血脂及血浆脂蛋白检验ppt

-1第十章血脂及血浆脂蛋白检验-2血脂、血浆脂蛋白及载脂蛋白检验的重要性动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)冠心病（CHD）等心、脑血管疾病血脂代谢异常-3-4临床常规血脂和脂蛋白测定项目:总胆固醇（totalcholesterol，TC，包括FC和CE）甘油三酯(TG)高密度脂蛋白－胆固醇(HDL-C)低密度脂蛋白－胆固醇(LDL-C)载脂蛋白等。-5第一节概述第二节血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定本章内容概要-6一、血脂及血浆脂蛋白血脂：是血浆中脂类（脂质）物质的总称。包括中性脂肪（甘油三酯TG）和类脂（胆固醇Ch、胆固醇酯CE、磷脂、糖脂、游离脂肪酸）。定义：脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式运输和代谢。第一节概述-7（一）血浆脂蛋白的分类超速离心法：乳糜微粒CM极低密度脂蛋白VLDL低密度脂蛋白LDL高密度脂蛋白HDL•电泳法:密度从低到高β脂蛋白前β脂蛋白α-脂蛋白乳糜微粒（CM）电泳速度由慢到快－－－－－－－－－－中间密度脂蛋白IDL脂蛋白(a)Lp(a)-8原点γβα2α1清蛋白－＋血浆蛋白电泳－＋原点β前βα（CM）血浆脂蛋白电泳-9（二）血浆脂蛋白的组成与结构血浆脂蛋白脂类：蛋白质：甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯载脂蛋白-10CM乳糜微粒VLDL前β脂蛋白LDLβ脂蛋白HDLα脂蛋白密度＜0.950.95~1.0061.006~1.0631.063~1.210组成脂类蛋白质主要生理功能98~99%最少,1%90~95%5~10%含胆固醇及其酯最多含脂类50%20~25%最多，约50%转运外源性TG转运内源性TG转运胆固醇到肝外组织逆向转运肝外胆固醇回肝含TG最多TG多（次于CM）75~80%各种血浆脂蛋白的组成及功能-11（三）载脂蛋白脂蛋白的蛋白部分称为载脂蛋白(apolipoprotein，Apo)定义：种类：apoB：48、100C：I、II、IIIA:I、II、IVDE-12apoAapoBapoCapoDapoEB48B100C-Ⅰ,Ⅱ,ⅢEB100A-Ⅰ,ⅡCMVLDLLDLHDL-13功能：①与脂质的亲和作用而使脂质溶于水性介质中。②运转胆固醇和甘油三酯。③作为脂蛋白外壳的结构成分，与脂蛋白外生物信息相联系。④以配体的形式作为脂蛋白与特异受体的连接物。（如：apoB100和apoE参与LDL受体的识别；apoE能被CM受体识别）⑤激活某些与血浆脂蛋白代谢有关的酶类（如：ApoAI和CI能激活卵磷脂-胆固醇酰基转移酶LCAT，ApoCⅡ激活LPL）-14分布及特点：-15（四）脂蛋白受体定义：脂蛋白受体是一类位于细胞膜上的糖蛋白。它能以高度的亲和方式与相应的脂蛋白配体作用，从而介导细胞对脂蛋白的摄取与代谢，进一步调节细胞外脂蛋白的水平。-16脂蛋白受体的作用：位于各种细胞的膜上，脂蛋白转化分解后的残基主要通过脂蛋白受体被摄入细胞。不仅是运送脂蛋白至细胞所必需，也是从血和外周组织中有效清除具有潜在致动脉粥样硬化的脂蛋白所必需的。种类：已有很多种，主要有LDL受体、残粒受体（remnantreceptor）及清道夫受体（scavengerreceptor）其它有ApoE受体（CM）HDL受体和β-VLDL受体等。-17LDL受体：分布于肝细胞、动脉壁平滑肌细胞等细胞膜表面识别结合ApoB100、E的脂蛋白如LDL、VLDL等。合成受体内胆固醇的负反馈调节各种脂蛋白受体功能残粒受体：分布在代谢活跃的心肌、骨骼肌、脂肪等组织细胞。识别、结合含ApoE的脂蛋白如CM残粒和β-VLDL残粒清道夫受体：存在于巨噬细胞表面识别、结合修饰的LDL（氧化型LDL和β-VLDL）-18（五）脂代谢有关的酶类与特殊蛋白质酶：LPL、肝脂肪酶（HL或HTGL）、LCAT、HMG-CoA还原酶参与TG分解、FC合成和酯化-19脂质转运蛋白定义：血浆中脂蛋白部分含有一种特殊的转运蛋白，能促进血浆各脂蛋白间胆固醇酯、甘油三酯和磷脂的单向或双向转运和交换，这类特殊转运蛋白称脂质转运蛋白（lipidtransferprotein,LTP）。