DB33 3007-2015 食品安全地方标准 食品中4-己基间苯二酚残留量的测定

DB33浙江省地方标准DB33/3007—2015食品安全地方标准食品中4-己基间苯二酚残留量的测定2015-09-10发布2015-12-10实施浙江省卫生和计划生育委员会发布DB33/3007—2015I前言本标准为首次发布。本标准的附录A为资料性附录。DB33/3007—20151食品安全地方标准食品中4-己基间苯二酚残留量的测定1范围本标准规定了虾、蟹类水产品和果蔬中4-己基间苯二酚（4-HR）残留量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于虾、蟹类水产品和果蔬中4-己基间苯二酚的测定。2原理用乙腈-二氯甲烷溶液提取样品中4-己基间苯二酚，提取液经氨基固相萃取柱净化、浓缩，残渣用流动相溶解，液相色谱-荧光检测器检测，外标法定量。3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.2二氯甲烷（CH2Cl2）。3.3甲醇（CH3OH）。3.4丙酮（CH3COCH3）。3.5正己烷（C6H14）。3.6乙腈水溶液（6+4，V/V）：量取60mL乙腈（3.1）和40mL水，混匀后备用。3.7甲醇-丙酮溶液（1+1，V/V）：量取50mL甲醇和50mL丙酮，混匀后备用。3.8乙腈-二氯甲烷溶液（7+3，V/V）：量取70mL乙腈和30mL二氯甲烷，混匀后备用。3.94-己基间苯二酚标准品：CAS136-77-6，纯度大于99.0%。3.104-己基间苯二酚标准溶液：准确称取100mg（精确到0.1mg）的标准品于100mL容量瓶中，用乙腈水溶液（3.6）溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL标准储备液，贮存于0℃～4℃冰箱中密封保存，溶液有效期1个月。临用前，取此储备液，用乙腈水溶液（3.6）稀释成所需浓度的标准工作液。3.11氨基固相萃取柱：500mg，3mL，或相当者。使用前用6mL甲醇丙酮溶液（3.7）和6mL正己烷活化。3.12微孔滤膜：0.45μm，有机系。3.13氮气：纯度大于等于99.9%。4仪器4.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。4.2天平：感量0.01g。4.3分析天平：感量0.0001g。4.4离心机：最大转速10000r/min。DB33/3007—201524.5旋涡混合器。4.6旋转蒸发仪。4.7固相萃取装置。4.8氮气吹干仪。4.9高速组织捣碎机。5操作方法5.1样品处理5.1.1试样制备和保存从原始样品中取出代表性样品500g，虾去头、去壳、去附肢，取可食部分；蟹去壳、去鳃等取可食部分；果蔬去皮。用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份分别装入洁净容器中作为试样，密封并标识。将试样放入-18℃以下保存。制样和试样保存过程中，应防止试样受到污染或发生残留物含量的变化。5.1.2提取称取5g（精确到0.01g）样品置于50mL离心管中，加入10mL乙腈二氯甲烷溶液（3.8），高速组织捣碎机匀浆2min，盖塞，旋涡混匀1min，超声提取10min，8500r/min离心5min，取上清液转入100mL旋转蒸发瓶中，重复上述操作一次。合并提取液于45℃旋发至近干，取7.5mL二氯甲烷分三次超声溶解，合并，待净化。5.1.3净化将5.1.2中的待净化液转移至固相萃取柱（3.11）中。用6mL正己烷淋洗，将固相萃取小柱抽至近干，用6mL甲醇丙酮溶液（3.7）洗脱，流速不超过1mL/min，收集洗脱液。洗脱液于50℃用氮气吹干，残留物用1.0mL流动相溶解，过微孔滤膜（3.12），供液相色谱测定。5.2样品测定5.2.1色谱条件a)色谱柱：C18柱，150mm×4.6mm（内径），5μm。b)流动相：乙腈+水（6+4，V/V）。c)流速：1.0mL/min。d)柱温：35℃。e)激发波长：280nm。f)发射波长：310nm。g)进样量：10μL。5.2.2标准工作曲线的绘制用流动相将4-己基间苯二酚标准溶液（3.10）稀释成为0.05μg/mL、0.50μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50μg/mL系列标准工作液，供高效液相色谱分析。5.2.3色谱分析分别注入10μL4-己基间苯二酚标准工作溶液及样品溶液于液相色谱仪中，按5.2.1色谱条件进行分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据4-己基间苯二酚标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图见附录A。6空白试验DB33/3007—20153除不加试样外，均按上述测定步骤进行。7结果计算样品中4-己基间苯二酚的残留量按公式（1）计算，计算结果需扣除空白值。结果保留2位有效数字。10001000-0mVCCX………………………………………………………（1）式中：X——试样中4-己基间苯二酚的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；C——试样溶液中4-己基间苯二酚的含量，单位为微克每毫升(μg/mL)；C0——空白试验中4-己基间苯二酚的含量，单位为微克每毫升(μg/mL)；m——试样质量，单位为克(g)；V——试样溶液体积，单位为毫升(mL)。8方法灵敏度、准确度和精密度8.1灵敏度本方法检出限为0.002mg/kg，定量限为0.010mg/kg。8.2准确度本方法添加浓度为0.010mg/kg～10mg/kg时，回收率为70%～110%。8.3精密度本方法批内相对标准偏差≤10%，批间相对标准偏差≤15%。DB33/3007—20154AA附录A（资料性附录）4-己基间苯二酚标准物质色谱图min0123456789LU11.251.51.7522.252.52.7533.25FLD1A,Ex=280,Em=310(4-HR\2014-03-17#116\004-0401.D)6.428A.14-己基间苯二酚标准物质液相色谱图（1.0μg/mL）min0123456789LU11.251.51.7522.252.52.7533.25FLD1A,Ex=280,Em=310(4-HR\2014-03-17#116\008-0801.D)6.436A.24-己基间苯二酚海捕虾中加标色谱图（0.080mg/kg）DB33/3007—20155min00.511.522.533.544.5LU01020304050FLD1A,Ex=280,Em=310(4-HR\2014-05-21#41\043-1901.D)3.704A.34-己基间苯二酚花蟹中加标色谱图（2.0mg/kg）A.44-己基间苯二酚苹果中加标色谱图（0.8mg/kg）_________________________________