培养基适用性检查验证方案

江苏瑞阳医疗科技有限公司培养基适用性验证方案1of51培养基适用性验证方案编制：审核：批准：江苏瑞阳医疗科技有限公司培养基适用性验证方案2of521.验证目的：本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查，符合灵敏度要求。2.参照标准2010版中国药典二部附录：XIIA无菌检查法和XIG微生物限度检查法。3.验证项目无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。4.验证小组人员及职责：小组人员职务职责王志凤负责验证方案的审批，确认所有的验证项目均已完成，并按方案执行。李晨负责验证日常管理工作，负责验证方案的审核。郭月负责验证方案及报告的起草，负责该方案的实施，对实施过程中资料和数据进行汇总并完成报告。5.前提条件确认5.1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。5.2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训6.接受标准6.1.液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。6.2.液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。6.3.固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。6.4.固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。6.5.培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。6.6.无菌性检查：应不得有菌生长。6.7.适用性检查：被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且生长的菌落大小、形态特征应一致。江苏瑞阳医疗科技有限公司培养基适用性验证方案3of537.验证实施7.1.试验用仪器和物料所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。7.2.验证用培养基及试剂名称批号配制（称样量→体积）pH营养琼脂培养基2015012232.0g→1000ml7.2±0.2营养肉汤培养基2014082618.0g→1000ml7.2±0.2改良马丁培养基2014121128.5.0g→1000ml6.4±0.2大豆酪蛋白琼脂培养基2015032340g→1000ml7.3±0.2沙氏葡萄糖琼脂培养基2015111600165.1g→1000ml5.6±0.2玫瑰红钠琼脂培养基2014070731.5g→1000ml6.0±0.2硫乙醇酸盐流体培养基2015010429.25g→1000ml7.1±0.2乳糖胆盐发酵培养基2015110500135g→1000ml7.4±0.2乳糖发酵培养基20160615-0030g→1000ml7.4±0.2伊红美蓝琼脂培养基2015110600137.5g→1000ml7.1±0.2SCDLP液体培养基2015110600138g→1000ml7.2±0.2哥伦比亚血琼脂基础2015110500144.0g→1000ml7.3±0.2十六烷三甲基溴化铵培养基2015110200138.3g→1000ml7.52±0.20.9%无菌氯化钠溶液0.9%无菌氯化钠溶液（含0.05%聚山梨酯）7.3.验证用菌株7.4.测试菌悬液菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。分别取上述新鲜培养物名称CMCC编号名称CMCC编号大肠埃希菌（B）44102生孢梭菌（B）64941金黄色葡萄球菌（B）26003乙型副伤寒沙门菌（B）50094枯草芽孢杆菌（B）63501白色念珠菌（F）98001铜绿假单胞菌（B）10104黑曲霉菌（F）98003江苏瑞阳医疗科技有限公司培养基适用性验证方案4of54用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50~100cful的菌悬液。接种生孢梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时。上述新鲜培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数10~100cfu的菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23～28℃培养24~48小时。取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50~100cfu的菌悬液。接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的菌悬液。备注：控制菌项检查用工作菌液浓度为10~100cfu/ml，无菌项检查用工作菌液浓度小于100cfu/ml。7.5.检查液体培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应规定的培养温度及最短培养时间下培养。液体培养基指示能力检查：分别接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应规定的培养温度和最短时间下培养。固体培养基促生长能力检查：取0.1ml（含菌数50～100cfu/ml）的试验菌分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应规定的培养温度及最短时间下培养。固体培养基指示能力检查：取不大于100cfu的试验菌分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。培养基抑制能力检查：接种不大于100cfu的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养。无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶）/倾注相应数量的平皿，按规定条件培养。适用性检查：取50～100cfu/ml的试验菌1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注被检培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，按规定条件培养，江苏瑞阳医疗科技有限公司培养基适用性验证方案5of55计数。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。空白对照：被检培养基同时做空白对照，按上述规定条件培养。7.6.各培养基检查信息8.结果结果见附表一培养基适用性验证结果、附表二培养基适用性检查通用。9.结论：10.周期：干粉或无菌培养基批号改变时重新验证。被检培养基名称检查用菌种检查能力培养时间培养温度营养琼脂金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌适用性检查不超过3天30~35℃营养肉汤培养基沙门菌促生长18~24h30~35℃改良马丁培养基白色念珠菌、黑曲霉促生长5天20~25℃无菌14天大豆酪蛋白琼脂培养基金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌适用性检查不超过3天30~35℃白色念珠菌、黑曲霉不超过5天沙氏葡萄糖琼脂培养基白色念珠菌促生长、指示24h30~35℃白色念珠菌、黑曲霉适用性检查不超过5天23~28℃玫瑰红钠琼脂培养基白色念珠菌、黑曲霉适用性检查不超过5天23~28℃硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌适用性检查3天30~35℃无菌检查14天乳糖胆盐发酵培养基大肠埃希菌促生长18h35±2℃金黄色葡萄球菌抑制24h乳糖发酵培养基大肠埃希菌促生长、指示24h35±2℃伊红美蓝琼脂培养基大肠埃希菌促生长、指示24h35±2℃SCDLP液体培养基金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌促生长24h35±2℃哥伦比亚血琼脂基础金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌促生长72h35±2℃十六烷三甲基溴化铵培养基铜绿假单胞菌促生长24h35±2℃大肠埃希菌抑制48h