自身免疫性疾病及其免疫检测

常见自身免疫性疾病的自身抗体检测自身抗体（autoantibody）是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体(谱)分类:脏器特异性自身抗体脏器非特异性自身抗体自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤一、自身抗体的特性•自身抗体•免疫球蛋白•补体•淋巴细胞•细胞因子自身免疫性疾病的主要实验检测1948年Haragraves等发现LE细胞现象1957年Holborow等应用IIF检测ANA1961年Beck等发现ANA不同荧光染色模型60–70年代IIF、ID、CIE应用新的自身抗体1979年Towbin等应用免疫印迹技术检测自身抗体80年代IB、RIP应用蛋白多肽水平认识自身抗原1987年DNA基因重组技术开始应用自身抗体研究近十年应用分子生物学技术自身抗体研究发展简史•抗核抗体（ANA）•抗可提取性核抗原抗体（ENA）•抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）•类风湿因子（RF）•抗角蛋白抗体（AKA）•抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）•抗心磷脂抗体（ACLA）常检测的自身抗体标志抗体相关疾病dsDNASLESmSLESSBSS着丝点抗体PSS（局限型）Scl-70抗体PSS（弥漫型）AKA、抗CCP抗体RAJo-1抗体PM/DM（进行性系统性硬皮病）高滴度RNP抗体MCTD肝肾微粒体抗体（LKM-1）Ⅱ型自身免疫性肝炎平滑肌抗体（SMA）Ⅰ型自身免疫性肝炎AMA（M2）PBC常见自身免疫性疾病的标志抗体间接免疫荧光法（IIF）ELISA免疫印迹法（Western-blot）酶免疫斑点法检测自身抗体常用的方法抗核抗体::以真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。二、抗核抗体的检测与应用抗核抗体谱1.以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗体等；2.以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体等；3.以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；4.以抗原的化学名称分类命名，如抗DNA、抗RNP、抗组蛋白抗体,抗核小体抗体等。抗核抗体谱的分类和命名间接免疫荧光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑点法ELISA免疫印迹法（Western-blot）抗核抗体检测方法间接免疫荧光法示意图HEp-2细胞肝组织切片荧光标记抗体病人血清（待检抗体）细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期均质型核糖体型肌蛋白型中心体型斑点型线粒体型波形纤维蛋白型纺缍体型核仁型高尔基体型细胞角蛋白型纺缍丝型着丝点型溶酶体型原肌球蛋白型中间体型周边型颗粒型纽带蛋白型PCNA型核点型(dots)IIF检测ANA荧光染色模型斑点型（nRNP/Sm）高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。斑点型（SSA/SSB）抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮（100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。均质型抗dsDNA抗体抗组蛋白抗体(histone)抗ssDNA抗体抗核小体抗体(nucleosome)周边型可见于胶原病、PBC、CAH等患者核点型（DOTS）见于SLE、SS、PBC、风湿病抗着丝点型PSS局限型标志抗体抗原纤维蛋白型仅见于5%～10%的PSS，男性高于女性抗RNA多聚酶Ⅰ型抗体仅见于硬皮病患者，阳性率为4%抗PM-Scl（PM-1）抗体见于重叠综合征（多发性肌炎PM/皮肌炎DM/弥漫性PSS）抗Scl-70型PSS弥漫型的标志抗体增殖细胞核抗原Ⅰ型（PCNA）SLE特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体抗线粒体抗体（AMA）SLE标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体抗Jo-1抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（PM）标志抗体偶见于SLE和SS抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎抗双链DNA抗体•抗dsDNA抗体与细胞核DNA（外围区）脱氧核糖磷酸框架结合。•抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。抗双链DNA抗体检测方法及应用•间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常规检测抗dsDNA抗体最常用的方法。•抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95%～100%，但其敏感性仅为30%～50%，因此抗dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断。检测方法及应用抗dsDNA抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。抗核小体抗体核小体（nucleosome）是真核生物细胞核染色质的基本单位。凋亡细胞是核小体的重要来源，当SLE患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低，导致核小体在患者体内大量存积，激活B细胞产生抗核小体抗体（Antinucleosomeantibody,AnuA）。检测及应用•AnuA的检测通常采用ELISA检测法。•AnuA具有同抗ds-DNA抗体相同的诊断特异性，可达到95%，在系统性硬化（SSc）病中可有20%～50%低浓度阳性率，其他自身免疫性疾病中该抗体均为阴性。•AnuA的表达与SLE病情活动分数相关。检测及应用抗ENA抗体谱:可提取核抗原抗体的总称临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括：抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白三、抗ENA抗体谱的检测与应用抗可提取性核抗原（ENA）抗体•双向免疫扩散（ID）•对流免疫电泳（CIE）•免疫印迹法（Western-blot）•ELISA•酶免疫斑点法ENA检测方法免疫印迹法SDS-PAGE电泳转移电泳酶免疫检测免疫印迹法抗可提取性核抗原（ENA）抗体抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%~30%）抗nRNP抗体：MCTD95%~100%（高滴度）抗SSA抗体：PSS60%~75%，其它CTD抗SSB抗体：PSS10%~40%，其它CTD抗Scl-70抗体：SSc25%~75%,标记性抗体抗Jo-1抗体：PM/DM25%，标记性抗体抗rRNP抗体：SLE特异性抗体（10%~30%）抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。