时间分辨荧光免疫法与电化学发光法检测结直肠肿瘤标志CEA的

张青云,北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院检验科北京市肿瘤防治研究所免疫研究室北京市100036孙丽,锦州医学院生化教研室辽宁省锦州市121001张书耕,王琼,北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院检验科北京市100036通讯作者:张青云,100036,北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院检验科,北京市肿瘤防治研究所免疫研究室[e-mail]电话:[phone]收稿日期:2005-09-21接受日期:2005-11-12Comparisonbetweentime-resolvedfluorescenceimmunoassayandelectro-chemiluminescenceimmunoassayfordetectionofserumcarcinoembryonicantigenincolorectalcarcinomaQing-YunZhang,LiSun,Shu-GengZhang,QiongWangQing-YunZhang,DepartmentofMedicalLaboratory,BeijingCancerHospital,theSchoolofOncology,PekjingUniversity;DepartmentofImmunology,BeijngInstituteforCancerResearch,Beijing100036,ChinaLiSun,DepartmentofBiochemistry,JinzhouMedicalCollege,Jin-zhou121001,LiaoningProvince,ChinaShu-GengZhang,QiongWang,DepartmentofMedicalLaboratory,BeijingCancerHospital,theSchoolofOncology,PekjingUniversity,Beijing100036,ChinaCorrespondenceto:Dr.Qing-YunZhang,DepartmentofMedicalLaboratory,BeijingCancerHospital,theSchoolofOncology,PekjingUniversity;DepartmentofImmunology,BeijngInstituteforCancerResearch,Beijing100036,[e-mail]:2005-09-21Accepted:2005-11-12AbstractAIM:Toevaluatetheeffectoftime-resolvedfluorescen-ceimmunoassay(TRFIA)andelectro-chemilumines-cenceimmunoassay(ECLIA)fordetectingtheserumlevelofcarcinoembryonicantigen(CEA)andtheirinflu-enceonthepositiverateofserumCEAinpatientswithcolorectalcarcinoma.METHODS:SerumCEAlevelsweredetectedwithbothTRFIAandECLIAin90samplesfrompatientswithcolorectalcarcinoma(n=30),non-colorectalcar-cinoma(n=30),andthehealthycontrols(n=30).ThedatawereanalyzedwithstatisticalsoftwareSPSS.RESULTS:ThelevelofCEAwassignificantlyhigherinthecolorectalcancergroup(TRFIA:44.12±95.27μg/L,ECLIA:35.96±71.83μg/L)thanthatintheheal-thycontrolgroup(TRFIA:1.04±0.55μg/L,ECLIA:0.71±0.48μg/L)(P0.01).ThesensitivitiesofTRFIAandELCIAwere60.0%and66.7%;thespecificitieswere98.3%and100%;theaccuracieswere85.6%and88.9%;thepositivepredictiverateswere94.7%and95.2%;andthenegativepredictiverateswere83.1%and85.7%,respectively.TheresultsofELCIAwerebetterthanthoseoftheTRFIA,andtheywerewellcorrelated(r=0.9738).Therewasnosignificantdifferencebetweenthetwomethods(P0.05).CONCLUSION:ThereisagoodcorrelationbetweenTRFIAandECLIAfordetectionoftheserumCEAlevel.Theyhavehighsensitivitiesandgoodstabilities,andaresuitableforclinicaldetectionofserumCEA.KeyWords:Time-resolvedfluorescenceimmu-noassay;Electro-chemiluminescenceimmunoassay;Carcinoembryonicantigen;ColorectalcarcinomaZhangQY,SunL,ZhangSG,WangQ.Comparisonbetweentime-resolvedfluorescenceimmunoassayandelectro-chemiluminescenceimmunoassayfordetectionofserumcarcinoembryonicantigenincolorectalcarcinoma.ShijieHuarenXiaohuaZazhi2005;13(23):2799-2802摘要目的:对时间分辨荧光免疫法(TRFIA)与电化学发光免疫法(ECLIA)检测血清癌胚抗原CEA作比较分析,了解两种方法的特点及这两种方法对结直肠癌检出率的影响.