搜索
流式细胞术实验目的掌握流式细胞仪的工作原理掌握用流式细胞仪测量细胞群体DNA含量分布的方法了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用实验原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。仪器、材料与试剂仪器：流式细胞仪、离心机。材料：Hela细胞样品、试管、离心管、封口膜、微量移液器、Tip头、Eppendorf管。试剂：70％乙醇（保存于4℃），RNase（-20℃保存），PI染液（避光保存于-20℃），PBS(pH7.4，保存于4℃)实验步骤样品细胞由老师于课前收集并置于70%(预冷)乙醇中4℃下固定过夜。2000rpm15min收集固定细胞，PBS洗2次。用100μLPBS重悬细胞并转至试管中轻轻吹打（防止细胞破碎）。加PI染液50µL和RNase约2µL室温放置15min。上机检测。样品测定并使用ModFitLT软件分析结果。实验结果与讨论:所测样品中各周期时相的百分比：G1期68.48%G2/M期16.63%S期14.89%G2：G1=1:1.77CV12.16提示结果可能不可靠或存在多倍体细胞。流式细胞术是一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。用以分析细胞大小、细胞周期、DNA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。这种技术具有以下特点1.测量速度快；2.可进行多参数测量；3.是一门综合性的高科技方法（FCM综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；4.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。本次实验是通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，分析Hela细胞样本中各细胞周期时相所占的百分比。实验中所使用的Hela细胞应为对数生长期的细胞，因为这一期的细胞分裂活动最为旺盛，各个周期的细胞均有存在。