组成：胆固醇酯转运蛋白（CETP）：可将LCAT催化生成的胆固醇酯由HDL转移至VLDL、IDL和LDL中，在胆固醇的逆向转运中起关键作用磷脂转运蛋白（PTP）：可促进磷脂由CM、VLDL转移至HDL甘油三酯转运蛋白（TTP）：在富含TG的VLDL和CM组装和分泌中起主要作用蛋白质：-20（一）CM的代谢来源：由小肠粘膜细胞合成，经淋巴入血。代谢过程：二、血浆脂蛋白代谢-21小肠食物TG经淋巴入血CEPCAETGCB-48ACETGCB-48ATGCB-48新生CMCMCM残粒HDLapoEapoC、apoA、apoC外周组织LPL脂酸甘油胆固醇脂酸肝HLLRP受体LDL受体CM功能：转运外源性TG。正常人CM在血浆中代谢迅速，半衰期为5-15分钟，故正常人空腹12-14h后血浆中不含CM。-22（二）VLDL及LDL的代谢来源：VLDL主要由肝细胞合成，分泌入血，少量来自小肠；LDL是在血浆中由VLDL转变而来代谢过程：-23ECECCEPCATGCTGC新生VLDLVLDLIDLHDLapoEapoC、apoC外周组织LPL脂酸甘油胆固醇脂酸肝HLB-100B-100ETGCB-100CEB-100LDL受体LDLLDL受体功能：VLDL转运内源性TG；LDL转运胆固醇到肝外组织-24（三）HDL的代谢来源：主要由肝细胞合成，此外，小肠也可合成少量，还有血浆中CM、VLDL脂解过程中所释放的磷脂、胆固醇及apo也可产生新生的HDL。代谢过程：-25功能：将胆固醇从肝外组织转运到肝进行代谢（逆向转运）。-26三、脂蛋白代谢紊乱（一）高脂蛋白血症（多见）定义：高脂血症（hyperlipidemia，HLP）是指血浆中胆固醇和（或）甘油三酯浓度异常升高。血浆脂类以血浆脂蛋白形式存在，因此，高脂血症一般指高脂蛋白血症（hyperlipoproteinemia）。近年来，已逐渐认识到血浆中HDL降低也是一种脂代谢紊乱。成人空腹12～14h血清（浆）TG＞2.26mmol/L(200mg/dl)，胆固醇＞6.21mmol/L(240mg/dl)，儿童胆固醇＞4.14mmol/L(160mg/dl)LDL：与动脉粥样硬化和冠心病呈正相关HDL：与动脉粥样硬化和冠心病呈负相关VLDL：与动脉粥样硬化和冠心病呈正相关-271.按表型分类主要是基于各种血浆脂蛋白升高的程度不同而进行分型。该分类法不包括病因学，故称表型分类。分型：-28（罕见）（罕见）（常见）（常见）（极常见）（罕见）CM带明显β脂蛋白明显增高前β及β脂蛋白均增高前β及β脂蛋白带融合，宽而浓染的“宽β带”前β脂蛋白明显增高CM带明显，前β脂蛋白增高或透明CM残粒及VLDL残粒（IDL）-292.按是否继发于全身性疾病分类继发性高脂血症：原发性：继发性者由一些全身性疾病引起血脂异常，如糖尿病、肾病综合征、肾功能衰竭、甲状腺功能减退症、肝胆疾病、系统性红斑狼疮、肥胖症、饮酒等。此外，某些药物如β-受体阻断剂、降压药等也可引起血脂异常。在排除继发性高脂血症后，可诊断为原发性。已知部分原发性高脂血症由先天性基因缺陷所致-303.高脂血症的基因分型法表10-5家族性高脂血症的临床特征常用名基因缺陷临床特征表型分类家族性高胆固醇血症LLDL受体缺陷以胆固醇升高为主，可伴轻度甘油三酯升高，LDL明显增加，可有肌腱黄色瘤，多有冠心病和高脂血症家族史。ⅡaⅡb家族性ApoB100缺陷症ApoB100缺陷同上同上家族性混合型高脂血症不清楚胆固醇和甘油三酯均升高，VLDL和LDL都增加，无黄色瘤，家族成员中有不同型高脂蛋白血症，有冠心病家族史。Ⅱb家族性异常β脂蛋白血症ApoE异常胆固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDL残粒以及IDL明显增加，可有掌皱黄色瘤，多为ApoE2（2/2）表型。Ⅲ家族性高甘油三酯血症不清楚以甘油三酯升高为主，可有轻度胆固醇升高，VLDL明显增加。