电渗流++++++++++++++++++++++++++++++++++++阳极-阴极+电渗流作用方向电场力作用方向在毛细管内部的正电荷粒子同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方向一致→快速向负极端迁移+--++++++++++++++++++++++++++++++++++++阳极-阴极+电渗流作用方向电场力作用方向（负电荷）在毛细管内部的负电荷粒子同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方向相反；电渗流电场力→向负极端迁移---------------++++++++++++++++++++++++++++++++++++++阳极-阴极+电渗流作用方向负电荷电场力作用方向样品进入到毛细管之中的运动正电荷电场力作用方向无论是带正电、带负电或不带电的粒子，都在电渗流的作用下，向阴极迁移，带正电的，受到同方向的电场力作用，迁移最快，不带电的迁移速度次之，带负电的迁移速度最慢，因为它受到与电渗流反方向的电场力作用。优点性能特征减少手工操作全自动,人机分离操作操作简单,可根据用户需求调整操作模式提供多种检测项目供溯源性,减少误差原管条码识别增加用户满意度高通量优化的工作流程持续进样、双向通讯、快捷的数据读取优化结果用200nm氘光直接检测蛋白，无需染色简化结果分析高分辨率、高清晰度M蛋白检测的高灵敏度毛细管电泳技术的优势毛细管血清蛋白电泳图谱免疫球蛋白C3补体α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白α-2巨球蛋白血红素结合蛋白14临床疾病的识别炎症肝病肾病……“M”蛋白的筛查及定量对疑似骨髓瘤患者检测单克隆免疫球蛋白早期检出无症状的骨髓瘤患者对骨髓瘤疾病进行随访及疗效观察血清蛋白电泳的临床应用15CapillarysElectrophoresis毛细管血清蛋白电泳正常血清蛋白电泳图谱免疫球蛋白C3补体α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白α-2巨球蛋白血红素结合蛋白17电泳图谱---急性炎症免疫球蛋白C3补体α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白α-2巨球蛋白血红素结合蛋白急性期反应蛋白电泳图谱---慢性炎症电泳图谱---肝脏肝脏是血清蛋白合成的主要器官免疫球蛋白C3补体α-1抗胰蛋白酶结合珠蛋白转铁蛋白白蛋白α-1酸性糖蛋白α-2巨球蛋白血红素结合蛋白20电泳图谱---肝病21beta2区：多克隆IgA↑gamma区：多克隆IgG↑电泳图谱---肝硬化Beta-Gamma桥BetaGamma桥23电泳图谱---肾病24电泳图谱---肾病肾小球滤过屏障损伤→白蛋白流失•低白蛋白•高α-2贾晓辉,马彧旻.齐齐哈尔医学院学报.2009,30(16):2015Alpha-2巨球蛋白25Alba1a2b1b2g总蛋白浓度降低(低于60g/l)α-2巨球蛋白脂蛋白低白蛋白电泳图谱---肾病综合征三高一低：高脂蛋白血脂电泳图谱---肾病综合征性别：男年龄：24科室：肾脏内科诊断：肾病综合征27原因:免疫缺陷病、免疫抑制剂、游离轻链病电泳图谱---低免疫球蛋白电泳图谱---高免疫球蛋白原因:慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽肿血清蛋白电泳图谱常见类型图谱类型总蛋白Albα1α2βγ低蛋白血症↓↓↓↓N↑N↓N↑急性炎症/急性时相反应N↓N↑↑/N慢性炎症型↓↑↑↑弥漫性肝损害↓N↓↓↑↓↑肝硬化↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑桥肾病↓↓↓↓↑↑↑不定弥漫宽γ球蛋白血症型↑↓N↑↑M蛋白血症型在α2-γ区出现异常峰高α2（β）球蛋白血症↓↑↑↑妊娠（高α型）↓N↓↑↑N蛋白质缺陷个别区带出现特征性缺乏Gammaglobulins(免疫球蛋白区带)•免疫球蛋白是机体的正常生理成分•多克隆•分类–重链：IgG、IgA、IgD、IgE、IgM–轻链：κ、λ–10种类型10种免疫球蛋白IgDLambdaIgELambdaIgEKappaIgDKappaIgALambdaIgGKappaIgGLambdaIgMLambdaIgAKappaIgMKappa•B淋巴细胞转化为浆细胞3•浆细胞合成抗体,即免疫球蛋白.4浆细胞免疫球蛋白•造血干细胞分化为3类细胞:-红细胞-粒细胞-巨核细胞•免疫球蛋白在免疫系统中被用来识别和消灭如细菌或病毒等外源物52骨髓(颅骨,盆骨,肋骨,胸骨)1免疫球蛋白的合成过程33正常浆细胞多克隆免疫球蛋白P1P2P3P4P5正常电泳结果免疫球蛋白电泳结果正常所有浆淋巴细胞同步合成免疫球蛋白=多克隆免疫球蛋白34浆细胞恶性增殖多克隆免疫球蛋白单克隆免疫球蛋白异常电泳结果M蛋白免疫球蛋白电泳结果骨髓瘤35IgGLambdaIgGKappaIgMKappaIgMLambdaIgALambdaIgAKappa200nm多克隆Igs单克隆Ig---“M”蛋白正常异常什么是M蛋白•单克隆浆细胞恶性增殖产生的均一蛋白•“M”–MultipleMyeloma多发性骨髓瘤–Macroglobulinemia巨球蛋白血症–Malignantlymphoma恶性淋巴瘤–MonoclonalGammapathies单克隆丙种球蛋白病•电泳曲线：单株峰恶性浆细胞增殖仅次于白血病（血液肿瘤）发病率占所有肿瘤的1~2%，血液肿瘤的10%美国：白人4/10万；黑人10/10万欧洲：2.5~3.0/10万亚洲：1~2/10万中国：无确切数据发病年龄老年病，随年龄↑发病率↑欧美：高峰65~70岁，中位年龄68岁中国：高峰55~65岁，中位年龄57岁男女比例男：女=2~2.5:1多发性