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ICS65.020B16DB35福建省地方标准DB35/T1220—2011大豆疫霉菌致病性测定TechnicalstandardforpathogenicitytestofPhytophthorasojae2011-12-31发布2012-03-15实施福建省质量技术监督局发布DB35/T1220—2011I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12术语与定义........................................................................13致病性测定方法....................................................................13.1育苗..........................................................................13.2接种体制备....................................................................13.3接种时间......................................................................23.4接种方法......................................................................23.5接种后管理....................................................................23.6调查部位......................................................................23.7调查时间......................................................................23.8病情调查与记载................................................................24病情指数计算......................................................................25测定材料的灭活处理................................................................2附录A（规范性附录）胡萝卜培养基制备................................................3附录B（规范性附录）大豆疫病病情分级标准............................................4DB35/T1220—2011II前言为规范大豆疫霉菌致病性测定技术，确保大豆疫霉菌致病性测定结果的准确性，有效地应用于大豆疫病抗病种质资源筛选和育种工作，特制定本规范。本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则进行编写。本标准由福建省农业科学院提出。本标准由福建省农业厅归口。本标准起草单位：福建省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：兰成忠、陈庆河、翁启勇、李本金、赵健、邱荣洲。DB35/T1220—20111大豆疫霉菌致病性测定1范围本标准规定了大豆疫霉菌致病性测定过程的致病性测定、结果计算、测定材料灭活处理的方法。本标准适用于大豆疫霉菌致病性的测定。2术语与定义下列术语和定义适用于本标准。2.1人工接种Artificalinoculation用人工培养的病原物，在人工控制的条件下，接种大豆植株诱发病害，根据大豆植株的发病程度判断病原菌的致病性强弱。2.2接种体Inoculant用于人工接种致病性鉴定用的大豆疫霉菌（Phytophthorasojae）卵孢子悬浮液。2.3下胚轴伤口接种Hypocotylsinoculationtechnique供试品种生长至2叶~3叶真叶时，用带7号针头的接种用注射器（2mL），以针尖在大豆苗子叶下茎0.5cm处向下划1cm长的伤口，将接种体0.5mL喷于伤口处。2.4对照品种Contrastcultivar在致病性测定时选定的感病品种Williams和当地主栽品种。3致病性测定方法3.1育苗用于致病性测定的供试大豆品种（品系）和对照品种分别播于以新蛭石为基质的大小适宜的容器中，株距(1~2)×(1~2)cm，育苗期温度控制在20℃~30℃。每处理应不少于15株，设置３个重复。3.2接种体制备DB35/T1220—20112将供试菌株的菌丝块移至胡萝卜培养基（参见附录A）上，25℃~28℃恒温下黑暗培养8d～10d，刮取培养基表面的培养物，用组织捣碎机配以适量无菌水将培养物捣碎成匀浆。在光学显微镜下观察培养物匀浆中大豆疫霉菌卵孢子的数量，用血球计数板将孢子悬浮液的终浓度调配至每毫升约含2×104个孢子。接种体应在使用当天制备。3.3接种时间测定的大豆苗长至2叶~3叶真叶期。3.4接种方法采用下胚轴接种方法。3.5接种后管理接种后的大豆苗在20℃～25℃、相对湿度90%以上保湿48h，转入20℃～30℃的温室培养，保持土壤含水量70%～80%。3.6调查部位大豆苗下胚轴。3.7调查时间接种4d后，当感病对照品种的株发病率75%以上、发病程度达到7级（参见附录B）以上方可进行病情调查。每隔1d调查一次病情，至少连续调查5次。3.8病情调查与记载按调查标准（参见附录B）逐株调查，记载病级。4病情指数计算将供试大豆品种的病情指数按计算公式（1）计算。病情指数=最高病级调查总株数病级代表值相应病级代表值株数××∑×100…………………………(1)5测定材料的灭活处理5.1剩余接种体带回实验室经灭菌处理。5.2将致病性测定后的大豆病株集中焚烧处理。5.3用于栽培大豆苗的基质带回实验室进行160℃干热灭菌处理。5.4用于栽培大豆苗的盆钵带回实验室，80℃水浴处理2h以上。DB35/T1220—20113AA附录A（规范性附录）胡萝卜培养基制备称取200g新鲜胡萝卜，切成小片后置于组织打碎机腔中，加入去离子水500mL，启动组织打碎机捣碎约40s，倾出组织捣碎液，用4层纱布过滤，滤过液置于1000mL量杯中，补足去离子水到1000mL，倾入可加热的容器中，加入琼脂16g，加热至琼脂完全融化，立即分装于带棉花或硅胶塞的三角瓶中，在121℃下蒸汽灭菌20min后，冷却，取出，备用。DB35/T1220—20114BB附录B（规范性附录）大豆疫病病情分级标准0级：接种部位无变化或稍变褐；1级：接种部位产生病斑，病斑面积占茎部面积的1/4以下；3级：接种部位病斑面积占茎部总面积的1/4～1/2；5级：接种部位病斑占茎部面积的1/2以上；7级：接种部位病斑连片，已形成绕茎现象，但植株并没萎蔫或枯死；9级：植株萎蔫或枯死。_________________________________