第五章-沙门氏菌的检验.ppt

第五章沙门氏菌的检验本章重点掌握：1、食品中沙门氏菌的检验原理2、食品中沙门氏菌的检验方法一、沙门氏菌属简介DANIELELMERSALMON,(1850-1914)美国兽医微生物和病理学家。是美国授予的第一位兽医学博士。1884年任美国农业部畜牧局首任局长。他首次从病猪中分离出猪霍乱沙门氏菌。在医学微生物中通用的沙门菌一词，就是为纪念他而以他的名字命名的。沙门氏菌分为三大类群第一类群：专门对人致病第二类群：食物中毒沙门氏菌群第三类群：专门对动物致病事例俄亥俄州国王坚果公司生产的５磅（2.27千克）重罐装花生酱中含有沙门氏菌。国王坚果公司１０日发表声明说，接到明尼苏达州方面的通报后，公司立即决定全部召回公司及其下属两家公司生产的花生酱。美国疾病控制和预防中心１２日发表的新闻公报又将国王坚果公司推向风口浪尖。公报说，自去年９月以来，美国共有４３个州发现沙门氏菌疫情，染病人数达到４１０人，并有３人被怀疑在感染沙门氏菌后死亡。调查发现，几乎所有感染沙门氏菌的患者都食用过花生酱，并且大多数人食用的都是国王坚果公司的５磅重罐装花生酱。人民网12月7日电美国牛肉包装公司日前宣布，将从亚利桑那州和新墨西哥州的多家超市召回大约10吨牛肉馅。据悉，这些牛肉馅遭一种有抗药性的沙门氏菌污染，目前已经造成多人因食用这批牛肉而生病。这是该公司今年在美国境内第二次发出召回牛肉馅的通知。今年8月，这家牛肉公司也曾召回了将近400吨牛肉馅。当时，那批产品造成至少39人生病。对免疫系统虚弱的老年人和幼儿来说，这些被沙门氏菌污染的牛肉馅可能带来致命后果，其症状包括腹泻、高烧、肚子疼和呕吐。由于这种沙门氏菌具有强抗药性，因此更加危险。生物学特性形态染色特征：革兰氏阴性，大小为1-3×0.4-0.9μm的两端钝圆的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强，具菌毛。培养特性：沙门氏菌需氧或兼性，10～42℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH为6.8～7.8。营养琼脂平板上：35～37℃培养18～24h，其菌落大小一般为2～3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。血平板：中等大小、灰白色菌落。生物学特性生物学特性生化反应：不发酵乳糖和蔗糖，不产生吲哚，不分解尿素，VP试验阴性，大多产生硫化氢。发酵葡萄糖、麦芽糖和甘露醇，除伤寒杆菌产酸不产气外，其他沙门氏菌均产酸产气。抵抗力不耐热，55℃1h或者60℃15-30min即可杀死普通水中可生存2-3周，粪便中存活1-2月在牛乳和肉类，存活数月，腌肉中存活2-3月冷冻对沙门氏菌无杀灭作用，即使在-25℃低温仍可存活10个月左右沙门氏菌的来源家畜、家禽的生前感染和宰后污染乳中沙门氏菌的来源蛋类沙门氏菌的来源熟制品中沙门氏菌的来源沙门氏菌属流行病学特点季节性特点全年皆可发生，多见于夏、秋两季，主要症状急性肠胃炎食品种类沙门氏菌食物中毒的食品主要为动物性食品，特别是畜肉类及其制品沙门氏菌污染肉类食物的几率很高发病率及影响因素沙门氏菌食物中毒发病率较高，占总食物中毒的40％～60％，最高可达90％沙门氏菌致病力强弱与菌型有关沙门氏菌致病力强弱与易感人群有关二、检验选择性平板分离选择性增菌前增菌生化鉴定血清学鉴定检样25g样品＋225mLBPW36℃±1℃8h～18h1mL＋TTB10mL1mL＋SC10mLBSHE（或XLD、SS）TSI（排除A/AH2S－结果），赖氨酸，靛基质，尿素，KCN沙门氏菌血清学试验甘露醇＋山梨醇＋H2S＋靛＋尿－KCN－赖＋H2S－靛－尿－KCN－赖＋/－非如左述的各种反应结果沙门氏菌血清学试验ONPG－沙门氏菌血清学试验非沙门氏菌36℃±1℃18h～24h36℃±1℃18h～24h36℃±1℃40h～48h36℃±1℃18h～24h中华人民共和国国家标准GB/T4789.4-2010H2S＋靛－尿－KCN－赖＋报告沙门氏菌在BS平板上沙门氏菌在HE平板上沙门氏菌的TSI试验三糖铁（TSI）琼脂试验本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。a.uninoculatedb.littlechange/alkaline/-/-c.alkaline/acid/-/+d.acid/acid/+/+e.acid/acid/+/-slantcolor/buttcolor/gasproduction/hydrogensulfideproduction赖氨酸脱羧酶试验试验管对照管阳性+阴性-对照管变黄试验管变黄靛基质（Imdole）试验某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。尿素酶（Urease）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。