葡萄球菌的鉴定

实验七葡萄球菌鉴定检验系微生物教研室（一）葡萄球菌检验程序脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐物直接涂片染色增菌培养分离培养（血平板）分离培养（高盐甘露醇平板）取可疑菌落鉴定试验药敏试验涂片染色触媒血浆凝固酶甘露醇发酵耐热核酸酶其他鉴定试验报告初报（二）目的要求掌握：葡萄球菌属的菌落形态、菌体特点、染色性和基本生化反应及分离培养和鉴定方法；MRS和D试验的方法和结果判定熟悉：各生化反应原理及和MRS、D试验方法注意事项（三）实验器材菌种：金葡菌（临床菌株，ATCC25923,ATCC29213）表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、MRSAD-试验阴性、阳性葡萄球菌培养基：血琼脂平板，MH琼脂，甘露醇发酵管试剂：生理盐水，3%H2O2,EDTA抗凝兔血浆，革兰染液，新生霉素纸片、头孢西丁、红霉素、克林霉素纸片其他：酒精灯，接种环，接种针，玻片，显微镜，孵箱等（四）步骤方法1.细菌菌落特征观察：大小形态光泽表面边缘透明度颜色溶血金葡表葡腐生金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌2.细菌革兰染色：G+C,d0.5-1.5um,散在或不规则葡萄状初染1min涂片生理盐水接种环结晶紫碘液95%乙醇复红自然干燥媒染1min脱色30s复染30s干燥镜检固定干燥镜检3.生化反应鉴定（1）触酶试验【原理】H2O2H2O+O2【操作】取洁净玻片一张，滴加3％H202一滴，以接种环分别取待检细菌培养物少许，在H202中磨匀，立即观察结果【结果】阳性为半分种内产生大量气泡。葡萄球菌为阳性，链球菌为阴性。【意义】触酶试验可区分葡萄球菌和链球菌。过氧化氢酶（2）血浆凝固酶试验【原理】致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，附于细胞表面生成凝块。【结果】金葡为阳性，表皮、腐生为阴性【意义】血浆凝固酶试验可区分致病性和非致病性葡萄球菌【操作】取兔血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，用接种环挑取细菌，混合后观察。玻片法【操作】试管法【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类，能发酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经35℃孵育18-24h观察结果。【结果】金葡为阳性，表皮、腐生为阴性血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性和非致病性葡萄球菌（3）甘露醇发酵试验：金葡表葡腐生血浆凝固酶甘露醇发酵（4）新生霉素敏感试验血平板菌悬液涂布5ug/L新生霉素纸片35℃孵育16~18hS:抑菌圈直径16mm，R:≤16mm结果ATCC25923表葡腐生SRStaphylococcusaures（+）表皮葡萄球菌（S）腐生葡萄球菌(R)阳性结果（S）新生霉素敏感试验（5）MRS检测（6）葡萄球菌诱导性克林霉素耐药试验思考题：1.触酶试验注意事项？2.头孢西丁纸片法检测MRS注意事项，结果判定？3.D-试验注意事项，结果判定？