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)39多发性骨髓瘤临床表现/并发症CalciumRenalAnemiaBoneCRAB骨髓瘤相关器官/组织损伤（ROTI）CRAB血清钙升高2.8mmol/L或升高0.25mmol/L以上肾功能不全肌酐176.8mmol/L贫血100g/L或低于正常下限20g/L骨损伤溶骨性损害、骨质疏松、病理性骨折其他高粘血症、反复细菌感染（≥2次/年）、淀粉样变……多发性骨髓瘤临床表现/并发症41临床特征缺乏特异性临床表现骨痛、病理性骨折：最常见贫血高钙血症免疫功能失调，感染肾功能受损、肾衰心、脑脏器微循环障碍，心脑血管病变多学科骨科、感染科、呼吸科、内分泌肾内科、泌尿科、心内科、神经科、消化科多发性骨髓瘤临床表现/并发症42多发性骨髓瘤病人溶骨报告肱骨颅骨盆骨临床特征缺乏特异性临床表现骨痛、病理性骨折：最常见贫血高钙血症免疫功能失调，感染肾功能受损、肾衰心、脑脏器微循环障碍，心脑血管病变多学科骨科、感染科、呼吸科、内分泌肾内科、泌尿科、心内科、神经科、消化科多发性骨髓瘤临床表现/并发症44我院实例-1患者信息性别：女年龄：69科室：血液科诊断：多发性骨髓瘤45我院实例-2患者信息性别：女年龄：69科室：消化内科诊断：慢性胃炎46我院实例-3患者信息性别：女年龄：73科室：中医科诊断：贫血？47就诊晚2/3确诊时已达中晚期误诊率高1/3非血液科首诊60%多发性骨髓瘤诊治现状晚骨折预后差增加负担感染发生率高肾脏病变不可逆死亡率↑↑48多发性骨髓瘤误诊分析1557例多发性骨髓瘤误诊分析吕鸿雁,张金巧.河北医药.2009,31(9):1052-54误诊率：65.17%重视实验诊断39.8%15.6%19.8%7.6%15.6%50国际骨髓瘤基金会2010推荐的M蛋白早期筛查流程多发性骨髓瘤分型M蛋白骨髓克隆性浆细胞/浆细胞瘤ROTI有症状MM√≥10%√无症状MM(冒烟型,SMM)√≥10%意义未明M蛋病MGUS√10%早发现、早诊断、早治疗早发现、早诊断、早治疗肿瘤52多发性骨髓瘤分型M蛋白骨髓克隆性浆细胞/浆细胞瘤ROTI有症状MM√≥10%√无症状MM(冒烟型,SMM)√≥10%意义未明M蛋病MGUS√10%早发现、早诊断、早治疗早发现、早诊断、早治疗肿瘤M蛋白筛查是关键53正常血清单克隆Ig单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测•血清蛋白电泳是检测M蛋白的唯一方法若在g区出现异常的峰，且高宽比大于2:1,可以初步判定为M蛋白峰54单克隆M蛋白的电泳位置常见于gamma球蛋白区亦可出现在其他区Beta2beta1alpha2单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测55徐玲令,杨再兴,赵文静,屠小卿,高春芳,孔宪涛.第二军医大学学报.2004,25(12):1343-45单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测单克隆M蛋白的电泳位置M蛋白阳性患者2007例的体液免疫特征分析56单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测gamma区：峰单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测微量M蛋白gamma区：曲线异常单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测Beta2区单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测Beta1区单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测Beta1与beta2融合单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测alpha2区单克隆免疫球蛋白(M蛋白)的检测3个单克隆难以辨别的图谱血红蛋白-触珠蛋白复合物游离HbAlba1a2b1b2g溶血标本电泳图谱特征Alba1a2b1b2g纤维蛋白原beta2区抗凝血蛋白电泳图谱特征Alba1a2b1b2gAlba1a2b1b2g可能原因:-基因突变-药物：beta内酰胺类-胰腺炎白蛋白区双峰2020/11/668白蛋白区干扰Alba1a2b1b2g可能原因:-脂蛋白升高-胆红素升高-造影剂CRPAlba1a2b1b2g急性炎症期CRP200mg/LGamma区：多克隆Ig，异常峰C反应蛋白---CRPAlba1a2b1b2gα-1抗胰蛋白（A1AT）缺乏症Alba1a2b1b2gα-1抗胰蛋白（A1AT）杂合子表型表型I-II表型I-I表型II-IIα2区：触珠蛋白的不同表型寡克隆免疫球蛋白异常的电泳图谱常见于:自身免疫病类风湿关节炎，干燥综合症，红斑狼疮等)病毒、细菌和寄生虫引起的感染H.I.V.病毒性肝炎巨细胞病毒感染与移植相关的自身免疫反应免疫抑制治疗寡克隆免疫球蛋白M蛋白可能类型•完整的免疫球蛋白分子•重链•轻链•半分子•IgM单体（7S-IgM）•……型别例数%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重链病50.77轻链病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59双M蛋白病81.24上海新华医院,2005年出现异常血清蛋白结果需要免疫分型电泳进一步确认646例M蛋白类型分类77免疫分型:检测请求在血清蛋白电泳的程序下:“ITRequest”稀释液(380µL)LKMAGELP抗血清/ELPsolution(20µL)免疫分型:抗血清稀释杯+上机、分析KLIgGIgAI