开题报告---马丽娟

研究生学位论文开题报告学号：姓名：马丽娟导师姓名：|黄永清研究方向：.口腔颌面外科论文题目：MAFB基因多态性在宁夏人群中与非综合征型唇腭裂的相关性研究院（系）：口腔医学院入学时间：2011年9月5日开题时间：2012年12月18日{二○一二年十二月十八日一、立论依据（包括研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处）1、选题背景唇腭裂是人类最常见的一种出生缺陷,其发病率在1/500～1/1000之间,不同种族和地域发病率有很大差异[1],其中美洲印第安人与亚洲人的发病率最高，约1/500[2]，高加索人居中，约1/1000，非洲人最低，约1/2500，我国发病率为1000[3],在我国出生缺陷的发生率中占第一位或第二位,在宁夏2007年婴儿出生缺陷的发生率中占第一位[4]，发病率为1000。唇腭裂患者不仅存在外形上的缺陷，其饮食、语言等功能也伴有不同程度的障碍，常常造成性格缺陷，影响正常的社会交往，降低生活质量，又因其治疗程序复杂、周期漫长、花费大，给家庭和社会带来沉重负担，严重影响了出生人口素质，因此寻找该病的病因,进而找到有效的预防手段显得非常重要。根据全身是否伴发其他畸形,唇腭裂可以分为非综合征型唇裂伴或不伴腭裂(non-syndromiccleftlipwithorwithoutcleftpalate,NSCL/P)和综合征型唇腭裂。大约有20%的唇腭裂与已经发现的400多种综合征有关,这些综合征基本符合孟德尔单基因病遗传模式。大量研究表明NSCL/P病因是多因素的，可能由某些遗传易感因子和环境危险因子暴露所引起[5-7]。Ardinger等[8]报道了第1个唇腭裂关联基因TGF-α，至今已有20余年。随着人类单倍型图谱的完成，单核苷酸多态性(sin2glenucleotidepolymorphism,SNP),即单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性,因其数量众多和易检测性,成为新的第三代遗传标记。SNPs被认为是最重要的人类基因组变异形式,人类基因组中至少存在1千万个SNPs，平均每300个核苷酸内就有一个SNP,是造成正常表型个体间差异的主要原因[9]。很多涉及NSCL/P遗传学病因的候选基因分子流行病学研究重复性很差，表明NSCL/P是一种具有复杂遗传异质性病因的疾病。所以，在相对单一遗传学背景的人群中去验证GWAS研究结果，对于鉴定该人群特有的NSCL/P易感基因十分必要,目前基因的筛选、定位以及研究分析方法仍然是NSCL/P病因学的研究难点和热点，。2.国内外研究现状人类对基因组变异的认识也在逐步深入。1986年,人类基因组的第一个完整的限制性片段长度多态(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)图谱绘制完成,这是人类的第一张分子遗传图谱,标志着人类疾病发生机制的遗传学研究进入了一个新的阶段。而后,微卫星位点(shorttandemrepeat,STR)代替了RFLP。此时,基于家系连锁分析的疾病遗传学机制研究占据了统治地位。1996年,Risch和Merikangas指出,通过对一般人群进行病例-对照研究,即关联分析,对捕获变异基因具有更高的效力，因而提出了构建人类基因所有变异图谱的全球计划,人类单倍型图谱计划得以启动目前各种遗传连锁和关联研究，包括全基因组关联分析（genomewideassociationstudy，GWAS）报道了越来越多的候选基因和染色体区域，如IRF6、FOXE1、BCL3、MYH9、SUMO1、MSX1和染色体1p22、8q24、10q25、17q22、20q12等[10-14]。2010年TerriHBeaty等[15]在多个人群（包括欧洲，亚洲和中国人群）的多中心合作的1965个核心家系样本的GWAS（IlluminaHumanHap550BeadChip）研究也证实了IRF6基因和区段与NSCL/P致病有很强相关性。同时还得出了MAFB和ABCA4两个基因与NSCL/P致病有很强相关性。MAFB基因又称为KRML基因，位于20q12，编码亮氨酸拉链转录因子，此因子不仅在红细胞系的生成调节过程中扮演者重要的作用，还作为引起巨噬细胞活化因子表达骨髓瘤细胞的癌基因[]。动物实验同样表明MAFB基因可能参与鼠的颅面外胚层发育。Beaty等[18]的原位杂交实验检测到MAFB基因的mRNA和蛋白质信号在孕～d胚鼠颚板上皮细胞强表达，推测其可能参与了颚板融合过程。假设某些个体存在由SNP介导的MAFB基因单倍不足，则可能导致颚板融合障碍，进而导致NSCL/P发生。GWAS扫描发现在MAFB整个基因内或其附近的237个SNP中有6个SNP（rs6072081，rs6065259，rs，rs，rs，rs6102085）达到了统计学意义（p5*）。rs在MAFB基因的下游区，外显子测序发现了一个错义突变H131Q,其影响了蛋白结构功能[15]Yuan等[19]在拉丁美洲人群重复源GWAS研究中也证实了另外2个与rs存在强连锁的位点——rs和rs，与NSCL/P存在阳性关联。2011年5月何运辅研究发现华南汉族人群中MAFBSNPsrs6072081、rs17820943和rs6102085以及IRF6SNPrs与NSCL/P的发病有显著关联。这些研究结果均表明MAFB基因是一个可靠的NSCL/P候选基因。：!我国的人口基数大，唇腭裂患者数量也多，这既是一个有利于研究的条件，也是一个需要解决的问题。随着现在微观领域技术的不断进步，NSCL/P的基因研究已经取得了一定的成果，目前的易感基因一个个被证实，并且新的易感基因也在不断被发现，所以在国内外许多机构、学者都致力于这方面的研究，由于唇腭裂病因的复杂性、遗传模式的不确定性、不同地区甚至不同表型NSCL/P的候选基因座差异性，使研究结果重复性差，出现较多分歧，有的甚至出现背离。