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目录1、总体设计……………………………………………………………………12、实验室性质…………………………………………………………………13、实验室面积…………………………………………………………………14、实验项目……………………………………………………………………15、微生物实验…………………………………………………………………16、样品采样与送检……………………………………………………………17、检样处理……………………………………………………………………18、菌落总数测定………………………………………………………………29、大肠菌群测定………………………………………………………………410、沙门氏菌测定………………………………………………………………811、实验台与橱柜………………………………………………………………1812、电容器………………………………………………………………………1813、实验室制度…………………………………………………………………1814、仪器设备……………………………………………………………………1915、药品试剂……………………………………………………………………2016、实验室总体平面布置图………………………………………………附图一17、橱柜正、侧面示意图…………………………………………………附图二18、实验台正侧面示意图…………………………………………………附图三19、水管线路、水龙头位置图、照明灯、电话、网络、电插座位置尺寸图……………………………………………………………………………附图四1一、总体设计1、实验室性质该实验室用于面粉的感官实验、微生物实验和理化分析。2、建设规模该实验室属于小型实验室，投资总经费约为65000元。3、实验室面积实验室的总面积约为21平方米，理化分析室也可兼作感官分析室。4、实验项目4.1微生物实验主要包括菌落总数测定、大肠菌群测定、沙门氏菌测定4.1.1样品的采样与送检4.1.1.1鲜蛋、糟蛋、皮蛋；用流水冲洗外壳，再用75%酒精棉涂擦后放入灭菌带内，加封做好标记后送检。4.1.1.2巴氏杀菌全蛋、冰黄蛋、冰蛋白；先将铁听开处用75%酒精棉球消毒，再将盖开启，用灭菌电钻由顶到底钻入，徐徐钻取检样，肉厚抽出电钻，从中取出250g，检样装入灭菌广口瓶中，表明送检。4.1.1.3巴氏杀菌全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片；将包装铁箱上开口处用75%酒精棉球消毒，肉厚将盖开启，用灭菌的金属制双层旋转式套管采样器斜角插入箱底，使套管旋转收取检样，再将采样器提出箱外，用灭菌小匙自上、中、下部收取检样，装入灭菌广口瓶中，每个检样的质量不少于100g，表明送检。巴氏杀菌全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片等产品以生产一日或者一班为一批检验沙门氏菌时，按每批总量的5%抽样，但每批最少不得少于三个检样。测定菌落总数和大肠菌群时，每批按装听过程前、中、后取样三次，每次100g，每批合为一个检样。巴氏杀菌全蛋、冰黄蛋、冰蛋白等产品按生产批号在装听时流动取样。检验沙门氏菌时，冰蛋黄及冰蛋白按250kg取样一件，巴氏消毒冰全蛋每500kg取样一件。菌落总数测定和大肠菌群测定时，在每批装听过程前、中、后取样三次，每次100g合为一个检样。4.1.2检样处理4.1.2.1鲜蛋、糟蛋、皮蛋外壳；用生理盐水浸湿的棉拭子充分擦拭蛋壳，然后将棉拭子直接放入培养基内增菌培养，也可将整只蛋放入灭菌小烧杯或平皿中，按检样要求加入定量灭菌生理盐水或液体培养基，用灭菌棉拭子将蛋壳表面充分擦洗后，以擦洗液作为检样检验。4.1.2.2鲜蛋蛋液；将鲜蛋在流水下洗净，待干后再用75%酒精棉消毒蛋壳，然后根据检样要求，打开蛋壳取出蛋白、蛋黄、全蛋液，放入带有玻璃珠的灭菌瓶内，充分摇匀待检。4.1.2.3巴氏杀菌全蛋粉、蛋白片、蛋黄粉；将检样放入带有玻璃珠的灭菌瓶内，按比例加入生理盐水充分摇匀待检4.1.2.4巴氏杀菌冰全蛋、冰蛋白、兵蛋黄；将装有冰蛋的检样浸泡于流动的冷水中，使检样融化后取出，放入带有玻璃珠的灭菌瓶中充分摇匀待检。4.1.2.5各种蛋制品沙门培养；以物价手续称取检样，接种于亚硒酸盐煌绿肉汤等培养基中，盖紧瓶盖，充分摇匀，然后放入36±1℃培养箱中，培养20±2h。24.1.2.6接种以上各种蛋与蛋制品的数量及培养基的数量和成分；凡用亚硒酸盐培养时，各种蛋与蛋制品的检样接种数量都为30g，培养基数量为150mL，凡用煌绿肉汤培养时，检样接种数量、培养基数见下图。4.1.3菌落总数测定4.1.3.1食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。4.1.3.2培养基和试剂（1）平板计数琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mLpH7.0±0.2将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。（2）磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水500mLpH7.2贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。（3）无菌生理盐水：氯化钠8.5g蒸馏水1000mLA.3.2制法称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。4.1.3.3检验程序34.1.3.4操作步骤（1）样品的稀释①固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。②液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。③用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。④按③操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。⑤根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。⑥及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。（2）培养①待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。②如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。（3）菌落计数4可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。①选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。②其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。③当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。4.1.3.5结果与报告（1）菌落总数的计算方法①若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。②若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：…………………………………（1）式中：N——样品中菌落数；ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。③若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。④若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。⑤若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。⑥若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。（2）菌落总数的报告①菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。②菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。③若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。④若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。⑤称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。4.1.4大肠菌群测定4.1.4.1在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。4.1.4.2培养基和试剂（1）月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：5胰蛋白胨或胰酪胨20.0g氯化钠5.0g乳糖5.0g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75g月桂基硫酸钠0.1g蒸馏水1000mLpH6.8±0.2将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。（2）煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：蛋白胨10.0g乳糖10.0g牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液200mL0.1%煌绿水溶液13.3mL蒸馏水800mLpH7.2±0.1将蛋白胨、乳糖溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200mL（将20.0g脱水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3mL，用蒸馏水补足到1000mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。（4）结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：A.3.1成分蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化钠5.0g胆盐或3号胆盐1.5g中性红0.03g结晶紫0.002g琼脂15g～18g蒸馏水1000mLpH7.4±0.1将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH。煮沸2min，将培养基冷却至45℃～50℃倾注平板。使用前临时制备，不得超过3h。（4）磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水500mLpH7.2A.4.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。（5）无菌生理盐水氯化钠8.5g6蒸馏水1000mL称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。（6）mol/LNaOHNaOH40.0g蒸馏水1000mL称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。（7）mol