实验室安全与防护

医学生化与分子生物学实验室安全与防护山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所田克立实验室安全涉及面广•水•电•气•火•试剂•放射性•病原微生物•仪器使用•废液（物）处置化学试剂多：氯仿、甲醇、乙醇、酸碱等生物样品多：细胞、细菌、蛋白、抗体、核酸、临床标本等仪器多：高压蒸气灭菌锅、电泳仪、PCR仪、离心机、紫外透射仪等特殊样品、特殊动物：标记探针、转基因动物、各种病理动物模型医学分子生物学实验室的特点化学试剂、有毒药品导致的伤害生物样品(细菌等)及废液所致的感染、污染辐射、紫外线损伤意外事故放射性同位素污染生物实验室常发生的意外实验室安全事故案例1995年9月香港科技大学化学系大四梁同学因吸入别的同学泼洒的酸酐而不治身亡。1997年香港科技大学物理系访问学者因未按规定使用通风橱造成他人肺部伤害而永不被香港各大学录用。事故原因天灾占2％人为因素占98%不安全行为不安全环境凡不知、不顾、不理、不能、粗心、迟钝、疲劳、情绪等各种内在外在的行为工作场所中，工作环境、设备设施对人所产生的危险因素保障个人及他人的人身安全保障实验室的安全：防火、防水等避免实验室内环境污染：化学、生物污染避免实验室外环境污染：河流、土壤实验室安全防护目的Outline医学分子生物学实验室的安全及防护一般规则常用化学试剂正确使用常用生物材料正确使用常用仪器的正确使用意外事故及处理熟悉实验室周围的安全出口熟悉灭火器、灭火砂等的存放位置及使用实验室应备有急救药箱或简单的急救物品，如创可贴、碘酒等实验室内禁止吸烟！一般规则实验时：穿隔离衣，戴消毒手套，不穿凉鞋、不露趾鞋实验后：整理台面、处理废弃物品(不得随意丢弃)一般规则常用化学物质－正确使用与安全防护化学试剂危险性标志易燃性乙醇氧化性浓硫酸腐蚀性强酸碱污染环境生物废液致癌性CCl4爆炸性有毒氰化物生物实验室常用化学试剂易挥发性试剂：氯仿甲醇乙醇异丙醇等腐蚀性、氧化性试剂：酸性洗液浓硫酸易被氧化试剂：苯酚丙烯酰胺储存液有毒溶液：溴化乙啶染液丙烯酰胺溶液氯仿特点：比重大、挥发性极强脂溶性强、易透皮吸收、肝毒性强使用与防护：带手套取液，不要重复使用枪头取液后立即旋紧瓶盖皮肤接触后立即大量水冲洗使用与防护：不可倒入下水道，以免集聚引起火灾远离火源、热源保持室内良好通风实验室里不宜大量贮存特点：易挥发，易燃，与空气混合达一定比例易爆炸乙醇使用与防护：配制时，大量放热，使用耐热容器浓酸贴壁分次加入重铬酸钾水溶液使用时，戴长臂耐酸乳胶手套特点：浓硫酸与重铬酸钾溶液强氧化性酸性洗液使用与防护：废液不能直接倒入水槽！方法：先大量用水稀释，然后倒入厕所等下水道或水槽，再用大量自来水冲洗下水道或水槽酸性洗液特点：核酸嵌入剂，用于核酸电泳的染色强致突变剂，工作浓度0.5μg/ml使用与防护：务必戴手套操作！使用后的废液、含EB的胶必须处理后丢弃溴化乙啶(EthidiumBromide,EB)方法多，各有利弊漂白剂处理法（有争论，但操作方便）－加等量的漂白剂(bleach)，放置2－3天－用NaOH溶液调节pH至4－9后，倒入下水道中，大量水冲洗活性炭处理法：－每100ml溶液加入100mg粉末活性炭－室温搅拌1h后过滤，弃滤液、滤纸及活性炭溴化乙啶(EB)废液处理特点：易发生脱氨反应，避光、低温、短期保存强神经毒性，可透皮吸收使用与防护：操作时务必戴手套，可戴口罩丙烯酰胺聚合后，毒性降低切勿将未聚合的丙烯酰胺倒入下水道丙烯酰胺特点：琼脂糖凝胶、PAGE胶不易降解使用与防护：戴手套操作！不得丢弃在下水道!