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ICS67.050B50中华人民共和国国家标准农业部1077号公告一7-2008水产品中恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星残留的快速筛选测定胶体金免疫渗滤法Fastscreeningofenrof1oxacin,DorfloxacinandciproOoxacinresiduesinfisheryproductsDotimmunogoldfiltrationassay2008-08-11发布2008-08-11实施P咱中华人民共王I农业部发布农业部1077号公告一7-2008目U吕本标准附录.气为现范性附录。本标准由中华人民共和国农业部植业局提出，本标$由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口a本标准起草单位:中国海洋大学。本标准主要起草人t林洪、曹立民、江南、隋建新。I农业部1077号公告一7一2008水产品中恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星残留的快速筛选测定胶体金免疫渗滤法1范围本标准规定了水产品中恩诺抄星、诺氟抄星和环丙沙星残留的肢体金免疫渗滤快速筛选检测方法。木标J船主用于7.K产品中恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星三种喳诺隅类残留的快速筛选检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而且戈旦I本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单〈不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准边成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本边用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规棉和试验方法SC/T3016水产品取样方法3原理以磷酸盐缓冲液(或者水)/甲醉酒合榕被提取样品中的l壁诺酣类残留，利用肢体金免疫普油试剂盒进行快速筛选检测。当待测物的法度高于检测限11才‘试ffiJ盒的反应极表面会显现红色斑点，由此定性检测样品中恩诺沙星等三种哇诺嗣类残留。4试剂所有试剂除另有规定外.均为分析纯。4,1水:符合GB/T6682一级水要求。4,2甲醇:色谱纯。4.3盐酸:取8.3mL散盐酸，以水稀释至]000mLo4.4磷酸盐缓冲被(0.01mol!L，世17.'D:称取NaCI8.0g,KCI0.2g,\lazHP04•12H202.9gKHzP042.0g，1JrJ水榕解混匀.定在主1OODrnL，用盐酸(4.3)调节pH至7.4土O.104.5鱼类样品的提取梅剂:1提50mL磷酸盐缓冲液(4.4)与50mL甲醇I昆匀，现用现配。4.6其他水产品样品的提取静剂:取50TnL水与50mL甲醇混匀，现用现配自4.7洗涤液:取100IlLI吐温20与100mL磷酸盐缓冲液(4.4)混匀。4,8肢体金免疫渗滤试剂盒:包含渗滤反应板、肢体金标记喳诺翻抗体等，见附录Ao5仪器5.1分析天平:感量0.001go5.2旋涡混合器5.3高速冷冻离心机:最大转退L200U旷!TIlDe5.4高速匀浆机。5.5均质器。5.6旋转蒸发器B农业部1077号公告-7一20085.7具塞离，中管:50mL.5.8鸡心瓶:50mL.5.9容量瓶:5mL,1000mL。5.10移液枪:10μL，SOμ1.，5000μL，6测定步骤6. 1试样制备按照SC/T3016的规定执行。6.2 提取称取样1日1(5土0.01g)于50mL具塞离心管巾，加入5mL样品提取情剂，均质2min后，2000r/min℃离心10min，上清液倒入另一50mL具塞离心管中。残渣中加入5rnL样品提取液，按上述方法再提取一次，上清液合并干50mL离心管中.盛装上清班的离心管10000r/min离心lOmin电将上清、液转移至鸡心瓶，于45'C水浴减压旋转藻发至原体积的1/3，剩余被转移至5mL离心管中，2QOO旷min4°C离心5min，上清液转移至5rnL容量;瓶中，用磷酸盐缓冲液定容至5mL，用孔径为0.22μInfl~针头撞器过滤备用。6.3测定6.3. 1取5p..L试样提取蔽滴加到试剂盒小孔中央，室温下放置反应15mino6.3.2淌'加5p.LJ;肢体金标记抗体，待其渗入后反应5min.6.3.3加入30μL洗涤液进行洗禄，共洗操3次，然后在10min内观察结果。6.3.4空白对照:以磷酸盐缓冲液代替试样提取液作为空白对照组，按照6.3.]-'6.3.3进行同步测定，膜片表面应不呈现红色或者其他任何色泽，否则应更换试剂盒重新进行测定。7结果判断肉眼观摸样品检测结果，并与空白组的显色结果对比，1与硝酸纤维素膜片表面山现红色斑点时，判定存在以下三种结果中的任何一种，或者其巾两种以上结果同时存在:恩诺沙星残留虽注10μg/kg;环丙沙星残留量注10周Ikgl诺氟抄星残留盘注20μg/kg.B本方法的灵敏度本方法的最低检出限:恩诺抄星和环丙沙星均为10，u.g/峙，诺氟抄星为20μg/kg.2农业部1077号公告一7-20013附录A(规范性附录)睡诺翻肢体金免重潘滤试剂盒技术要求哇诺隅肢体金免疫渗滤试剂盘，可用于水产品中恩请抄星、环丙沙星和诺氟沙星三种喳诺酣类药物残留的快速筛选检测。试剂盒应该保存在2·C~-8·C的干燥避光环境中，并在有效期内使用。使用前应将试开:1)盒及其试剂恢复至室温。每个词;如l盒包括=24X渗滤反应板:24孔，包被有|璧诺前抗体sIX胶体金标记|蜜诺酣抗体(lmU。3