这仍是一个亟待解决的问题本研究旨在了解中国宁夏地区回汉族人群中MAFB（）与NSCL/P的相关性，探讨在宁夏地区回汉族人群中NSCL/P发病的可能作用，同时也为宁夏地区人群基因数据库积累资料，不断完善和发展其在唇腭裂发病机制，为临床基因诊断提供理论依据，以及为唇腭裂的产前诊断和预防提供科学依据，对有唇腭裂病人的家庭提供有效遗传咨询，最终达到降低唇腭裂发生率的目的。参考文献[1].Harville,.,Wilcox,.,Lie,.,etal.,Epidemiologyofcleftpalatealoneandcleftpalatewithaccompanyingdefects.EurJEpidemiol,2007.22(6):9-95[2].Cooper,.,RatayMarazita.,Asianral-facialcleftbirthPalateCraniofacJ,(5):.[3]黄洪章.唇腭裂病因学研究的新进展.口腔颌面外科杂志,2007,17(3):201-204.[4]ZhouHou-DeLiXiao-LingLiGui-Yuan.ThereasearchdevelopmentofSinglenucleotidepolymorphism.ForeignMedSciPathophysialClinMed，2003，23(5):444~447[5]VieiraAR.Unravelinghumancleftlipandpalateresearch.JDentRes,}2008,87(2):119-125.[6]MurrayCJ.Gene/environmentcausesofcleftlipand/orpalate.ClinGenet,2002,61(4):248-256.[7]DixonMJ,MarazitaML,BeatyTH,etal.Cleftlipandpalate:understandinggeneticandenvironmentalinfluences.NatRevGenet,2011,12(3):167-178.（可续页）[8]ArdingerHH,BuetowKH,BellGI,etal.Associationofgeneticvariationofthetransforminggrowthfactor-alphagenewithcleftlipandpalate.AmJHumGenet,1989,45(3):348-353.[9].LanderES,LintonLM,BirrenB,etsequencingandanalysisofthehumangenome.Nature,2001,409(6822):860−921.-[10]ZuccheroTM,CooperME,MaherBS,etal.Interferonregulatoryfactor6(IRF6)genevariantsandtheriskofisolatedcleftliporpalate.NEnglJMed,2004,351(8):769-780.[11]BirnbaumS,LudwigKU,ReutterH,etal.Keysusceptibilitylocusfornonsyndromiccleftlipwithorwithoutcleftpalateonchromosome8q24.NatGenet,2009,41(4):473-477.[12]MangoldE,LudwigKU,BirnbaumS,etal.Genome-wideassociationstudyidentifiestwosusceptibilitylocifornonsyndromiccleftlipwithorwithoutcleftpalate.NatGenet,2010,42(1):24-26.[13]AlkurayaFS,SaadiI,LundJJ,etal.SUMO1haploinsufficiencyleadstocleftlipandpalate.Science,2006,313(5794):1751.[14]MangoldE,LudwigKU,NöthenMM.Breakthroughsinthegeneticsoforofacialclefting.TrendsMolMed,2011,17(12):725-733.[15]BeatyTH,MurrayJC,MarazitaML,etal.Agenome-wideassociationstudyofcleftlipwithandwithoutcleftpalateidentifiesriskvariantsnearMAFBandABCA4.NatGenet.2010,42(6):525–529.[16]GemelliC,MontanariM,TenediniE,ZanoccoMaraniT,VignudelliT,SienaM,ZiniR,SalatiS,TagliaficoE,ManfrediniR,GrandeA,FerrariS.VirallymediatedMafBtransductioninducesthemonocytecommitmentofhumanCD34þhematopoieticstem/progenitorcells.CellDeathDiffer2006.13:1686–.VanStralenE,vandeWeteringM,AgnelliL,NeriA,CleversHC,BastBJ.IdentificationofprimaryMAFBtargetgenesinmultiplemyeloma.ExpHematol2009.37:78–86.·[17]VanStralenE,vandeWeteringM,AgnelliL,NeriA,CleversHC,BastBJ.IdentificationofprimaryMAFBtargetgenesinmultiplemyeloma.ExpHematol2009.37:78–86.[18]Be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