酵母DNA提取方法方法一:石英砂法1、5000rpm×5min收集过夜培养的菌体(5ml左右),于200μL裂解液(50mmol/LTris-HClpH8.0,180mmol/LEDTApH8.0,1%SDS,现配)中,加入3/10总体积石英砂在涡流混合器上振荡13min,每隔4min将离心管取出用力甩几下,然后65℃水浴10min。2、加入200μL5mol/LKAc,冰浴8min;3、12000rpm×5min转移上清至新的离心管中;4、加入3mol/LNaAc35μl,加入异丙醇200μL混匀后冰浴8min,12000rpm×5min收集沉淀;5、200μLTE溶解,加入RNase10μL,65℃水浴10min;6、加入200μL氯仿-异戊醇(24:1),抽提;7、温柔地取上清150μL,加入20μL3mol/LNaAc及375μL无水乙醇,混匀后12000rpm×8min收集DNA;8、70%乙醇洗涤沉淀,吹干后TE溶解,-20℃保藏。方法二:蜗牛酶法1.接种于5ml的YEPD培养基中在25℃-28℃振荡培养12-16h。2.3500rpm离心5min沉淀细胞,用1ml的无菌水洗涤一次,再加0.5mlsolutionⅠ(1M山梨醇,0.1MEDTA,pH=7.5)重悬。3.转移细胞至1.5ml的离心管中,加入0.1蜗牛酶(30mg/ml)溶液,37℃保温30-60min,以获得原生质体。4.最大转速离心1min以沉淀细胞,用500ulsolutionⅡ(50mMTris-HCl,20mMEDTA,pH=7.4)溶液悬浮,然后加入50μl10%SDS,混合65℃保温30min。5.加入200μl5M醋酸钾,放于冰上30min。6.最大转速离心15min,转移上清液至新的离心管中,用等体积的异丙醇沉淀DNA。7.室温下放置5min,离心10min,用70%的乙醇洗涤一次,真空干燥,用50ulpH=7.4TE溶液溶解。方法三:蜗牛酶过夜处理法将酵母接种到YPD培养基中30℃过夜培养16~18h,离心收集1.5mL,用灭菌水洗涤两次;加入600μL裂解液,35μL蜗牛酶,37℃消化过夜;加入饱和酚450μL,氯仿-异戊醇(体积比24:1)150μL,轻轻颠倒混匀使溶液成为乳状,并保持10min,3000r/min离心10min;吸取上清液,用氯仿-异戊醇(体积比24:1)450μL再抽提1次,10000r/min离心5min;取上清加入异丙醇800μL,-20℃静置30min;10000r/min离心5min,沉淀物用70%乙醇洗两次,自然干燥后溶于30μLTE缓冲液;加入0.5μL10mg/mL的RNaseA,37℃温浴30min,自然冷却后保存。方法四:蜗牛酶反复冻融法收集过夜培养16~18h的菌体1.5mL,加入500μLPBS溶液重悬菌体,12000r/min离心2min,用PBS重洗一次;将沉淀溶于35μL的蜗牛酶溶液中,加入65μL的PBS,45℃作用2h,加100μL裂解液,-20℃冷冻,然后室温振荡溶解,反复3次;向悬浮液中加入150μL5mol/LKAc(pH8.9)轻轻混匀,然后10000r/min离心5min;取上清液,加入两倍体积的无水乙醇,轻轻混匀,室温放置5min;12000r/min离心10min,将沉淀溶解在100μLTE中;加入等体积的酚-氯仿-异戊醇(体积比25:24:1),轻柔颠倒混匀,12000r/min离心5min,重复抽提1次;加1/10体积的3mol/L醋酸钠(pH5.2),2.5倍体积的无水乙醇,-20℃放置30min;10000r/min离心5min,弃上清液,用70%乙醇溶液洗涤沉淀两次,室温干燥后用20μLTE溶解;加入0.5μL10mg/mL的RNaseA,37℃温浴30min,自然冷却后保存。方法五:溶解在100μLTE中;加入等体积的酚-氯仿-异戊醇(体积比25:24:1),轻柔颠倒混匀,12000r/min离心5min,重复抽提1次;加1/10体积的3mol/L醋酸钠(pH5.2),2.5倍体积的无水乙醇,-20℃放置30min;10000r/min离心5min,弃上清液,用70%乙醇溶液洗涤沉淀两次,室温干燥后用20μLTE溶解;加入0.5μL10mg/mL的RNaseA,37℃温浴30min,自然冷却后保存。方法六:1、配一个破菌缓冲液:TritonX-1002%(v/v)SDS1%(w/v)NaCl100mMTris-HCl(pH8.0)10mM2、把酵母细胞离心收集,加200ul的石英砂或玻璃珠,加入200μl的破菌液再加200μl的酚氯仿,涡旋一分钟,放在冰上一分钟,一共反复4次3、加入500μl的ddH2O,涡旋,离心,抽上清和等体积的酚氯仿混合4、涡旋,离心,抽上清和等体积的酚氯仿混合,重复4直到离心后两层之间没有蛋白出现5、抽上清加1ml的无水乙醇,放在-20度30min6、离心,抽上清,再用70%乙醇洗一次,真空干燥,用TE或ddH20溶解方法七:接种酵母到2.5ml酵母试管培养基中(YPD培养基),30℃,培养16~18h;取1.5ml酵母培养液,室温下,1500×g离心5~10min收集菌体;菌体用灭菌水洗1次,1500×g离心5min;菌体用200μlSCED(1mol/L山梨醇、10mmol/L柠檬酸钠、10mmol/LEDTA、10mmol/LDTT二硫苏糖醇)溶液重悬,加入30μl10mg/ml溶菌酶(Lysozyme)37℃温浴1h;加入100μl2%SDS混匀,-20℃冰冻,然后室温震荡溶解,反复3次;向悬浮液中加入150μl5mol/LKAc(pH8.9)轻轻混匀,然后10000r/min离心5min;将上清转移到一新的1.5ml离心管中,加入2倍体积的乙醇,轻轻混匀,室温放置5min后12000r/min离心10min;除去上清,将沉淀溶解在300μlTE(10mmol/LTris-HCl,pH7.4,1mmol/LEDTA,pH8.0)中,加入6μlRNase(10mg/ml),37℃温浴30min;加入饱和酚和氯仿各150μl充分混匀,然后10000r/min离心5min;转移上清到新的1.5ml离心管中,加入1/2体积的7.5mol/LNH4Ac(pH7.5)和等体积的异丙醇,-20℃放置20min后12000r/min离心10min;除去上清,加入300μl70%乙醇漂洗沉淀一次,10000r/min离心5min;风干除去乙醇,用20μlTE溶解酵母DNA。