与生活垃圾分类处理含EB的凝胶需处理后方可丢弃含菌落的琼脂糖胶可煮沸或微波炉处理后丢弃凝胶常用生物样品－正确使用与安全防护医学分子生物学实验室常用生物材料细菌：DH5α，JM109，BL21（DE3）等细胞株：各种肿瘤细胞株，永生化细胞株等临床组织标本，病理组织标本，血样等裸鼠、各种病理动物模型等构建的质粒等《医疗废物管理条例》2003年6月16日按类别、使用专用包装袋收集医疗废物《中华人民共和国传染病防治法》（04年8月28日修订版）实验室生物安全国家标准GB19489—2004《实验室生物安全通用要求》－2004年5月国家质监总局和标准化管理委员会颁布，04年10月1日正式实施－我国第一部实验室生物安全国家标准－适用于医学实验室、各类生物实验室实验室生物安全国家标准Biohazardwarningsign基因重组实验室安全防护标识生物实验室危害警告标识生物材料危害警告标识Physicalprotection（物理屏障水平)分：P1-P4Biosafetylevel(生物安全防护水平)分：BSL1-4如：P2实验室BSL-3实验室一级防护:--安全设备、个体防护装置(生物安全柜；防护衣、帽等)二级防护：--实验室的特殊设计要求规范操作：--严格管理制度--标准化的操作程序生物安全防护生物样品的正确使用培养基：细菌、细胞的培养基营养丰富使用过的培养基可能包含质粒、细菌等弃培养基前，务必经漂白剂处理、煮沸等方法处理后方可倒入下水道!!污染水源的重要途径生物样品的正确使用构建的表达载体、质粒：试验中的任何载体绝对不得泄漏在实验室外!!如含毒素、抗药性基因的表达载体赠送任何质粒，必须得到导师或管理部门授权防护：戴手套操作！生物样品的正确使用其它废弃物：用过的枪头、注射器、细胞培养板等需按医疗废物分类收集处理，不应按生活垃圾处理病理标本等应焚烧处理生物样品的正确使用动物尸体的处理：专门的容器，冷藏设施暂时储放动物尸体无毒性动物尸体:在指定地点深埋或焚化感染性动物尸体:经“防漏”包装后，经蒸气高压灭菌，再进行深埋或焚化含放射性物质的动物尸体，经特殊包装后，烘箱60－70℃将尸体烘干，再按废弃放射性材料处理需置于EP管或有盖的容器内，防止样品流出应有明显的标记（如：感染性材料…)样本应低温运输（4℃或以下）如有破损、泄漏，需按规定处理生物样品的转运使用实验室微波炉、冰箱烹调或储存食物不用适当的防护设备，如隔离衣、手套等不按实验规程操作，或意外受伤皮肤或黏膜、实验室台面、门把、手机、电脑键盘等污染、身体中毒等生物样品常发生的意外实例根据对全球5000多个生物实验室累计3921例相关感染的调查统计，导致感染的原因：80%因工作人员操作失误引起20%因设备故障引起实例美国NIH发生Qfever(Coxiellaburnetii)实验室感染153人发病，其中1人死亡1998年，国内某高校操作不规范：学生未戴手套进行大鼠试验并被大鼠咬伤，导致9人感染流行性出血热实例台湾实验人员感染非典病毒事故2003年12月：实验人员在P4实验室因清理病毒废弃物操作疏忽而感染中国实验人员感染非典病毒事故2004年4月：中国某病毒所实验人员违规将未完全灭活的sars病毒从P3实验室带出至普通实验室，导致腹泻病毒室两名研究生感染sars病毒储存：专门放置生物废弃物的容器灭活：所有生物废弃物必须灭活后丢弃，如高压灭活等运输：出实验室经灭活的弃物必须使用专用密闭防漏的容器运输废物处理高压蒸气灭菌（autoclave）-方法：121℃，15psi，15－40min-适合所有污染物的灭菌紫外线照射灭菌：空气、物体表面杀菌-无菌室或污染区域照射，至少30min灭菌与消毒70～75%Ethanol－皮肤、实验台面的污染次氯酸钠(漂白剂，1-20%稀释液)－台面污染，玻璃器皿等灭菌灭菌与消毒实验室入口：生物危险标志、生物安全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求等禁止非工作人员进入实验室使用专用的防护性外衣－不得穿防护衣到非实验室区域－防护衣在指定区域洗涤，不得带回家洗涤管理制度常用仪器与玻璃器皿－正确使用与安全防护低速、高速、超速离心机紫外透射反射分析仪、分光光度计电泳相关设备、各种PCR仪、酶标仪凝胶成像仪、流式细胞仪、化学发光仪高压蒸汽灭菌器（锅）电热干燥箱（烘箱）、微波炉等常用仪器设备仪器使用安全•仪器使用者必须认真地阅读操作规程，严格按照“仪器操作规程”进行操作。