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医学机能实验学设计大纲实验名称：水蛭素对治疗家兔血栓的作用大鼠升主动脉缩窄——心力衰竭模型复制与观察课题来源：自选设计班级：设计人员：设计日期：指导老师：基础医学实验教学示范中心2016年03月一、实验设计的目的意义：实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决问题的思路。目的与意义：现在市场上的许多治疗血栓的药物的效果都不太理想，特别是脑血栓是致使许多中老年人诱发其他恶性疾病甚至是死亡的重要原因，而有很多药物副作用比较大。水蛭在中药中就有活血化瘀的功效，而且水蛭素是天然的抗凝药物，副作用小，是很绿色的药物。目的：探究水蛭素对家兔形成血栓的治疗效果从而为水蛭素在治疗血栓的临床应用提供实验支撑国内外的现状：很多研究表明水蛭素具有抗凝和抑癌症作用,但在临床上缺少实验支撑,尚未应用于临床存在的问题：心脑血管疾病是比较高发的疾病，而血栓则是很多疾病的诱因，虽然市场上有很多治疗血栓的药物，但是，效果或是不理想或是副作用大。所以，寻找健康绿色副作用小的天然抗凝药物治疗血栓显得尤其重要。解决问题的思路：很多研究表明水蛭素具有抗凝的作用，而血栓在形成过程中会不断凝集使血栓加重。而水蛭素的抗凝作用可能会对血栓有抑制甚至消除作用。参考文献：[1]张和韡,王丽萍.水蛭素的研究进展.[J].现代实用医学.2013(01)[2]严令耕,黄臣虎等水蛭素抗凝血和抗肿瘤转移的研究进展.[J].中药新药与临床药理.2010(06)[3]郭应信,殷国前,李佳荃等.天然、重组水蛭素对随意皮瓣淤血模型血管内皮细胞生长因子的影响.[J].中国组织工程研究与临床康复.2011(07)[4]赵恒利；崔晞；郭瑞臣.水蛭素基础及临床研究发展状况.[J].山东大学公共卫生学院卫生检验研究室.2006(05)[5]潘贺；刚宏林；王志国.水蛭素及重组水蛭素的应用研究概况.[J].现代实用医学.2006(02)二、实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题,实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排）。（一）实验设计目标，拟解决的关键问题设计目标：水蛭素具有抗凝和抑癌症作用,为水蛭素应用于临床治疗血栓提供实验支撑拟解决的关键问题：实验模型的制备、在家兔的颈静脉形成可见可测的血栓、试验药物的灌注与实验结果分析。（二）实验设计1、实验动物设计我们选用家兔作为实验动物，有以下几点理由：（1）家兔抗病力强、耐粗饲，对环境适应性好，繁殖力强，适合做急性动物试验。（2）家兔颈部神经血管和胸腔的特殊构造，适合做心血管实验和复制心血管及肺心病模型。（3）家兔平时表现温顺，其体积适中便于观察和解剖。（4）家兔比较大容易操作,家兔的颈静脉比较粗大容易操作。（5）家兔是肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究中常用的品系，符合实验设计。2、实验专业设计3只家兔随机分为实验组1,实验组2,空白组3,每组一只3、实验统计设计在科研实验统计设计中我们应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。（1）随机：选取正常成年健康普通级家兔3只,雌雄各半,体重2kg左右，将3只家兔随机分为3组进行编号.3只家兔都进行相同的操作形成长约2厘米的血栓.将1号和2号注射水蛭素,三号注射等量的生理盐水并观察（2）对照：本组实验做了空白对照和实验对照，在前面的专业设计里已经提及。（3）重复：本次试验在注射水蛭素分别设置了1组和2组,防止单一实验组的偶然性,并且体现了重复性（4）统计数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为3个时段。表1三组动物40min血栓长度比较组别L1L2L3一组二组三组（5）统计数据分析:三组家兔在年龄、性别、发育情况、健康状况等方面比较，差异无统计学意义，具有可比性。如各组血栓长度的比较，其方法如下：（1）建立检验假设Lx-L0=Ly(X=1,2,3.y=1,2,3),L1,L2,L3不全相等，极差A》0.54、实验方法设计实验技术路线1组2组3组夹闭颈静脉注射1ml凝集素形成血栓夹闭颈静脉注射1ml凝集素形成血栓夹闭颈静脉注射1ml凝集素形成血栓雌雄家兔实验技术方法（1）随机抽样：随机选取普通级家兔3只,雌雄不论,体重2kg左右，并分别编号，再随机平分成三组，并称重。（2）实验分组：实验分试验1组、试验2组、空白3组三个小组。（3）实验给药：试验1组:造模前夹闭左侧颈静脉并注射1ml凝集素，造模后耳缘静脉注射5ml水蛭素，观察血栓长度的变化并记录试验2组:造模前夹闭左侧颈静脉并注射1ml凝集素，造模后耳缘静脉注射5ml水蛭素，观察血栓长度的变化并记录空白3组:造模前夹闭左侧颈静脉并注射1ml凝集素，造模后耳缘静脉注射5ml生理盐水，观察血栓长度的变化并记录（4）模型复制：13%戊巴比妥钠30mg/kg麻醉。2每组家兔分离两侧颈静脉并夹闭左侧颈静脉，并用针筒注射1ml凝集素，使夹闭的颈静脉之间形成血栓（5）处理措施：实验1,2组耳缘静脉注射5ml水蛭素，空白3组耳缘静脉注射5ml生理盐水（三）可行性分析1、本实验设计原理较为简单，操作方便，实验方法成熟，实验结果较为可靠。2、本实验中的材料均可由医学机能实验室提供，保证实验的顺利进行。3、本实验组成员具备基本的机能实验知识，掌握基本的机能实验操作技术。（四）预期效果1，试验1组和试验2组的血栓有明显消减，空白3组的血栓几乎不变（五）实验设计工作时间安排1、前期制模和手术及药物处理共计用时1.5个小时造模造模造模耳缘静脉注射5ml水蛭素耳缘静脉注射5ml水蛭素耳缘静脉注射5ml生理盐水2、二次给药和数据整理共计用时1个小时3、总共实验耗时2.5小时完成。三、完成实验条件1.仪器设备情况：常用机能实验手术器械一套、注射器、2.实验动物情况：普通级家兔3只,雌雄不论,体重2kg左右,由成都医学院动物实验中心提供。1、3.药品试剂来源：凝集素和水蛭素市场购买，戊巴比妥钠实验室提供