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╳ICS65.020.20B21浙江省地方标准DB33/T594.2-2005草莓脱毒种苗第2部分：生产技术规程Virus-freeplantletsofstrawberryPart2:Technicalregulationsforproduction2005-12-12发布2006-01-12实施浙江省质量技术监督局发布DB33DB33/T594.2—2005I前言草莓脱毒种苗系列标准分为2个部分：——第1部分：脱毒种苗；——第2部分：生产技术规程。本部分为草莓脱毒种苗系列标准的第2部分。本部分由浙江省农业厅归口。本部分起草单位：浙江大学生物技术研究所。本部分主要起草人：毛碧增、娄沂春、李德葆、孔樟良、吴建祥。DB33/T594.2—20051草莓脱毒种苗第2部分：生产技术规程1范围本部分规定了草莓脱毒苗生产过程中的培育技术等要求。本部分适用于通过组织培养技术培育的不携带草莓斑驳病毒（Strawberrymottlevirus，SMoV）、草莓轻型黄边病毒（Strawberrymildyellowedgevirus，SMYEV）、草莓镶脉病毒（Strawberryveinbandingvirus，SVBV）和草莓皱缩病毒（Strawberrycrinklevirus，SCV）的草莓脱毒种苗的生产。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。DB33/T501.2-2004无公害草莓第2部分：生产技术准则DB33/594.1-2005草莓脱毒种苗第1部分：脱毒种苗3脱毒苗培育技术3.1脱毒组培瓶苗的培育技术3.1.1优良品种选择选择适宜当地栽培的高产优质品种。3.1.2草莓脱毒的主要方法3.1.2.1茎尖组织培养法3.1.2.1.1外植体选择采样最佳时间为6月~8月份晴天的中午，选择无病虫、品种纯正的健壮植株，切取带生长点的匍匐茎段2cm~3cm，用流水冲洗干净。3.1.2.1.2茎尖剥离将表面清洗过的外植体置于超净工作台上，用70％乙醇表面消毒1min，弃乙醇，加0.1％升汞和1滴Tween-20消毒8min~10min，并不断摇动，然后用无菌水冲洗5次~8次，用无菌滤纸吸干水分。再置于解剖镜下用解剖刀挑取0.2mm~0.3mm的茎尖，接种于茎尖诱导培养基中。3.1.2.1.3培养条件白天温度25℃±2℃，光照强度30μmolm-2s-1～60μmolm-2s-1；晚上温度18℃±2℃，黑暗培养。每天照光12h～16h。3.1.2.1.4组织培养快繁诱导培养至不定芽1.5cm～2.0cm时分株接种于增殖培养基。经病毒检测合格的试管苗在增殖培养基上增殖，增殖培养每20d～30d继代一次（总继代次数不超过8代），选2cm~3cm的小苗转入生根培养基进行生根培养。脱毒组培瓶苗质量要求按DB33/594.1-2005草莓脱毒种苗第1部分脱毒种苗执行。3.1.2.2花药组织培养法3.1.2.2.1外植体选择DB33/T594.2-20052摘取花萼未张开花粉母细胞处一单核期的花蕾，放入4℃冰箱中预处理1d～2d。3.1.2.2.2培养过程取预处理过的花蕾，在超净工作台上用70％～75%乙醇浸泡1min，再用0.1%升汞消毒5min～10min，并不断摇动，无菌水冲洗5次～10次，然后去除花萼、花托等，用无菌镊子夹取黄色花药接种到愈伤组织诱导培养基中。3.1.2.2.3愈伤组织培养条件暗培养，培养温度为25℃±2℃。3.1.2.2.4组织培养快繁诱导培养至致密愈伤组织直径为0.2cm左右时转入分化培养基中诱导芽分化，待分化成苗后，进行病毒检测，对合格的试管苗进行增殖，增殖培养每20d～30d继代一次（总继代次数不超过8代），选2cm～3cm的小苗转入生根培养基进行生根培养。脱毒组培瓶苗质量要求按DB33/xxx.1-2005草莓脱毒种苗第1部分脱毒种苗执行。3.2脱毒原原种苗、脱毒原种苗和脱毒生产用苗繁殖技术3.2.1脱毒原原种苗繁殖打开脱毒瓶苗的瓶盖，常温弱光照条件下驯化1天～2天后洗净琼脂，定植按照DB33/T501.2-2004的规定执行。3.2.2脱毒原种苗繁殖按照DB33/T501.2-2004的规定执行。3.2.3脱毒生产用苗繁殖按照DB33/T501.2-2004的规定执行。