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ICS67.050B50中华人民共和国国家标准农业部1077号公告一2-2008水产品中硝基肤喃类代谢物残留量的测定高效液相色谱法Determinationofnitrofuranmetabolitesresiduesinfisheryproduc臼byhighperformanceliquidchromatography2008-08-11发布2008一08-11实施中华人民共和国农业部发布农业部1077号公告一2-2008目lJ'i=j本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归Ll.本标准起草单位:农业部水产品质量监督检验测试巾心(上海)、中国水产科学研究院东海水产研究所。本标准主要起草人:碟友琼、王嫂、贾东芬、于茸娟、黄冬梅、钱蓓膏、史志霞、徐捷。T农业部1077号公告一2-2008水产品中硝基映喃类代谢物残留量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了水产品中映喃l哇闸代训物卜挝基-2-I堕烧基闸(AOZ)、l庆喃它隅代询:物5-Ip基吗，*-3氨基-2-1些烧基酣(八MOl)、吠IlltIjT呼材、代谢物氨基n尿(SEM)和吠喃妥因代谢物1-氨基-2-内陆!尿l(AHO)残留茸的高效液相色谱测定为it，本标准适用于水产品中映喃略目~J代谢物、I庆哺它自~l代谢物、哄喃西林代谢物和哄喃妥因代谢物残留的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准.然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版木。凡是不注H期的引用文件，其最新版本适用于本标准。CB/T6682分析实验室用水规格和试验方法CIT3016水产品抽样方法3原理试样中残留的硝基吠i喃类代谢物用二:每L乙酸-甲醇辩液提取，经衍牛、乙酸乙酣萃取、固相萃取柱净化后，用紫外检测器进行检测，外标法定量。4试剂和材料4.1本标准所用试剂应无F扰峰。除另有特别i兑I归夕j、电所川]试开IJ均为分析纯。试验用水应符合GB/T6682一级水的要求。4.2乙脯:色谱纯。4.3乙腊溶液:30mL乙脯与70时，水混仆讲解。4.4甲醇:色谐纯。4.55%甲醇溶液:5mL甲醇与95时，水混介辩解24.6乙酸乙醋:色谱纯，4.7异丙M:色谱纯。4.8庚烧磺酸铀:色谱'级。4.9异辛炕·色谱纯。4.10冰乙酸:色谱纯。4.11酸性氧化铝;100目~200目。4.12硅胶C18键合材料:100目~200li]η4.13吸附型离子交换树脂:100目~200[:-1c4.14提取剂1·酸性氧化铝、硅胶Cli)挝合刷料和i嗷附型离子交换树脂按30:40:30比例混合。农业部1077号公告一2-20084.15三氯乙酸:优级纯，4.16提取剂2:三氯乙酸-甲醇溶液，称取55.4g二氯乙酸榕于500mL水中，加入500时，甲醇混合。4.17邻氯苯可!醒:色谱纯，4.18衍LI二化试剂:I吸取100μL邻氯苯甲膛，济解于5mL冰乙酸和20mL甲醇混合煎中。4.19组氧化制。4.2010l1lo1/L氢氧化俐:称取固体氢氧化饷40g，JJ日水溶解冷却后，定容到100mL4.21]moUL氢氧化例:称取固体氢氧化饷4g.1JO*溶解冷却后，定容到100mL。4.22净化柱:CI8eN混合柱.200I鸣，3mI.;或性能相当者。4230.05%庆烧碗酸俐溶液:称i鼠。.500g庚皖磺酣锅，)1111000mL7Jc榕解。4.24标准品:氨基腮(SEM)、3氨基2-哇烧基酣(A02)、5-甲基吗琳3-氨」庄-2-嗖兢基嗣(AMOZ)、1-氨基2内眈腮(AHD)，纯度注99%。4.25标准贮备情被:准确称旦:AMOZ，AHD、AOZ、SEM各10mg.用甲醇分别走容于IOOmL窑盘瓶，配制成lOO/Lg/mL的标准贮备液。一18'C冰箱中保存，有效期6个月。4.26混合标准r作溶液;使用前取4.25标准贮备榕液，用甲醇稀释成所需浓度。5仪器5.1芮姓被相色谱仪:配紫外检测桦g5.2天平:Ji革虽O.01日ι5,3分析天平:感且.(υjλ.(JOD01gιa5.4离，心、机fJ机几L:60o)χr;γJ川L't∞川()盯Jj川∞5.5旋睫转蒸发仪1c5.6可水浴加热随声波和If洗刷L:vxfld泪水浴摇床，5,7氮l攻仪。5.8旋涡?昆合都u5,9固相萃取仪u5.10匀浆机。