1、未接种2、尿素酶阳性3、尿素酶阴性KCN生长试验右：抑制生长斜面底层产气硫化氢初步判断KA＋(－)＋(－)KA＋(－)＋(－)AA＋(－)＋(－)沙门氏菌在TSI和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的结果赖氨酸脱羧酶＋－＋可疑沙门氏菌属可疑沙门氏菌属可疑沙门氏菌属AA＋/－＋/－－非沙门氏菌属KK＋/－＋/－+/－非沙门氏菌属K:产碱；A：产酸；+（-）：多数阳性，少数阴性；+/-：阳性或者阴性肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表序号硫化氢靛基质尿素氰化钾赖氨酸脱羧酶判定菌属A1+－－－+沙门氏菌属A2++－－+A3－－－－+/－A1：沙门氏菌属；如尿素、氰化钾、赖氨酸脱羧酶有一项异常；两项异常：非肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表pH7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸脱羧酶判定结果－－＋－＋－－＋＋甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ（要求符合本群生化特性）沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）反应序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验甘露醇山梨醇判定结果+－+－沙门氏菌靛基质阳性变体（要求血清学鉴定结果）非沙门菌反应序号A3：补做ONPGONPG+为大肠埃希氏菌，ONPG—为沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸+，但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸-。ONPG:邻硝基酚β－D－半乳糖苷ONPG试验阳性（黄）空白血清学鉴定鞭毛抗原（H）菌体抗原（O）K或Vi抗原血清学鉴定一般采用1.5%琼脂斜面培养物作为玻片凝集试验用的抗原。用A～F多价O血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。沙门氏菌检验——几点注意冷冻样品解冻需在45℃以下，有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在2-8℃，18小时内软化。为保证检验的准确性，必须在选择性培养基上挑取足够数量的菌落进行生化和血清学鉴定。进行生化反应时，应以纯培养物进行试验，如出现血清学阳性，而生化反应特征不符合时，应对接种物进行纯化，用纯化后的培养物重新进行生化试验。测试中应同时接种阳性对照菌株。沙门菌仪器检测法VIDAS（生物梅里埃公司）BAX（杜邦公司）沙门菌仪器检测法VIDAS应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪，用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来捕捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合，经充分冲洗，通过激发光源检测，即能自动读出发光的阳性标本，其优点是检测灵敏度高，速度快，可以在48小时的时间内快速鉴定沙门氏菌、大肠杆菌O157：H7、单核李斯特菌，空肠弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。沙门菌仪器检测法DUPONTQualiconBAXSystem应用DNA分子核酸探针或基因探针技术制造的全自动PCR分析仪。将已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记，加入已变性的被检DNA样品中，在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链，从而达到鉴定样品中DNA的目的。商品化生化鉴定系统VITEKGNI+应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试，卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定浓度的欲鉴定菌株的菌悬液，然后将菌悬液接种到各种细菌的小卡上，将其放入具有读数功能的孵箱内，每隔一定时间，仪器会自动检测培养基的发酵情况，并换算成能被计算机所接受的生物编码。最后由计算机判定，打印出鉴定结果。商品化生化鉴定系统API20EAPI20E生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。API20E第1位数第2位数第3位数第4位数第5位数第6位数第7位数结果判定ONPGADHLDCODCCITH2SURETDAINDVPGELGLUMANINOSORRGASACMELAMYARAOX124124124124124124124反应结果-+++++-----+++++-+-+-沙门菌应得树枝024124000004124104020组合编码6704752沙门氏菌在CHROMagar显色培养基上的菌落特（紫）沙门氏菌在海博公司显色培养基上的菌落特征（红）沙门菌检测显色培养基