Ⅳ-31（二）低脂蛋白血症一般将血清TC＜3.3mmol/L，或TG＜0.45mmol/L，或LDL-C＜2.1mmol/L者，称为低脂蛋白血症。脂质如TC和TG同时降低或脂蛋白如HDL、LDL和VLDL同时降低多见。定义：原因：因某种原因使脂蛋白合成减少，另外分解代谢旺盛也可导致。分类：原发性和继发性-32第二节血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定TC测定TG测定HDL-C测定LDL-C测定Lp（a）测定ApoAI测定ApoB测定脂蛋白电泳分析其他测定：有关的蛋白质、酶和受体测定血清或血浆外观（血清/浆静置试验）血清脂质和脂蛋白检测的分析程序及项目选择-33血脂测定标准化：血脂分析前变异来源于：①生物因素，如年龄、性别、种族等因素的个体差异。②生活方式，包括饮食习惯、吸烟、运动及应激等。③临床方面包括疾病或药物引起的脂代谢改变。④血标本采集与处理方面准确测定应从分析前的准备开始，包括受试者的准备，标本采集，合格的试剂、校准物的选用，检测方法选择。方法学上应该采用美国疾病控制中心（CDC）或中华医学会检验分会推荐的操作方法。-34抽血前应有两周时间保持平常的生活习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况，24小时内不饮酒，禁食12-14小时，早上空腹、安静状态下采血。注意事项：（1）检验前，应根据药物的特性，尽可能停止用药数天或数周。（2）妊娠前、后期各项血脂都会增高，产后、终止哺乳3个月后，才能反映其基本血脂水平。（3）血脂水平有季节性变动，对于体检者建议应在每年同一季节检查。（4）结合生理和临床情况，综合、动态分析检验结果。1.受检者的准备标本采集与处理-352.静脉采血3.抗凝剂4.标本处理除非是卧床的患者，一般在采血时取坐位。止血带的使用不可超过1min，穿刺成功后应立即松开止血带，然后抽血。我国多用血清作血脂分析。如果用血浆，多主张用EDTA·2Na抗凝标本应尽快送往实验室，室温下放置30-45min后离心，分离血清。-36血清或血浆外观（血清/浆静置试验）-37TC、TG均正常（正常人）TC↑↑,TG正常（IIa型）TC↑↑,TG↑（IIb型）TCN/↑,TG↑↑（I型）TC↑↑,TG↑↑（III型/V型）TC↑↑,TG↑↑（IIb型/III型）TCN/↑,TG↑↑（IV型）TG↑↑CM↑↑VLDL↑↑CM及VLDL↑↑血清（浆）静置试验将患者空腹12h后采集静脉血分离出血清置4℃冰箱中过夜，然后观察其分层现象及清澈度。-38-39-40TC测定TG测定HDL-C测定LDL-C测定-41血清（浆）总胆固醇（TC）测定化学法酶法血清中TC包括CE和FC，其中CE占70％，FC占30％。-42（一）化学测定法（直接法和间接法）1.胆固醇与醋酐–硫酸试剂产生蓝绿色L–B反应：Liberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色，Burchard用此反应测定胆固醇称为L-B反应。（条件要求严格、试剂腐蚀性强、对FC与CE的显色强度不一致、呈色不稳定）Abell法（ALBK法）：公认的参考方法皂化（KOH乙醇溶液水解CE成为FC）、抽提（正己烷或石油醚提取FC）、显色（L-B反应）。2.胆固醇与高铁–硫酸试剂产生稳定的紫红色Zak反应：Zak提出用硫酸、醋酸和Fe3+等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇，称为Zak反应。（比L-B反应的灵敏度高，呈色稳定不需要皂化，反应特异性差）3.胆固醇与邻苯二甲醛–硫酸试剂生成稳定的紫红色-43CEH-COD-PAP法原理：CE＋H2OFC＋FFAFC＋O2△4-胆甾烯酮＋H2O2H2O2＋4-AAP＋苯酚醌亚胺＋H2OCEHCODPOD试剂：胆固醇酶测定法的试剂中，除了上述三种酶、酚和4-氨基安替比林外，还有维持pH恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆酸钠是为了提高胆固醇