6色谱条件6.1色谱柱:SB-CN柱，250mmX!l,6mm(i.d.)，粒!世-5lAmiL史性能相当者。6.2流动相:乙j月脂情肯一牛←异异.丙醇一乙1般较乙附十;冰准乙酸←川(门l.(1川5乡只 O斗5十O.1十80ω)曰j 4庚皖债陪铀洋梆f液(σ5+1川6.3流速:1.0mηlL/mln卫川6.4柱温:3ωo°C。6.5检测波长:280om.6.6进样量:50μLo7测定步醺7.1样品处理7. 1.1试样制备按照SC/T3016规定执行。7.1.2提取农业部1077号公告-2-2008准确勒:取己闯碎的样品10g(士0.05g)，置于50rnL肉，心管中，力II入7g提取刑1(4.14)及10mL提取费IJ2(4.IS)，激涡混合后于40'C播床振摇或超声30min，于6000r/min离(.'10min，取ill上清、液于另一SOmL离心管中;再加人10mL提取剂2(4.16)I二豆豆提取一遍，合并提取液。7.1.3衍生化于7.1.2提取液中，加入衍生化试剂(4.18)0.5mL1昆匀后，于40'C摇床振据或t1芦60min，取ill(令至室氓。7.1.4萃取将冷却后的上清液用10mol/L和1mol/L的组氧化铀调pH到7.0(土O.1)1111入15mL乙酸乙醋萃取，4000r/min离心10min后，取山乙酸乙醋层于梨形瓶中，再加入10mL乙般乙醋，重复上述操作两次，合井乙酸乙醋层，于35'C水浴中诚压旋转蒸发至干，加入5%的甲醇榕液4..5)5mL溶解残渣。7.1.5净化将净化柱(4.22)依次用5mL甲醇、5mL水活化后，加入7.1.4最终溶液以1mL/min,...,,2mL/m.in速度过柱，待样液全部过完后加5mL水淋洗，抽干，芳:去流出攘，用2mL甲酶以1mL/minZmL/min速度洗脱，接收全部洗脱攘，40'C氮气吹干。残留物用1.0mL乙腊溶被(4.3)及2时，异辛烧榕解，振荡?昆匀，6000r/min离心10min，取下层乙脯[7k层过O.22μm有机相微孔rm膜，供高效液榈仪器测定7.2工作曲线移取适量AMOZ、ABD、AOZ、SEM~·昆合标准溶辙，添加到10mL提取齐IJ2(4.16)中，使其浓度分别为0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL和50.0ng/mL.按7.1.3,...,,7.1.5测定步骤处理，用高效液相色谱仪测定，绘制标准工作曲线。或果用与待测物相近故度的标样进行单点测定。7.3色谱测定标准工作需液和样液中的AMOZ、AHD、AOZ、SEM响应值均应在线性范围之内。在上述条件下，空白试样、标准潜液和加标样品的色谐'因参见附录八。81:十样品中AMOZ、AHD、AOZ、SEM的含量按公式(1)计算o计算结果锦扣除空白值，结果保留三位有效数字。一AXC，XVC一一一一一一A,Xrn………………………….(1)式中:C样品中被测物含量，单位为徽克每千克(/~g/kg);G一一上机测定时的标准溶液中被测物的含量，单位为纳克每毫升(ng/mL);A一一被视I)样品的峰面积;A，一一标准的峰面积;V一--样品最终定容体积，单位为主革开(mL);m一一样品质盘，单位为克(gL9方法灵敏度、准确度和精密度9.1 灵敏度本方法八MOZ、AHD、AOZ、SEM的检出限为O.5μg/kg，最低定量限均为1.0μg/kg.9.2准确度•-农业部1077号公告一2-2008本方法在O.5ng/mL~50ng/mLNf.围内，AMOZ、AHD、八oz、SEM的!可收率均为70%---110%。9.3精密度本方法批内和批间相对标准偏差运15%。4农业部1077号公告一2-2008附录A(资料性附录)A.l硝基映喃类代谢物混合标准溶液色谱图100ngjmL硝基映哺类代谢物混合标准溶液色谱图见图A.I。mAU同咀咀液相色谱固NCUAO军〈『mBhAh.ON3.5。=叫喝啤-F32,5~~21.5。.5。-0.5。因酌『N八凹尸A叭。5\01520田III图A.l100ng/mL硝基映喃类代谢物混合标准溶司蓝色i普图A,2空白虾样晶色谱圈空白虾样品色谱图见图A.2~mAU4-I2SFXOFhRMn-SHfJJAU叫川]JV\飞尸飞JYL\/户。O520min圄A.2空白虾样品色i曾图35农业部1077号公告-2-2008A.3空白虾样品添加10μ.g/kg硝基映喃类代谢物色谱图空白虾样品添加10μg/kg硝基峡喃类代谢物色谱图见图A.3固mAli32NO2-〈la--严卢定〈1【的卜巳o-l」L-2-34Jλ卢。51520mJn图A.3空白虾样品添加10抖g/kg硝基映喃类代谢物色谱图6