Waters液相色谱教程3

©2004WatersCorporation传统HPLC的“泵”:并联泵去系统6并联泵各部件功能1梯度比例阀(GPV)2进口阀3出口阀4系统压力传感器5泵头及柱塞杆6柱塞驱动马达及传动装置B泵头4A泵头ABCD流动相3232155©2004WatersCorporation传统HPLC的“泵”:串联泵ABCD流动相1主泵头3去系统6串联泵各部件功能1梯度比例阀(GPV)2进口阀3出口阀4系统压力传感器5泵头及柱塞杆6柱塞驱动马达及传动装置附泵头2455©2004WatersCorporation从结构及原理上看差异ƒ2695分离单元–两个互相独立直线马达分别驱动，互不影响，无压力波动，因此不用阻尼器或梯度混合器–蓄积柱塞向系统输送绝大部分溶液，主柱塞主要是传递溶液–两个压力传感器感应并调整柱塞内压力，柱塞间交换平稳–没有出口阀，减少故障率ƒ传统HPLC泵–一个马达通过传动装置带动两个柱塞杆，有压力波动，靠阻尼器平稳压力–不论是串联泵，还是并联泵，两柱塞分别向色谱系统等量送液：互补–单一压力传感器仅监测系统压力，两柱塞不能平稳交换–有出口阀，而出口阀是泵中故障最多的部件©2004WatersCorporation2695溶剂输送系统的特点ƒ独立的柱塞杆驱动马达–双压力传感器，监视系统及柱塞腔压力–软件根据传感器的反馈，控制所有功能–完全没有压力的脉动–只有两个进口阀，没有出口阀，可靠性极高ƒ精确的溶剂配比–溶剂混合在柱塞腔内完成–精确的先进、先出流路–低系统体积©2004WatersCorporation2695柱塞工作示意图时间(sec)观察到的柱塞速度蓄液柱塞吸液(从主柱塞转移过来)主柱塞吸液主柱塞送液(转移蓄液柱塞并送到系统)蓄液柱塞送液预压缩主柱塞蓄液柱塞周期重复0.40-+相对速度排空充填©2004WatersCorporation压力平稳的好处:提高灵敏度ƒ使用配压力敏感检测器—432电导检测器的Alliance系统分析阳离子，通过降低噪音提高了灵敏度NH44.006.008.0010.0012.000.4LiNaKMgCaLi=25ppbNa=25ppbNH4=25ppbK=25ppbMg=25ppbCa=25ppbMinutes6.007.008.00Minutes0.05uS9.00基线噪音0.0041µS色谱柱:ICPakC/MD洗脱剂:硝酸/EDTA流速:1mL/min电导率:1250µS(indirect)进样体积:100µL©2004WatersCorporation平稳流速提高灵敏度:示差检测5.0010.00Minutes传统HPLC系统0.8mV0.08mV=10S/N=0.85mV0.022mV=40S/N=WatersAlliance系统ƒ葡萄糖和蔗糖各2.5µgƒWaters高效糖分析柱ƒCH3CN/H2O=75/25ƒ1.4mL/min.ƒWaters410示差折光检测器©2004WatersCorporation平稳流速提高数据重现性ƒ由于信噪比的提高，积分的可靠性提高，使各组份的峰面积%RSD得到改善，在此例中，样品上样量为2.5µg的糖AllianceTraditional进样次数88葡萄糖1.9256.373蔗糖2.9301.659©2004WatersCorporationWaters的进样器ƒRheodyne7725i-手动进样器ƒ717Plus-全电子自动进样器ƒ2695样品管理系统©2004WatersCorporationRheodyne7725i手动进样器ƒ七孔手动进样器组件ƒ工作反压达到7000psiƒ7725i的优点–旋转操作时不中断流速–可部分充满（可变），也可全部充满(固定)loop–孔角度较宽，改善了操作的容易程度–标准配置4种loop从5μL到200μl，进样量从1μL到200μl–用户可定制不同体积的loop,最大到5ml–内部有进样信号线（7725i）–容易使用，可靠©2004WatersCorporation717plus自动进样器ƒ717plus的设计特点–全电子设计，精度极好、可靠性高–48位和96位样品样品盘–多方法编程，自动标样程序，优先样品等模式–可单独操作也可外部控制(IEEE)–样品室温度控制(4-40℃)-选件–交叉污染小、进样范围宽–大屏幕LCD显示，容易使用©2004WatersCorporation717plus自动进样器的流路©2004WatersCorporation2695分离单元:样品管理系统ƒ继承Waters进样器的先进设计，不断流进样ƒ五个独立的24位样品盘ƒ每个样品盘有固定的位置可分别用于不同的目的ƒ可操作任意样品盘或样品瓶ƒ丰富的程序，适应于复杂的工作©2004WatersCorporation2695样品管理系统:特点ƒ全电子设计,除电源外,不需其它任何动力ƒ极佳的线性范围及进样重现性ƒ交差污染极小（全自动进样针内、外清洗装置）ƒ低维护成本©2004WatersCorporation2695:样品管理系统ƒ样品瓶数目:120,分装于5个样品盘(24瓶/盘)ƒ进样次数:每瓶可进1到99次ƒ标准样品瓶:2mLƒ样品室温控:4到40℃,增量1℃ƒ进样体积:标准配置:0.1到100uLƒ定量环选件:0.1到2000uLƒ最小样品量:10uL,用低体积的内插式小瓶(Insert)ƒ最小进样量:0.1uL©2004WatersCorporation检测器的种类与作用ƒ检测器是液相色谱仪的“眼睛”ƒ其作用是把色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号,被数据系统接收,得到样品分离的色谱图ƒ检测器性能的好坏直接关系到分析结果的可靠性与准确性ƒ根据对各类物质响应的差别,检测器可分为两大类:–通用型检测器(例如,示差折光检测器)–专用型(选择性)检测器(例如,紫外检测器,电化学检测器)©2004WatersCorporation液相色谱检测模式选择性RI折射率UV/VIS紫外/可见FLUOR荧光ECD电化学COND电导ELSD蒸发光散射响应类型通用型选择性选择性选择性半通用灵敏度µgngpgpgpgng线性范围104105103106105103流速敏感YesNoNoYesYesYes温度敏感YesNoNoYesYesYes©2004WatersCorporation液相色谱对检测器的要求ƒ高灵敏度ƒ可重现的设置ƒ合适的带宽ƒ快速或可变的时间常数ƒ宽的线性响应范围ƒ容易使用及保养ƒ自我诊断功能©2004WatersCorporation衡量检测器的指标ƒ灵敏度∶S=△R/△Q–△R是检测器响应值的增量–△Q是样品量的增量ƒ噪音∶没有样品时检测器的最大输出信号ƒ漂移∶检测器在一段时间内响应值的变化ƒ线性动态范围∶最大线性响应与最小检出限之比ƒ最低检测限∶样品产生两或三倍于噪音信号时的浓度ƒ信噪比∶S/Nƒ注意∶最低检测限和信噪比不是一个单纯的检测器指标。它实际上是评价整个色谱系统的指标，包括了色谱系统、分离机理、色谱柱在内的综合性指标©2004WatersCorporationWaters的各种检测器ƒ紫外/可见光(UV/Vis)检测器-2487ƒ二极管矩阵(PDA)检测器-2996ƒ荧光检测器(FLD)-2475ƒ示差折光(RI)检测器-2414ƒ蒸发光散射检测器(ELSD)-2420ƒ电化学检测器(ECD)-2465ƒ电导检测器(COD)-432ƒ质谱检测器(MS)-EMD,ZQ