DB52T 954-2014 辣椒品种抗疫病温室接种鉴定技术规程

ICS67.080.01B31DB52贵州省地方标准DB52/T954—2014辣椒品种抗疫病温室接种鉴定技术规程Ruleforidentificationofpepperforresistancetopepperphytophthorablight2014-10-30发布2014-11-30实施贵州省质量技术监督局发布贵州省农业委员会发布发布DB52/T954—2014I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语和定义........................................................................14用具和试剂........................................................................25育苗及接种........................................................................2附录A（资料性附录）辣椒品种抗疫病性鉴定结果记载表..................................5附录B（资料性附录）辣椒品种抗疫病鉴定结果汇总表....................................6DB52/T954—2014II前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化指导原则第1部分：标准的结果和编写》给出的规则起草。请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由贵州省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：贵州省植物保护研究所。本标准主要起草人：杨学辉、袁洁、陈小均、吴石平、何海永、王莉爽、谭清群。DB52/T954—20141辣椒品种抗疫病温室接种鉴定技术规程1范围本标准规定了辣椒抗疫病温室人工接种鉴定的术语和定义、用具和试剂、育苗及接种要求。本标准适用于贵州省辣椒品种及资源材料对辣椒疫病的温室人工接种抗性鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5084农业灌溉水质标准3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1辣椒疫病Pepperphytophthorablight由辣椒疫霉（PhytophthoracapsiciLeonian）侵染引起的植株根系、茎基部、茎枝分叉处变黑腐烂、枯死，果实变褐软腐、表面常有白色霉层等症状的辣椒病害。3.2抗病性鉴定Screeningfordiseaseresistance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。3.3分离物Isolate采用人工方法从植物发病部位分离获得，并经过回接确认的在特定环境条件下培养的病原物。3.4生理小种Physiologicalrace病原物种内在形态、生化性状上无明显差异，但在一组鉴别品种上具有显著致病力差异的类群。3.5人工接种Artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物适当部位并使之发病的过程。3.6DB52/T954—20142接种体Inoculum用于人工接种鉴定的病原物或病原物的一部分，本文件特指辣椒疫霉孢子囊悬浮液，其浓度为1.2×104个/ml。3.7灌根接种Irrigationrootinoculation用直径5mm的玻璃棒在距植株2cm处戳一小孔，将接种体注如孔内，每株灌入量3ml。3.8对照品种Controlvariety为检验试验结果的可靠性，在品种鉴定时附加的抗病品种和感病品种。3.9病情指数diseaseindex通过对植物个体病情级别的计算所获得的群体发病程度的数值化描述。4用具和试剂4.1用具冰箱、消毒锅、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、载玻片、试管、酒精灯、接种铲、光学显微镜、超净工作台、恒温生物培养箱、孔径规格为25mm×25mm×50mm的塑料泡沫漂浮育苗盘、直径7cm营养钵。4.2试剂10%Na3PO4、NaClO、(NH4)2SO4、K2SO4、普通过磷酸钙、青霉素、利福平、尿素、50%多菌灵可湿性粉剂。5育苗及接种5.1育苗方法参鉴品种（材料）育苗采用漂浮育苗盘育苗。辣椒种子用10%磷酸三钠溶液浸种20min，用清水洗净，置于28℃恒温培养箱中催芽。选取发芽良好的种子单粒播于装有育苗基质的漂浮育苗盘内。育苗盘用5%次氯酸钠溶液消毒，其规格为76cm×35cm×5.5cm、160孔/盘，育苗基质为泥炭、蛭石和膨化珍珠岩混合，各成分所占比例分别为60％～70％、15％～20％和15％～20％（V/V/V），基质经高温蒸汽灭菌（121℃，30min），播种后在辣椒种子上盖3mm左右的育苗基质，压实，然后将播种的漂浮盘放入营养液中。营养液配方为：每100kg清水加入50g硫酸铵、15g尿素、100g普通过磷酸钙、50g硫酸钾；配制营养液使用的清水应符合GB5084的蔬菜类灌溉水质要求。在18℃～25℃的自然条件下育苗。5.2移栽及处理辣椒苗4叶展平时单苗移栽到营养钵中，移栽后7天施一次1%尿素水溶液以保持辣椒苗长势旺盛。试验设3次重复，各材料顺序排列，每个重复每份材料10株苗，设感病和抗病品种对照。DB52/T954—201435.3接种体准备选取已分离鉴定属于不同生理小种的菌株回接到甜椒上复壮，待发病后从病果上直接挑取菌丝或切取一小块病组织置于选择性胡萝卜培养基（胡萝卜200g榨汁，琼脂18g，青霉素50mg/L，利福平100mg/L，50%多菌灵可湿性粉剂50mg/L，蒸馏水1L）上，25℃恒温培养3d～5d，转接到胡萝卜培养基上扩繁，待10d～15d产生孢子囊后，用消毒的毛笔和无菌水洗下孢子囊，过滤收集，将属于不同生理小种的菌株的孢子囊悬浮液混合，调整浓度为1.2×104个/ml。5.4接种5.4.1接种期辣椒苗6叶展平。5.4.2接种及管理接种前1d灌透水，接种时用玻璃棒在距幼苗茎基部约2cm处扎一深3cm左右的孔，用移液器吸取3mL含量为1.2×104/mL的孢子囊混合悬浮液注入孔中，置于温室中光暗交替培育。温室内白天为26℃～28℃，夜间为20℃～24℃，每天光照12h～14h，强度为15000Lux左右，空气相对湿度75%左右。接种及发病期间保持营养钵基质湿度至饱和。5.5病情调查5.5.1调查时间接种后7d～10d调查各级病株数，调查1次。5.5.2分级方法逐一调查每份材料的接种株，按照病情分级的症状描述记载病级，分级指标为：0级无病；1级幼苗茎基部轻微变黑，或个别叶片轻微萎蔫；3级幼苗茎基部变黑达lcm～2cm，或半数以下叶片萎蔫，下部少数叶片脱落；5级幼苗茎基部变黑超过2cm，或半数以上叶片萎蔫、落叶明显；7级幼苗茎基部变黑缢缩，除生长点外其余叶片全部萎蔫或脱落；9级叶片全部萎蔫或植株枯死。5.5.3病情指数病情指数（DI）按以下公式计算：100DI总株数表数值调查标准的昀高病级代该病级株数）（各级病级代表数值）病情指数（...................(1)5.6抗性评价5.6.1有效鉴定判定同批次鉴定中，感病对照品种的病情指数＞50，抗病对照品种病情指数＜10时视为该批次鉴定有效。5.6.2抗性评价标准根据参鉴材料的病情指数确定其对辣椒疫病的抗性水平并作出评价：DB52/T954—20144高抗（HR）：0＜DI≤5；抗病（R）：5＜DI≤10；中抗（MR）：10＜DI≤20；中感（MS）：20＜DI≤30；感病（S）：30＜DI≤50；高感（HS）：DI＞50。5.7鉴定记载表格辣椒品种抗疫病鉴定原始记录及结果记载表格见附录A、B，分析后作出品种抗性评价。DB52/T954—20145AA附录A（资料性附录）辣椒品种抗疫病性鉴定结果记载表播种时间：接种时间：调查时间：调查人：记录人：病级编号0级1级3级5级7级9级注：调查时根据调查标准逐株进行，用“正”字法进行记载。DB52/T954—20146BB附录B（资料性附录）辣椒品种抗疫病鉴定结果汇总表编号品种名称来源病情指数抗病性评价_________________________________DB52/T954-2014