凝聚胺法交叉配血

实验三凝聚胺法交叉配血医学检验系张晨光目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。原理：聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开；如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集消失。试验分步原理血清红细胞悬液加入LIM混合液Polybrene受体血型抗原IgG抗体迅速致敏试验分步原理Polybrene分子连接到红细胞上加入Polybrene试验分步原理离心Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集1个IgG分子同时连接两个红细胞试验分步原理加入重悬液减弱了Polybrene的作用加重悬液试验分步原理已被血型抗体致敏的红细胞不会散开阳性结果试验分步原理未被血型抗体致敏的红细胞很快散开阴性结果试剂:凝聚胺试剂盒；生理盐水器材：小试管、滴管、试管架、记号笔、显微镜、离心机。标本：静脉血。操作1.取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受血者血清(血浆)1滴，和供血者3～5％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管受血者3～5％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴，加供血者血清(血浆)1滴。2.各加LIM溶液3滴，混合均匀后，再各加Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟或参照说明书。3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。4．轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。5．最后加入Resuspending2滴，轻轻转动试管混匀并同时观察结果。6.结果判定：如果在30秒内（或按说明书）凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。2.若受血者血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，须多加4～6滴Po1ybrene溶液以中和肝素。3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操作。【注意事项】4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试验操作，由于某些受血者血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现，建议进行交叉配血试验操作时室温保持在22℃左右，最后滴加Resuspending时，将试管立即置入37℃水浴中，轻轻转动试管混合，并在30秒内观察结果。5．不同的凝聚胺试剂盒操作方法各不相同，实验时请严格按照说明书操作。【方法学评价】1.凝聚胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高，能检测几乎所有规则与不规则血型抗体，适用于各类输血患者的配血。2.盐水介质配血法操作简单、反应快速，但只能发现完全抗体。3.酶介质配血法操作较为简便，试剂便宜，灵敏度高；但费时，准确性和稳定性差。4.卡式配血（微柱凝胶法）已成为国际安全输血检查的推荐方法，该法具有：①检测项目全②灵敏度高③特异性强④重复性好⑤客观性好⑥节省样品、试剂，结果易保存⑦可自动化操作。不足之处是成本昂贵。5.抗球蛋白介质配血法是检查不完全抗体最敏感、可靠的方法；但试剂价格较贵，操作复杂、费时。谢谢大家！