实验六-猪瘟的诊断

1实验六、猪瘟的诊断1、实验目的：掌握猪瘟的现场和实验室诊断方法。2、实验材料：人工攻毒猪，剪刀、镊子等，兔子，待检血清，阳性和阴性血清，稀释液：0.5%石炭酸生理盐水。3、实验步骤。⑴临床诊断详细询问和调查发病猪群的发病情况和有关的其他情况，包括发病猪头数、发病经过、可能的原因或传染源、主要临诊症状、治疗措施及效果、病程和死亡情况、发病猪的来源及预防接种陶时间、发病猪群附近其他猪群的情况等；详细检查病猪的临诊症状，包括步态及精神状态，大便形状和质地及是否带血或粘液，眼结膜和口腔粘膜是否有出血变化，体表可触摸淋巴结（鼠蹊淋巴结）肿大情况，体温变化情况等。写出病历。病猪急宰或死亡后，应进行剖检，全面检查各系统内脏器官的眼观病理变化，特别注意淋巴结、咽喉部、肾脏、膀胱、胆囊、心内外膜、肠道等脏器的出血性交化。写出剖检记录。从临诊症状、流行病学和病理变化等方面进行综合分析，注意有无其他疾病（如弓形虫病、猪丹毒、猪肺疫、猪副伤寒等）的可能性，作出初步诊断。⑵细菌学检查采取刚死不久的病猪或急宰猪的血液、淋巴结、脾脏等材料，接2种于血液琼脂和麦康琼凯脂平板上，培养24～48h，检查有无疑似的病原细菌。知有，需进一步鉴定和作动物接种试验。将检查结果记入病历或剖检记录内，并提出诊断意见。猪瘟诊断中细菌学检查的目的是为了确定发病猪（群）是否存在并发或继发⑶家兔接种试验选择体重1.5kg以上大小基本相等的清洁级健康家兔4只，分为2组；试验前3天测温，每天3次，间隔8h，体温应正常。采病猪淋巴结和脾脏等病料做成1:10悬液，取上清液加青霉素、链霉素各1000单位处理后，以每只5m1的剂量肌肉内接种试验兔。如用血液需加抗凝剂，每头接种2ml。对照组不接种。继续测温，每隔6h一次，连续3天。7天后用猪瘟兔化弱毒1:20～50的清液静脉注射试验兔和对照兔，每只1ml。每6h测温1次9连续3天。记录每只兔的体温变化，绘制体温曲线。根据试验组和对照组兔的热反应进行诊断。①如试验组接种病料后无热反应，后来接种猪瘟免化弱毒后也无热反应，而对照组兔接种猪瘟兔化弱毒有定型热反应，则诊断为猪瘟。②如试验组接种病料后有定型热反应，后来接种猪瘟兔化弱毒不发生热反应，而对照组接种猪瘟兔化弱毒发生定型热反应，则表明病料内含有猪瘟兔化弱毒。③如试验组接种病料后无热反应，后来接种猪瘟兔化弱毒后发生定型热反应，或接种病料后发生热反应，后来对接种猪瘟兔化弱毒又发生定型热反应，而对照组接种猪瘟兔化毒后发生定型热反应，则3不是猪瘟。⑷直接荧光抗体检查①取急性高温期病猪的扁桃体、淋巴结、脾或其他组织一小片，用滤纸吸去外面液体。②取洁净载玻片一块，稍为烘热，将组织小片的切面触压玻片，略加转动，作成压印片，置室温干燥，或将病理组织制成冰冻切片。③滴加冷丙酮数滴，置－20℃固定15～20min。④用磷酸盐缓冲液（PBS）洗，阴干。⑤滴加标记荧光抗体（中国兽药监察所），置37℃饱和湿度箱盒内作用30min。⑥用pH7.2的PBS漂洗3次，每次5～10min。⑦干后滴加甘油缓冲液，加盖玻片封闭，用荧光显微镜检查。⑧如细胞胞浆内有弥漫性、絮状或点状的亮黄绿色荧光，为猪瘟；如仅见暗绿或灰蓝色，则不是猪瘟。⑨试验设已知含猪瘟病毒材料压印片和不含猪瘟病毒材料压印片作为阳性和阴性对照。⑩标本染色和漂洗后，浸泡于5%吐温80PBS（pH7.2，0.01mol/L）中1h以上，可除去非特异染色，晾干后用0.1%伊文思蓝复染15～30min，检查判定同上。思考题：1、猪瘟的兔体交互免疫实验的原理是什么？2、直接荧光抗体实验的原理是什么？