•遇到仪器发生故障，立即向管理人员报告，不得擅自处理。•按操作规程使用水、电。发现安全隐患应立即报告，及时处理。离开实验室时应检查仪器、水、电、门、窗是否关好，夏季应检查空调是否关闭。•在进行加热、加压、蒸馏等操作时，操作人员不得随意离开现场,若因故须暂时离开，必须委托他人照看或关闭电源。离心机：离心机需放置于平稳、牢固的地方远离酸碱等腐蚀性试剂样品离心前必须进行平衡离心样品对称放置离心前务必检查转子是否挂好低温离心机使用后，切勿关盖长期放置！常用仪器的正确使用常用仪器的正确使用防雾气外漏气溶胶：悬浮于气体介质中的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系微生物气溶胶，粉尘气溶胶粒径:0.001—100um均浆机、超声波破碎仪等易产生气溶胶蒸气高压灭菌锅：使用前检查是否有蒸馏水（经常更换,预防长菌、水中污染物堵塞，烧坏加热板）以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，旋紧盖子，务必注意放气阀让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀,开盖隔离操作！常用仪器的正确使用紫外投射仪：检查经EB染色后的凝胶必需戴手套操作，尽量避免仪器外部污染如有条件，可戴防护眼睛不可长时间开紫外灯常用仪器的正确使用•如需面对UV光时，请戴安全眼镜(普通玻璃镜片亦可)。•无菌室请在入口处标示UV光是否在使用中。请先确定UV光关闭后才进入无菌室烘箱：不可烘烤可燃物质：如滤纸、棉花等烘箱内器皿不能过多：保证箱内的空气对流使温控器正常工作有异味或冒烟时：－不能立即打开烘箱门，避免涌入空气助燃－迅速切断电源，灭火器备用常用仪器的正确使用冰箱：常用仪器的正确使用不可存放食品、饮料不可存放含大量有机溶剂的样品摇菌、筛选克隆后的器皿、培养瓶浸泡于漂白水灭菌后→清洗→高压灭菌污染过病毒、传染病患者的血样的容器高压灭菌（或其他方法）→清洗污染放射性同位素等物质的容器特殊试剂处理后→清洗玻璃器皿的洗涤与使用量筒－不能贮存浓酸、浓碱－不能加热血清瓶、试剂瓶－可高压灭菌、烘干(松旋瓶盖)抽滤瓶－非耐热容器，不可直火加热玻璃器皿的正确使用玻璃器皿的正确使用烧杯、三角烧瓶：耐热容器，可用于微波炉加热直火加热时应垫石棉网加热时内容物不得超过容积的2/3意外事件的防范与处理意外事件处理－发生可控制的火灾时1、使用附近的灭火器：a、揭开环状保险栓。b、挤压杠杆。c、将喷嘴对火苗底部。2、若是衣服着火，用灭火毯掩盖它，以达到窒息火苗的目的。3、若是电线走火，应赶快关闭电源。4、迅速向实验室负责人报告。意外事件处理－发生无法控制的火灾时1、迅速将人员、物资撤离火灾现场。2、离开实验室时，将所有电源关掉。3、立即拨打消防电话。乙醇、甲醇小范围着火：－可用湿布、灭火砂覆盖，隔绝空气灭火，也可用水灭火大多数有机溶剂着火：－不能用水灭火！比重小、不溶于水－可用灭火砂、灭火器仪器、电线着火：－立即切断电源，用沙或四氯化碳灭火器灭火－不能用水、泡沫灭火器熄灭燃烧的电线防火与灭火灼伤溶剂：液氮、酸性洗液、强碱、苯酚等带手套、眼罩操作！苯酚等酸性试剂灼伤大量的水清洗、肥皂水清洗，忌用酒精碱灼伤：大量水冲洗后，用2%-5%醋酸洗后，用水冲洗，涂凡士林灼伤与处理一切有毒试剂瓶必须有标签注明！取用试剂必须戴口罩、手套必须在通风橱中进行操作，头部在通风橱外面中毒时必须急救中毒者中毒防护与处理保护自己、关心他人不熬夜、过度疲劳工作，合理安排时间不带情绪工作，如烦躁、生气等实验过程中不擅自脱离实验岗位，特别是夜间、节假日。如有急事，必须有人代管实验关心他人、有责任心，看到违章操作者一定及时制止遵章守纪、规范操作遵守实验室管理制度遵守安全防范措施，如隔离衣、手套、