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益菌抑菌知识抑菌与杀菌的原理对比微生物研究中心上海豪源生物制品有限公司中科院上海生命科学研究院聚科生物园一、名词解释1、抗菌剂——能够在一定时间内，使某些微生物（细菌、真菌、酵母菌、藻类及病毒等）的生长或繁殖保持在必要水平以下的化学物质。抗菌剂是一类具有抑菌和杀菌性能的新型助剂2、杀菌——指杀灭物体中的致病菌，物体中还含有芽孢、嗜热菌等非致病菌。3、抑菌——采用生物或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。一、名词解释4、中和剂——在微生物杀灭试验中，用以消除试验微生物与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留的消毒剂，使其失去对微生物抑制和杀灭作用的试剂。5、PBS——磷酸盐缓冲液，0.03mol/L,pH=7.2。6、MIC——最小抑菌浓度。一、名词解释7、cfu——在活菌营养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量。一、名词解释8、试验菌金黄色葡萄球菌（ATCC6538）细菌繁殖体中化脓性代表。一、名词解释大肠杆菌（8099或ATCC259922）细菌繁殖体中肠道菌的代表。一、名词解释白色念珠菌（ATCC10231）空气中细菌的代表。一、名词解释铜绿假单胞菌（ATCC15442）医院感染中最常分离的细菌繁殖体的代表。二、杀菌率试验1、制备试验菌悬液浓度为：用100μl滴于对照片上，回收菌落数为1×104～1×109cfu/片。2、制备染菌样片取上述菌悬液，分别在每个被试样片和对照样片上滴加100μl，作用2min。二、杀菌率试验3、操作步骤分别将样片投入含5ml相应中和剂的试管内，充分混匀，，作适当稀释，取其中2-3个稀释度，，分别吸取0.5ml，只要两个平皿中，用40-50℃的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母菌)15ml作倾注，转动平皿，使其充分混匀，琼脂凝固后翻转平板，倒置培养。4、培养时间、温度细菌：35℃±2℃，48小时酵母菌：37℃±2℃，72小时二、杀菌率试验5、计算公式式中：X——杀菌率，%A——对照样片平均菌落数B——被试样片平均菌落数6、评价标准杀菌率≥90%，产品有杀菌作用。。X=ABAX100%_三、抑菌率试验1、制备试验菌悬液浓度为：用100μl滴于对照片上，回收菌落数为1×104～1×109cfu/片。2、制备染菌样片取上述菌悬液，分别在每个被试样片和对照样片上滴加100μl，作用20min。三、抑菌率试验3、操作步骤分别将样片投入含5mlPBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，取其中2-3个稀释度，，分别吸取0.5ml，只要两个平皿中，用40-50℃的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母菌)15ml作倾注，转动平皿，使其充分混匀，琼脂凝固后翻转平板，倒置培养。4、培养时间、温度细菌：35℃±2℃，48小时酵母菌：37℃±2℃，72小时三、抑菌率试验5、计算公式式中：X——抑菌率，%A——对照样片平均菌落数B——被试样片平均菌落数6、评价标准抑菌率≥50%-90%，产品有抑菌作用。抑菌率≥90%，产品有较强抑菌作用。X=ABAX100%_四、杀菌性能与抑菌性能的不同点1、含义不同杀菌抑菌消毒剂对微生物的杀灭能力。生物制剂抑制妨碍细菌生长繁殖及活性的能力。四、杀菌性能与抑菌性能的不同点2、作用时间不同杀菌抑菌2min20min杀菌的作用时间可为2min、5min、10min、20min，相同条件下，作用时间越短，杀菌率越低，所以选择最短的作用时间来检测杀菌性能更具有代表性。抑菌的作用时间可为2min、5min、10min、20min，相同条件下，作用时间越长，抑菌率越低，所以选择最长的作用时间来检测抑菌性能更具有代表性。四、杀菌性能与抑菌性能的不同点3、残留消毒剂的去除方法不同杀菌抑菌中和剂法（化学中合法）稀释法（酸碱平衡法）指在消毒剂与微生物作用到达规定时间的终点时，取样加于适宜种类和浓度的中和剂中，将残留消毒剂迅速中和，使其不再持续抑制或杀灭微生物的方法。将经消毒剂作用过的微生物样本，用稀释液（PBS）稀释，降低残留消毒剂浓度，以消除对微生物的抑制作用。四、杀菌性能与抑菌性能的不同点4、评价标准杀菌抑菌杀菌率≥90％，产品有杀菌作用。抑菌率≥50％～90％，产品有抑菌作用，抑菌率≥90％，产品有较强的抑菌作用。五、抗（抑）菌试验1、目的测定抗（抑）菌产品对细菌和真菌的抗（抑）菌作用。常使用的方法有抑菌环试验、最小抑制浓度测定试验等等。五、抗（抑）菌试验2、抑菌环试验1）原理利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，以显示其抑菌作用。五、抗（抑）菌试验2）操作程序（1）制备抑菌片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液的直径为5mm,厚不超过4mm圆片。（2）制备阴性对照片不含抑菌成分的与实验组大小相同的样片。（3）接种试验菌蘸取浓度为5×105～5×10-9cfu/ml试验菌悬液，在营养琼脂培养基平板均匀涂抹。（4）抑菌样片和对照片贴放（5）培养温度：37℃±2℃，培养时间：16～18小时五、抗（抑）菌试验3）评价（1）抑菌作用的判断抑菌环直径大于7mm者，判为有抑菌作用。抑菌环直径小于或等于7mm者，判为无抑菌作用。（2）3次重复试验均有抑菌作用结果者，判为合格。（3）阴性对照组应无抑菌环产生。否则试验无效。五、抗（抑）菌试验3、最小抑菌浓度（MIC）1)原理采用琼脂稀释法将不同浓度的抑菌剂混合溶解在琼脂培养基中，然后点种细菌，通过细菌的生长与否，确定抗（抑）菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）五、抗（抑）菌试验2）操作程序（1）配制抗（抑）菌溶液（2）配制双倍浓度培养基（3）配制含抗（抑）菌液培养基（4）取1μl～2μl（含菌量约为107cfu/ml）菌悬液点种于含抗（抑）菌液培养基的平皿（5）以同样方法接种不含抗（抑）菌成分的琼脂平板，作为阳性对照。（6）培养温度：35℃±2℃，培养时间：18～24小时五、抗（抑）菌试验3）评价菌落生长被完全抑制的最低抗（抑）菌液浓度为该样品对受试菌的MIC。单一菌落生长可忽略不计。谢谢