四、与小血管炎相关的自身抗体检测与应用荧光染色型靶抗原胞浆型(cANCA)蛋白酶3（PR3）杀菌/通透性增高蛋白（BPI）核周型(pANCA)髓过氧化物酶（MPO）组织蛋白酶G（Cath-G）乳铁蛋白（LF）白细胞弹性蛋白酶（HLE）非典型型(aANCA)兼有两种特性ANCA荧光染色型与靶抗原周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)主要见于Wegener’s肉芽肿及微小多动脉炎ANCA临床应用髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系蛋白酶3（PR3）与Wegener’s肉芽肿（WG）密切相关。仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3可超过95%，活动期几乎100%阳性。组织蛋白酶G(Cath-G)白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白(LF)可见于SLE、IBD、PBC、PSC等RA早期诊断相关自身抗体抗角质层蛋白抗体（AKA）：1979年Young等报告靶抗原：filaggrin（40KD）抗核周因子（APF):1964年Nienhuis等报告靶抗原：profilaggrin（37-41KD）及其降解产物抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）：1993年Simon等报告靶抗原：filaggrin（40KD）抗Sa抗体：1994年Despres等报告靶抗原:50/55KD非酰基多肽，半抗原-瓜氨酸抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）：1998Schellekens五、与RA相关自身抗体的检测与应用类风湿因子（rheumatoidfactor,RF）为抗变性IgGFc的自身抗体，主要是IgM型致病机理：RF与体内变性IgG结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。1.胶乳颗粒凝集实验定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF2.速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE）定量、准确、快速，测定IgM-RF3.ELISA定量、准确，可测定不同类型的RF检测方法（1）RF在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。疾病阳性率（%）RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25临床应用（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。（3）IgG-RF与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关，常伴随IgM-RF同时出现，在正常人及非RA患者中很难检出。（4）IgA-RF与RA患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。AKA主要见于RA，阳性率36%~59%，特异性95%~99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。抗角蛋白抗体（AKA）•常用方法：ELISA•临床意义：RA特异性自身抗体，敏感性65%~85%，特异性为94%~98%；高浓度抗CCP抗体是RA发生关节侵蚀的危险因子之一，定量检测有助于判断预后。抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）自身免疫性肝病是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病，其诊断和治疗完全不同于一般的慢性病毒性肝炎自身免疫性肝炎(AIH)原发性胆汁性肝硬化(PBC)原发性硬化性胆管炎(PSC)重叠综合征六、与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用在多种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中，自身抗体在发病机制中起重要作用自身免疫性肝病具有相对特异性自身抗体谱自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别诊断具有重要意义自身免疫性肝病与自身抗体自身免疫性肝病及其自身抗体谱疾病类型相关自身抗体自身免疫性肝炎（AIH）Ⅰ型AIHANA/ASMAⅡ型AIHanti-LKM-1anti-LC-1Ⅲ型AIHanti-SLA(可溶性肝抗原)原发性胆汁性肝硬化（PBC）AMA(M2/M4/M8/M9)anti-gp210，sp100ACA原发性硬化性胆管炎（PSC）pANCA自身免疫性肝病及其自身抗体谱•抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)•抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）•抗促甲状腺素受体抗体（TSH-RAb）七、与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用重症肌无力（MG）自身抗体谱：抗骨胳肌抗体（ASA）、抗乙酰胆碱受体(AchR)抗体多发性硬化（MS）自身抗体谱：抗髓鞘碱性蛋白（MBP）抗体、抗脑苷脂抗体、抗神经结苷脂抗体急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病（格林―巴利综合征）自身抗体谱：抗髓鞘糖脂抗体、抗髓鞘硫脂抗体八、与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用大多数自身免疫患者血清中可测到高效价的自身抗体，特别是有些自身抗体的检测已纳入某些自身免疫性疾病的诊断标准中，自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标。第五节自身抗体检测的临床应用•筛查性试验与确诊性试验项目的合理组合•选择相关的自身抗体检测项目•切忌盲目的全面检测•实验中应同步设置阳性和阴性对照一、自身抗体检测的一般原则95%～99%可排除SLE（－）SLE治疗缓解病情特重（大量IC沉积消耗抗体）（＋）低滴度常见于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作为诊断SLE的依据ENA抗体谱检测（－）不能排除抗dsDNA、Sm、rib抗体（＋）可帮助诊断ANA初筛二、实验室方法的选择及结果的确认自