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1第五章黄酮类化合物（Flavonoids）天然药物化学天然药化教研室主讲教师：宋少江2本章内容第一节概述第二节理化性质及显色反应第三节提取与分离第四节检识与结构鉴定第五节结构研究实例3第三节提取与分离一、提取与粗分苷元：用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取。苷及极性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取。提取黄酮苷类成分时，应避免发生水解，可按一般苷的提取方法先破坏酶的活性。4第三节提取与分离一、提取与粗分（一）溶剂萃取法——利用化合物的极性药材水或醇-水，加热提取提取液浓缩，加3~4倍量醇（水提醇沉法）醇水液沉淀（水杂）浓缩，回收醇，加水混悬水混悬液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚层(叶绿素胡萝卜素脂溶性成分)氯仿层(黄酮苷元)乙酸乙酯层(极性大苷元极性小的苷)正丁醇层(黄酮苷)水层(多糖蛋白质)（系统溶剂萃取）5在60-70℃下用浓盐酸调至pH3-4，静置1hr，抽滤第三节提取与分离一、提取与粗分（二）碱提取酸沉淀法——利用化合物的酸性原理：黄酮＋碱成盐（溶于水）沉淀加酸OOOHHOOHOHOrutinose槐花米粗粉加水，搅拌下加入石灰乳至pH8-9，微沸30min，趁热抽滤残渣滤液滤液沉淀（粗制芦丁）芦丁6第三节提取与分离一、提取与粗分（二）碱提取酸沉淀法——利用化合物的酸性碱：Ca(OH)2水溶液、Na2CO3水溶液或稀NaOH溶液（即石灰乳或石灰水）使含酚羟基化合物成盐溶解使含COOH的果胶、粘液质、蛋白质等杂质形成沉淀而除去提取时，碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核；酸化时，酸性不宜过强，以免形成盐而溶解。7第三节提取与分离一、提取与粗分（三）炭粉吸附法——主要用于黄酮苷的精制药材甲醇提取物分次加入活性炭，搅拌，静置，直至上清液无黄酮反应，过滤吸苷炭末滤液依次用沸水、沸甲醇、7%苯酚/水、15%酚/醇溶液进行洗脱沸水洗脱液沸甲醇洗脱液7%苯酚/水洗脱液15%酚/醇洗脱液浓缩，加乙醚萃取乙醚层（酚）水层（黄酮苷）8第三节提取与分离二、分离化合物的性质极性——硅胶酸性——pH梯度萃取、离子交换树脂形成氢键的能力——聚酰胺分子大小——葡聚糖凝胶特殊结构——金属盐络合（如邻二酚羟基）9第三节提取与分离二、分离（一）柱色谱法1、硅胶柱色谱主要用于分离弱极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。吸附规律：极性大的物质易于被吸附一般洗脱顺序：苷元＞单糖苷＞双糖苷＞多糖苷10第三节提取与分离二、分离2、聚酰胺柱色谱吸附原理：氢键缔合洗脱顺序规律：（先→后）（1）苷元相同，三糖苷＞双糖苷＞单糖苷＞苷元（2）母核上羟基增加，洗脱速度减慢（3）羟基数目相同，有缔合羟基＞无缔合羟基（4）不同类型黄酮化合物，异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇（5）分子中芳香核、共轭双键多则易被吸附，故查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。11OOOHGlcOOORha下列黄酮化合物：（1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，（2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，分别写出洗脱顺序DOOOHGlcOOHOHRhaOOOHGlcOOHOH练习：OOOHHOOHOOOHHOOHOHABCE聚酰胺：DECBA硅胶：ABCDE12第三节提取与分离二、分离3、葡聚糖凝胶柱色谱常用型号：SephadexLH-20分离原理：黄酮苷元——吸附作用，取决于游离酚羟基的数目（与位置无关），苷元的羟基数越多,越难洗脱。黄酮苷——分子筛，按分子量由大到小的顺序流出柱体。13第三节提取与分离二、分离黄酮类化合物在SephadexLH-20(甲醇)上的Ve/V0黄酮类化合物取代图式Ve/V0芹菜素5,7,4'-三羟基5.3木樨草素5,7,3',4'-四羟基6.3槲皮素3,5,7,3',4'-五羟基8.3杨梅素3,5,7,3',4',5'-六羟基9.2山奈酚-3-半乳鼠李糖-7-鼠李糖苷三糖苷3.3槲皮素-3-芸香糖苷双糖苷4.0槲皮素-3-鼠李糖苷单糖苷4.9苷元的羟基数越多，越难以洗脱；苷的分子量越大，连接糖的数目越多，越容易洗脱。14第三节提取与分离二、分离3、葡聚糖凝胶柱色谱常用洗脱剂：（1）醇或含水醇，如甲醇、甲醇-水、乙醇等。（2）其它溶剂：如丙酮-水、氯仿-甲醇等。进行洗脱剂更换时，要注意不同溶剂对填料的溶胀度差别不能过大。157,4'-二OH＞7-或4'-OH＞一般酚OH＞5-OH第三节提取与分离二、分离（二）梯度pH萃取法适于分离酸性强弱不同的黄酮苷元酸性：溶于NaHCO3中溶于Na2CO3中溶于不同浓度NaOH中16第三节提取与分离二、分离（二）梯度pH萃取法样品乙醚液5%NaHCO3碱液（7,4'-二羟基黄酮）乙醚液5%Na2CO3碱液（7或4'-羟基黄酮）乙醚液0.2%NaOH碱液（一般羟基黄酮）乙醚液4%NaOH碱液（仅含3-OH或5-OH黄酮）乙醚液（脂杂）17练习：从某植物中分离出四种化合物，其结构如下：第三节提取与分离二、分离OOOHR2OOHOR1试比较四种化合物的酸性：极性大小：比较它们的Rf值大小顺序：（1）硅胶TLC（2）聚酰胺TLCAR1=R2=HBR1=H,R2=RhaCR1=Glc,R2=HDR1=Glc,R2=RhaDCBAACBDABCDDBCA18第三节提取与分离二、分离（三）根据分子中某些特定官能团进行分离如：醋酸铅沉淀法（目前已不使用）具有邻二酚羟基，可被醋酸铅沉淀不具有邻二酚羟基，可被碱式醋酸铅沉淀