方法:分别采用TRFIA法及ECLIA法检测正常人、结直肠癌、非结直肠癌患者组共90例,每组各30例临床送检标本血清CEA含量,应用SPSS(Chicago,USA)软件进行统计学比较和分析.结果:结直肠癌组CEA值(TRFIA法:44.12±95.27μg/L,ECLIA法:35.96±71.83μg/L)明显高于正常组(TRFIA法:1.04±0.55μg/L,ECLIA法:0.71±0.48μg/L)(P0.01).TRFIA和ECLIA的灵敏度分别为60.0%、66.7%,特异性98.3%、100%,准确性85.6%、88.9%,阳性预测值94.7%、95.2%及阴性预测值83.1%、85.7%.两种方法检测的灵敏度、特异性、准确性、阳性预测值及阴性预测值略有不同,后者优于前者,但两者无显著差异(P0.05),相关性好(r=0.9738).结论:TRFIA法和ECLIA法具有良好的相关性,并且具有灵•研究快报BRIEFREPORT•时间分辨荧光免疫法与电化学发光法检测结直肠肿瘤标志CEA的比较张青云,孙丽,张书耕,王琼ISSN1009-3079CN14-1260/R世界华人消化杂志2005年12月15日第13卷第23期2799敏度高和稳定性好等优点,可应用于临床血清CEA检测.关键词:时间分辨荧光免疫分析;电化学发光免疫分析;癌胚抗原;结直肠癌张青云,孙丽,张书耕,王琼.时间分辨荧光免疫法与电化学发光法检测结直肠肿瘤标志CEA的比较.世界华人消化杂志2005;13(23):2799-2802引言癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)广泛分布于胚胎多种器官组织,出生后血内含量很低.他可在多种恶性肿瘤如结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、宫颈癌等表达,其中结直肠癌阳性率最高.临床上CEA主要用于结直肠癌的诊断、判断肿瘤分期和病变程度、监测治疗和预报复发等[1-7],因而通过检测血液中癌胚抗原的含量,对动态监测跟踪结直肠癌的病情变化和观察治疗效果有重要的临床价值.临床实验室用于检测CEA的方法主要有放射免疫分析(RIA)、酶联免疫分析(ELISA)、化学发光免疫分析(CLIA)等检测方法.近年来发展起来的时间分辨荧光免疫分析(time-resolvedfluorescenceimmunoassay,TRFIA)和电化学发光免疫分析(electrochemiluminescenceimmunoassay,ECLIA)测量技术,具有灵敏度高、稳定性好和无放射性污染等优点[8-14],超过了上述传统的检测方法.而检测方法的改进是提高血清学诊断阳性率的重要途径.因此我们采用TRFIA法与ECLIA法对比分析了临床送检的血清标本CEA的含量,并对检测结果进行了统计分析和比较,旨在进一步了解TRFIA法与ECLIA方法的特点及这两种方法对结直肠癌检出率的影响.1材料和方法1.1材料正常对照组30例为北京大学临床肿瘤学院经体检及辅助检查排除各种恶性疾病的健康人员(男4例,女26例),年龄23-63岁,平均年龄35岁.肿瘤组60例:结直肠癌30例(男12例,女18例),年龄25-86岁,平均年龄60岁;非结直肠癌30例包括淋巴瘤、肝癌和乳癌术后(男5例,女25例),年龄30-74岁,平均年龄55岁,均为北京大学临床肿瘤学院门诊和住院患者,肿瘤手术后标本均经病理证实.1.2方法空腹取血2mL经4000r/min离心10min,取血清备用.时间分辨荧光分析系统泰莱-Ⅰ及其配套试剂由广州丰华公司提供,全自动电化学发光免疫分析系统Elecsys2010及配套试剂由罗氏公司提供.TRFIA操作方法:试剂及微孔反应板置室温平衡.将微孔反应板安装到支架上,揭去密封胶带,洗板2次,并在干净的吸水纸上拍干.向微孔中加入标准品(Std)及样品(Unk)25μL/孔.再依次加入分析缓冲液200μL/孔,为避免污染应弃掉第一管.加样时滴头应在微孔中部的上方,避免与小孔边缘或其中的试剂接触.微孔反应板置室温震荡温育3h.取下反应板,用洗板机洗板6次(洗液加入量调节在能充满整个微孔,并防止溢出),并于干净的吸水纸上将微孔内残留的液体拍干,然后加入铕标记物工作液200μL/孔,室温震荡温育1h,洗板6次,拍干后加入增强液200μL/孔(加入过程中避免碰到小孔边缘或其底部,以免产生污染).最后微孔反应板室温震荡5min测定结果,数据分析由其自带的LOG–LOG_B函数处理.ECLIA操作方法:加样10μL,其余操作由电化学发光免疫分析仪Elecsys2010自动完成,两点定标.参考数值:95％健康人CEA≤5.0μg/L.统计学处理SPSS11.0(Chicago,USA)统计软件,各组计量数据以均数±标准差(mean±SD)表示,敏感性、特异性、准确性、阳性预测值及阴性预测值比较用χ2检验.2结果2.1CEA检测结果结直肠癌组CEA值(TRFIA法44.12±95.27μg/L,ECLIA法35.96±71.83μg/L)明显高于正常组(TRFIA法1.04±0.55μg/L,ECLIA法0.71±0.48μg/L),有显著性差异(P0.01).以TRFIA和ECLIA的CEA≤5.0μg/L为参考范围,分析非结直肠癌组和结直肠癌组,两种方法无显著差异(P0.05).30例正常人